外标法测定黄酒中β-苯乙醇的含量

赵阳 丁春燕 蔡良英

（德清县食品药品检验所，浙江德清313200）

·食品分析·

外标法测定黄酒中β-苯乙醇的含量

赵阳*丁春燕 蔡良英

（德清县食品药品检验所，浙江德清313200）

β-苯乙醇是稻米类黄酒在发酵过程中产生的特征性物质，是稻米类黄酒中重要的营养指标。GB/T 13662—2008黄酒标准中，按产品风格将黄酒分为传统型黄酒、清爽型黄酒和特型黄酒，其中规定传统型稻米类黄酒β-苯乙醇至少不低于40.0 mg/L，清爽型黄酒β-苯乙醇至少不低于30.0 mg/L。

现有的β-苯乙醇检测方法有气相色谱法、气质联用法、高效液相色谱法和紫外分光光度法等。GB/T 13662—2008中采用直接进样气相色谱内标定量法测定。实际操作中，由于黄酒样品含有大量焦糖、色素等，未经前处理直接进样易对衬管、毛细管柱造成污染，且内标的峰形差，定量误差大。因此本文研究了通过氯化钠盐析、正己烷萃取黄酒中的β-苯乙醇后用气相色谱仪外标法定量。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

气相色谱仪，美国Agilent 7890A型气相色谱仪，Openlab在线、离线数据工作站，配自动进样器和FID检测器，载气为高纯N2（纯度99.999%），燃气为H2（纯度99.9%），助燃气为高纯空气（纯度99.999%）；低速离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；氮吹仪，Oranomation Associates，Jnc。

β-苯乙醇，纯度≥98.3%，正己烷，国药集团化学试剂有限公司，光学纯；氯化钠，江苏强盛功能化学股份有限公司，分析纯。

黄酒样品，购于本地超市。

1.2 色谱参数

进样口温度：230℃；分流模式：分流比2∶1；HP-INNOWax色谱柱：30m×0.32mm×0.25 μm；柱流量：2 mL/min；程序升温模式：120℃保持2 min，以25℃/min升温到210℃，保持5 min；检测器温度：280℃；H2流量：30 mL/min；空气流量：300 mL/min；尾吹气流量（N2）：25 mL/min；进样量：1.00 μL。

1.3 标准溶液的配置

准确称取0.250 0 gβ-苯乙醇，用正己烷定容至50 mL为储备液。临用前，用正己烷逐级稀释至0.5 mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0 mg/L、100.0 mg/L。

1.4 样品的测定

准确移取2 mL样品，置于10 mL具塞离心管，加入1.5 g氯化钠和3 mL正己烷，剧烈振摇30 s后，以6 000 r/min离心1 min，转移上层萃取液于10 mL刻度试管，下层溶液用6 mL正己烷重复萃取2次，合并上层萃取液。

将萃取液置于氮吹仪上，50℃下氮吹蒸发至少于5 mL后，用正己烷定容至5 mL，略静置后装入进样小瓶待测。

吸取1.00 μL待测溶液进样，以β-苯乙醇的保留时间定性，外标法定量。

2 数据与结果

2.1 样品色谱图

将处理好的黄酒样品注入气相色谱仪测定，以标准品保留时间定性，确定5.613 min色谱峰为β-苯乙醇。β-苯乙醇标准色谱图见图1，黄酒样品中β-苯乙醇色谱图见图2。

图1 β-苯乙醇标准品色谱图

图2 黄酒样品中β-苯乙醇色谱图

2.2 线性范围

将不同质量浓度的标准溶液注入气相色谱仪分别测定，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标建立标准曲线。试验结果表明，β-苯乙醇在0.513 2 mg/L～102.6 mg/L范围内线性良好。

线性回归方程为y=5.332 95x-2.369 00，R2= 0.999 9，可满足日常黄酒样品测定的需要。

2.3 检出限和定量限

将0.030 79 mg/L和0.205 3 mg/L标准溶液注入气相色谱仪分别测定，得到平均信噪比分别为S/N＝3.25，S/N=11.7，确定本方法的检出限（S/N＝3）为0.075 mg/L，定量限（S/N＝10）为0.500 mg/L。

2.4 精密度试验

对同一样品重复测定6次，测定值分别为50.06 mg/L、50.46 mg/L、50.31 mg/L、50.68 mg/L、50.48 mg/L、50.46 mg/L，RSD为0.41%。

