支原体肺炎患儿外周血Treg/Th17细胞平衡变化及临床意义*

熊远青 黄河 姚霖 王筱璐 唐碧莲 汤慧丽

支原体肺炎患儿外周血Treg/Th17细胞平衡变化及临床意义*

熊远青①黄河①姚霖①王筱璐①唐碧莲①汤慧丽①

目的：检测不同时期支原体肺炎（MPP）患儿外周血Treg细胞、Th17细胞及其相关细胞因子TGF-β、IL-10、IL-17和IL-6水平，观察其变化规律，探讨MPP急性期免疫失衡发病机制。方法：40例MPP患儿及20例非MP感染性支气管肺炎在急性期（发病＜2周）及病程4周时空腹抽取外周静脉血5 mL，使用流式细胞仪检测Treg细胞、Th17细胞的百分率，ELISA方法检测TGF-β、IL-10、IL-17和IL-6细胞因子水平，同时与20例健康体检儿进行比较。结果：急性期MPP组Treg细胞百分率低于正常对照组（P＜0.05）；病程4周时，MPP组Treg细胞百分率明显提高，MPP组TGF-β、IL-10水平低于非MP感染组及正常对照组（P＜0.05）。急性期及病程4周时，MPP组患儿Th17细胞百分率及IL-17、IL-6水平均高于非MP感染组和正常对照组患儿（P＜0.05）。结论：儿童MPP感染与免疫调节紊乱密切相关，急性期存在明显的免疫失衡，Treg/ Th17细胞失衡及其相关效应因子的表达在儿童MPP感染起到重要的作用。

肺炎支原体肺炎； Treg细胞； Th17细胞； 儿童

First-author’s address：Shenzhen Futian People’s Hospital，Shenzhen 518033，China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.36.020

肺炎支原体肺炎（MPP）近年来发病年龄明显提前，发病率增加且伴有广泛多系统的肺外并发症。研究认为MP感染与免疫有关，存在机体免疫反应、免疫逃逸、免疫调节、免疫抑制等。但MP感染的发病机理仍不十分清楚。虽然MP是呼吸道细胞外病原，但也存在于呼吸道细胞内，抗生素很难完全将其胞内菌清除消灭，如抗生素应用时间过短，治疗不彻底则容易复发。本研究通过检测不同时期MPP患儿外周血Treg细胞、Th17细胞及其分泌细胞因子IL-10、TGF-β、IL-17及IL-6水平，观察支原体肺炎患儿外周血Treg/Th17细胞平衡变化，探讨MPP急性期免疫失衡发病机制，为以后的免疫治疗提供理论依据，并对判断MPP感染的严重程度和预后有一定的指导意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年1月-2013年1月本院儿科收治的急性期MPP患儿40例为试验组，其中男21例，女19例，平均年龄（5.6±2.8）岁，病程2周以内，ELISA方法检测血清特异性MP-IgM，≥1∶160为阳性。诊断符合《诸福棠实用儿科学》（第7版，胡亚美等主编）诊断标准。阳性对照组：非MP感染支气管肺炎患儿20例（同期本院住院，采用15种呼吸道病原筛查及痰培养检查，排除混合感染）。正常对照组：健康体检儿20例（来自本院门诊并经家长同意），均无慢性病史，无哮喘史及过敏史，近2周内无感染病史及服用影响免疫药物。入选对象均排除先天性疾病、免疫缺陷及营养不良等。三组研究对象的一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 材料 TGF-β、IL-10、IL-17及IL-6 ELISA试剂盒（美国R&D公司）。抗人单克隆抗体（美国贝克曼 Beckman公司）。流式细胞仪、溶血制备仪（美国贝克曼库尔特公司），酶标仪（美国Thermo公司）。

1.3 标本采集、检测 MPP患儿在急性期（发病2周内）、病程第4周空腹抽取静脉血5 mL（EDTA抗凝）；非MP感染支气管肺炎患儿（发病7 d内）、正常对照组：采血2 mL，离心，-70 ℃冷冻备用。流式细胞仪检测Treg及Th17细胞的百分率，ELISA方法检测TGF-β、IL-10、IL-17及IL-6等细胞因子水平。

