融水小型猪F1代的血常规、血生化与电解质指标

刘 科，施赫赫，，陈 淦，邝少松，刘盛来，刘运忠，钟志勇，郭金彪，耿庆山，唐小江

(1．广东省医学实验动物中心，佛山 528248;2．广东贝格生物科技有限公司，佛山 510642;3．广州医药工业研究总院，广州 510240;4．佛山科技学院，佛山 528231;5．广东省医学科学院，广州 510060)

1 材料和方法

1.1 动物来源

F1代普通级融水小型猪85头，其中4月龄测定85头，雌性43头、雄性42头;12月龄猪测定36头，雌雄各半。由广东贝格生物科技有限公司(广东省医学实验动物中心小型猪研究基地)提供，实验动物及实验操作经过广东省医学实验动物中心伦理委员会批准。

1.2 动物饲养条件

饲养环境为普通级，湿帘通风系统和局部保温灯控制舍内温湿度，夏天温度控制在28℃ ～30℃，冬天温度控制在16℃ ～20℃。每天定时定量饲喂全价颗粒料，上下午各一次，自由饮水。

1.3 主要仪器

德国赛多利斯电子分析天平(BS223S)，上海安亭科学仪器厂生产的低速大容量离心机(TDL-5-A)，日本光电公司生产的全自动血球计数仪(CelltacE MEK-7222K)和意大利爱康公司生产的全自动血液生化分析仪(ECHO)，用激光计数法检验。

1.4 方法

1.4.1 血样采集

采血前禁食12 h，3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，前腔静脉取血，每只动物采血量为5 mL，用于血液生理生化指标的测定。

1.4.2 血常规、血生化与电解质指标的检测

使用真空采血管(EDTAK2抗凝剂)取4 mL全血，以全自动血球计数仪测定白细胞数(WBC)、中性粒细胞数(NE)、淋巴细胞数(LY)、单核细胞数(MO)、嗜酸粒细胞数(EO)、嗜碱粒细胞数(BA)、中性粒细胞比例(NE%)、淋巴细胞比例(LY%)、单核细胞比例(MO%)、嗜酸性粒细胞比例(EO%)、嗜碱性粒细胞比例(BA%)、红细胞数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞容积分布宽度(RDW)、血小板数(PLT)、血小板压积(PCT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)22项血常规指标。

使用真空采血管(促凝剂)取1 mL非抗凝血，离心分离血清，以全自动生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血清球蛋白(GLOB)、白蛋白/球蛋白(A/G)、总胆红素(TBIL)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、磷(P5+)、钙(Ca2+)、钾(K+)、钠(Na+)、氯(Cl－)等 22 项血生化、电解质指标。

1.4.3 统计方法

实验数据采用SPSS 21.0统计软件进行处理。所有测定值均以平均数(ˉx)和标准差(SD)表示，采用t检验，P ＜0.05作为差异显著性界值，P＜0.01作为差异极显著性界值。

2 结果

2.1 血常规

融水小型猪血常规指标测定结果见表1。同月龄雄性与雌性相比，血常规指标仅RDW有显著性差异(P＜0.05)。同性别12月龄与4月龄比较，雌性和雄性血常规 WBC、LY、MO、LY%、MO%、RDW、PLT指标均显著降低(P ＜ 0.05)，NE、EO、NE%、EO%、MCV、MCH、MPV、HCT 指标均显著升高(P ＜0.05);雌性的HGB、RBC指标显著升高(P ＜0.05)，其他指标差异不显著(P ＞0.05)。

表1 融水小型猪4月龄、12月龄血常规指标Tab．1 The blood parameters of Rongshui miniature pigs in the 4thmonth-old and 12thmonth-old

表2 4月龄、12月龄融水小型猪血生化、电解质指标Tab．2 The blood biochemical and electrolyte indices of Rongshui miniature pigs in the 4thmonth and 12thmonth

2.2 血生化与电解质

相同月龄的不同性别之间大部分指标差异较小，且大部分差别均在1个标准差之内(表2)。但是，相同性别的不同月龄之间的差异非常明显:在ALT、AST、ALP、CK、LDH 等 5 个酶学指标中，除雌性的CK、LDH差异无显著性外，12月龄雌性和雄性均显著低于4月龄(P＜0.05);在蛋白质代谢的4项指标，12月龄的总蛋白增加而白球比下降(P ＜ 0.01);在脂质代谢的 CHOL，TG，HDL-C，LDL-C等4个指标中，除雄性CHOL下降一个标准差，其他指标均变化不大。12月龄的TBIL、BUN均下降，而CR上升最为显著(P ＜0.01)，雌性GLU下降显著(P＜0.01)。电解质表现为血Ca2+上升，而血K+下降。