1.4 统计学处理 应用SPSS 15.0统计学软件进行数据分析，计量资料以（±s）表示，多组比较采用单因素方差分析，组间比较采用q检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Treg、Th17细胞的百分率 经检测，MPP组急性期Treg的细胞百分率低于正常对照组（P＜0.05），MPP组急性期与非MP感染组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。病程4周时MPP组和非MP感染组与急性期比较均有提高（P＜0.05）；在急性期和病程4周时MPP患儿的Th17细胞百分率均高于非MP感染组及正常对照组患儿（P＜0.05）；急性期非MP感染组患儿Th17细胞的百分率高于正常对照组（P＜0.05），病程4周时与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.2 血浆TGF-β、IL-10水平 急性期MPP组患儿TGF-β、IL-10水平低于非MP感染组及正常对照组（P＜0.05）；病程4周时MPP组及非MP感染组患儿TGF-β、IL-10水平均有明显提高（P＜0.05），但MPP组低于非MP感染肺炎组及正常对照组（P＜0.05），见表2。

表1 各组外周血Treg细胞、Th17细胞的比较（±s） %

表1 各组外周血Treg细胞、Th17细胞的比较（±s） %

*与正常对照组比较，P＜0.05；△与非MP感染组比较，P＜0.05

病程4周组别急性期TregTh17TregTh17正常对照组（n=20）7.92±1.782.32±0.477.83±1.782.32±0.47非MP感染组（n=20） 4.61±1.61*2.59±0.52*6.74±1.74*2.34±0.53 MPP组（n=20） 4.52±1.15*3.79±0.67*△5.62±1.39*△4.72±0.45*△F值31.2356.2218.0169.07 P值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.05

表2 各组外周血细胞因子TGF-β、IL-10表达水平的比较（±s） pg/mL

表2 各组外周血细胞因子TGF-β、IL-10表达水平的比较（±s） pg/mL

*与正常对照组比较，P＜0.05；△与非MP感染组比较，P＜0.05

IL-10组别TGF-β急性期病程4周急性期病程4周正常对照组（n=20）2127.12±396.092465.23±331.15124.15±16.13120.12±16.24非MP感染组（n=20） 1576.50±357.41*2198.11±437.43 113.64±18.41*126.02±19.29 MPP组（n=20） 1217.14±364.65*△1653.87±342.65*△91.68±8.21*△106.31±24.78*△F值1321.721134.23511.76334.17 P值＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05

2.3 血浆IL-17、IL-6水平 急性期及病程4周时MPP患儿IL-17、IL-6水平均高于非MP感染肺炎组和正常对照组（P＜0.05）；非MP感染肺炎组患儿IL-17、IL-6水平在急性期高于正常对照组（P＜0.05），病程4周时与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。病程4周时，MPP患儿IL-17、IL-6水平较急性期升高（P＜0.05），非MP感染肺炎组患儿IL-17、IL-6水平较急性期下降接近正常对照组（P＜0.05），见表3。

表3 各组外周血细胞因子IL-17、IL-6表达水平（±s） pg/mL

表3 各组外周血细胞因子IL-17、IL-6表达水平（±s） pg/mL

*与正常对照组比较，P＜0.05；△与非MP感染组比较，P＜0.05

IL-6组别IL-17急性期病程4周急性期病程4周正常对照组（n=20）56.25±12.1156.25±12.114.72±1.234.72±1.23非MP感染组（n=20） 59.24±12.46*57.08±11.28 9.54±2.37*4.76±1.21 MPP组（n=20） 77.71±11.13*△84.57±15.43*△18.17±5.71*△24.43±5.68*△F值445.67354.78235.16335.49 P值＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05

3 讨论

Treg细胞和Th17细胞在机体免疫和疾病发生中起着不同的作用。Treg细胞作为一种调节性T细胞在机体免疫系统中发挥着重要的免疫负调节功能，对维持机体免疫功能稳定起着重要的作用［1］。Th17细胞和Treg细胞具有共同的起源，像Thl细胞和Th2细胞一样，Th17细胞与Treg细胞在分化及其功能上呈互相抑制关系［2］。另外，Treg细胞不但可以促进Th17细胞的发育，而且可分化为Th17细胞，Treg细胞向Th17细胞的转化可能是机体的一个生理性调节机制［3］，正常状态下，Treg细胞可以调控机体自身免疫，发生感染时，其分泌的炎性细胞因子如IL-1β及IL-6，可诱导Treg细胞转化为Th17细胞，从而产生清除感染所必需的有力的免疫应答。

本研究显示，急性期MPP组患儿外周血Treg细胞百分率低于正常对照组（P＜0.05），IL-10、TGF-β水平低于非MP感染肺炎组及正常对照组（P＜0.05）。MPP急性期外周血Treg细胞数量及IL-10、TGF-β水平均明显降低，提示在MPP急性期Treg细胞的免疫抑制作用降低。Th17细胞百分率均高于非MP感染肺炎组和正常对照组（P＜0.05），在急性期及病程4周时，MPP患儿IL-17、IL-6水平均高于非MP感染肺炎组和正常对照组（P＜0.05），推测Th17细胞可能参与了MPP病理生理的发展过程。Th17和Treg细胞正常机体状态下两者相互制约，其免疫平衡有利于维持机体内稳态［4］。研究证实Th17/Treg免疫平衡与MPP的发生与发展密切相关［5］。

病程4周时MPP组Treg细胞的百分率与正常对照组比较有显著提高，而MPP组、非MP感染组Treg细胞的百分率仍低；MPP组及非MP感染组患儿TGF-β、IL-10水平有显著提高，MPP组低于非MP感染组及正常对照组。提示MPP急性期存在明显的免疫失衡，Treg细胞数量下降引起的免疫抑制功能下降，一方面可导致免疫失衡，而另一方面有利于免疫系统清除支原体。Treg细胞可通过调节宿主免疫应答和MP感染之间的平衡，参与MPP的发病机制，从而为MP感染的免疫治疗提供了新的思路。

MPP患儿病程4周时Th17细胞的百分率较急性期升高，IL-17、IL-6水平较急性期升高（P＜0.05），非MP感染肺炎组患儿Th17细胞百分率、IL-17、IL-6水平显著下降接近正常对照组。可能由于IL-17具有趋化炎性细胞的作用，可以连接固有免疫和适应性免疫［6］，Th17细胞在一些感染早期可能具有保护作用，而Th17细胞在一些感染早期可能具有保护作用，而一旦不能完全清除病原体，Th17细胞的这种炎性特征则有可能使感染进入慢性阶段，有关Th17细胞在一些病毒及细菌感染性疾病中也有研究报道［7］。

综上所述，儿童MPP感染与免疫调节紊乱密切相关，急性期存在明显的免疫失衡，Treg/Th17细胞失衡及其相关效应因子的表达在儿童MPP感染起到重要的作用。因此，MP感染不仅需要抗MP治疗，还应根据不同的临床表现和疾病进展情况，加强对免疫系统的调节和治疗；Treg细胞、Th17细胞及其相关效应因子可以用于MPP的辅助诊断和治疗监测。

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Changes and the Clinical Significance of the Balance of Treg/Th17 Cells in Peripheral Blood of Children with Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia

XIONG Yuan-qing，HUANG He，YAO Lin，et al//Medical Innovation of China，2015，12（36）：059-061

Objective： To observe the percentages of Treg cells and Th17 cells ， the levels of IL-10，TGF-β，IL-17 and IL-6 in peripheral blood of children with mycoplasma pneumoniae pneumonia and explore the role of them

Mycoplasma pneumoniae pneumonia； Th17 cell； Treg cell； Child

2015-09-04） （本文编辑：蔡元元）

国家继续教育发展中心课题项目（2013-065-06-12）；深圳市卫人委科研项目（201303162）

①广东省深圳市福田区人民医院 广东 深圳 518033

熊远青

in pathogenesis of MPP. Method： 40 children with MPP，20 children with non- MPP and 20 healthy children were enrolled.The percentages of Treg cells and Th17 cells in peripheral blood were detected by flow cytometer（FCM），and the levels of IL-10，TGF-β，IL-17 and IL-6 in plasma were determined by ELISA， at the same time， compared with 20 cases healthy children. Result： In the acute stag， The percentage of Treg cells in children with MPP were significantly lower than healthy infants（P＜0.05）. The percentage of Treg cells in the 4th week were significantly higher than those in the acute stag， the levels of IL-10 and TGF-βin children with MPP were significantly lower than those in children with non- MPP and healthy infants in the acute stag and the 4thweek（P＜0.05）. The percentage of Th17 cells and the levels of IL-17 and IL-6 in children with MPP were significantly higher than those in children with non- MPP and healthy infants in the acute stag and the 4thweek（P＜0.05），while the percentage of Th17 cells and the levels of IL-17 and IL-6 in children with non- MPP were significantly low in the 4thweek， it was not significant difference between the children with MPP and the children with non-MPP. Conclusion：There is markedly mimunoresponsiveness unbalance in acute phase of MPP. Treg cell ，Th17 cells， IL-10， TGF-β， IL-17 and IL-6 may be involved in pathogenesis of MPP.