3 讨论

血常规、血清生化和电解质指标是病理学、生理学等研究中的重要参考依据［2］。本研究对4月龄及12月龄融水小型猪的血常规、血生化和电解质指标的测定，反映了幼年与成年融水小型猪的生理生化状态。由于影响动物实验效果的因素包括动物因素、饲养环境和营养因素、动物实验技术环节因素［3］，本研究在同一环境下、使用相同的饲料，采用同一种进行采血方法，并使用相同的检测仪器进行分析。

结果表明，相同月龄时，两性别的血常规指标、血生化和电解质的大部分指标差异不大，但不同月龄之间的部分指标差异明显。随着月龄的增加，融水小型猪的血常规指标中，白细胞数、淋巴细胞比例、血小板数下降，血红蛋白含量升高，而红细胞数变化不大。吴曙光等［4］对贵州小型猪研究也表明，在不同月龄段多数血液生化指标有显著差异(P＜0.05)。血生化指标中的5个酶(ALT、AST、ALP、CK、LDH)12月龄均下降;反应蛋白代谢功能的总蛋白上升，而白球比下降，提示细胞免疫增强;反应脂质代谢的4个指标差异很小，提示融水小型猪可能适合用于复制脂质代谢紊乱如高血脂症疾病模型。肌酐(CR)是反应肾功能的指标，总胆红素(TBIL)是反应胆汁代谢的指标，融水小型猪不同性别之间的差异很小，但12月龄的BUN和TBIL显著低于4月龄，这与人的情况非常相似。血清电解质的性别差异很小，12月龄的血钙升高而血钾下降，但变化均在1个标准差范围内。

融水小型猪是否适合作为人类疾病动物模型呢?为便于比较，我们参考国内外文献［5－10］，制作了表3和表4。表3可见，成年融水小型猪的白细胞数与哥廷根猪类似，比较接近人类，而4月龄融水小型猪的白细胞较高，与中国农大小型猪、西藏小型猪、五指山小型接近;在红细胞数方面，融水小型猪比另外4种小型猪均小，更接近人类。血红蛋白和血小板则与其他小型猪、比格犬和大鼠接近，在人类正常值范围内。

从表4可见，成年融水小型猪的绝大部分生化与电解质指标与人类正常值范围非常接近。其中22项生化、电解质指标中，有11.5项(AST、ALT、TP、ALB、A/G、BUN、CHOL、TG、雄性的 GLU、K+、Na+、Cl－)在人类正常值范围，占52.3%;另外7.5项指标(ALP、GLOB、TBIL、CR、HDL-C、LDH-C、雌性的GLU、Ca2+)非常接近人类正常值范围，占34.1%;两者合计达86.4%(1922)。另外3项指标(CK、LDH、P5+)也在人类正常值范围最大值的2.5倍以内。而哥廷根小型猪虽然大部分指标也在或接近人类正常值范围，占64.7%(1117)，3项指标(ALT、LDH、P5+)在人类正常值范围最大值的2.5倍以内，但有三项指标CK、TBIL、CR分别超过人类正常值范围最大值10倍、20倍、500倍以上，且其标准差特别大，不适合作为涉及心(CK)、肝(TBIL)、肾(CR)等相关指标的疾病模型。中国农大小型猪的大部分指标也在或接近人类正常值范围，占 66.7%(1218)，5 项指标(ALT、ALP、P5+，K+、雌性的AST、LDH-C)在人类正常值范围限值2倍以内，但CK超过人类正常值范围限值5倍以上，且检测除了雄性AST外，4个心肌酶均不在人类正常值范围。我们获得的西藏小型猪和五指山小型猪检测项目较少，大部分指标也在或接近人类正常值范围，但反映CK、GLU远低于人类。

总之，从本文获得的资料看，融水小型猪的血常规、血生化和电解质指标多数接近人类，数据标准差小，且月龄变化与人类相似，部分指标显著优于哥廷根等小型猪，提示融水小型猪具备培育成实验用小型猪的优越条件。

表3 融水小型猪与其他小型猪、犬、大鼠、人的血常规指标比较Tab．3 Comparison of blood parameters among Rongshui miniature pigs，dog，rat，human and other minipigs

表4 融水小型猪与其他小型猪、犬、大鼠、人的血液生化指标比较Tab．4 Comparison of blood biochemical indices among Beige miniature pigs，dog，rat，human and other minipigs

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