2.5 回收率试验

对本方法进行加标回收率考察，结果见表1。

表1 黄酒样品中β-苯乙醇加标回收率

2.6 样品测定结果

按本方法测定了11个黄酒样品，结果分别为39.03 mg/L、71.58 mg/L、74.77 mg/L、70.14 mg/L、49.88 mg/L、54.02 mg/L、53.74 mg/L、52.11 mg/L、82.08 mg/L、72.68 mg/L、70.77 mg/L，结果均符合标准限量值要求。

3 讨论与总结

3.1 样品前处理的选择

GB/T 13662—2008中样品采用加入内标2-乙基正丁酸后直接进样的方式，试验中发现该内标物在HP-INNOWax色谱柱上峰形较差，也有文献报道考虑到内标的不稳定性而选择外标法直接定量，但无论哪种定量方式皆为样品直接进样。由于黄酒中糖类和色素含量较高，乙醇含量较低（一般在15%以下），对衬管和毛细管色谱柱伤害较大，因此综合考虑，试验采用了正己烷提取后进样，可有效避免上述问题。

3.2 提取溶剂的选择

陈虹等考察了正己烷、正庚烷、正辛烷的萃取回收率，以正己烷最高（87.04%），考虑到正己烷的强挥发性对紫外分光光度法测定的影响较大，而改用正庚烷。但在气相色谱中，样品溶液均装于进样小瓶密封保存，此因素影响不大，且正己烷为色谱常用溶剂之一，综合考虑，本试验选用了正己烷为萃取溶剂。

3.3 萃取方式的改进

在尹桂豪等采用正己烷直接萃取β-苯乙醇的方式基础上，加入了氯化钠盐析，显著提高了正己烷的萃取效率，回收率达到了96.93%～100.81%，并使萃取液总体积控制在10 mL以下，通过氮吹浓缩定容的方式批量操作，更简便快捷。

3.4 总结

本试验利用了正己烷萃取黄酒样品中的β-苯乙醇后用气相色谱法来外标定量，避免了直接进样对衬管、毛细管柱造成的污染；通过加入氯化钠盐析，显著提高了萃取效率和方法的加标回收率，减少了萃取溶剂的使用量；选择用氮吹定容，为试验室的批量操作提供了方便。试验结果表明，该方法在0.50 mg/L～100.00 mg/L的范围内，线性相关系数良好，相对标准偏差小，回收率高，检出限低，方法准确可靠。

［1］中国食品发酵工业研究院，浙江省轻工业研究所，浙江古越龙山绍兴酒股份有限公司，等.GB/T 13662—2008黄酒［S］.北京：标准出版社，2008：1-19.

［2］黎军，吴嘉碧，陈侣平，等.气相色谱-质谱法测定豉香型白酒中β-苯乙醇及3种二元羧酸的二乙酯［J］.理化检验(化学分册)，2008，44（9）：883-884.

［3］诸葛庆，李博斌，郑云峰，等.反相高效液相色谱法测定黄酒中的β-苯乙醇［J］.食品科学，2009，30（14）：175-177.

［4］陈虹，梅建凤，陈蔚青.紫外分光光度法测定发酵液中的2-苯乙醇含量［J］.食品与发酵工业，2007，33（4）：134-136.

［5］李家寿.黄酒色、香、味成分来源浅析［J］.酿酒科技，2001（3）：48-50.

［6］张倩，寻思颖，冯永渝，等.用气相色谱法测定饮料酒中β-苯乙醇含量的探讨［J］.中国酿造，2012，31（7）：149-151.

［7］尹桂豪，吴月仙，章程辉，等.气相色谱法测定黄酒中β-苯乙醇的含量［J］.中国酿造，2008（17）：74-75.

Externalstandard method ofdeterm ination of β-phenylethanolcontent in Chinese-rice w ine

ZHAOYang*DINGChunyan CAI Liangying
（Deqing institute for food and drug control，Zhejiang Deqing 313200，China）

建立了毛细管气相色谱法测定黄酒中的β-苯乙醇含量。采用氯化钠盐析，正己烷萃取黄酒中β-苯乙醇，经氮吹浓缩定容后，采用HP-INNOWAX毛细管柱分离，FID检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。该方法的线性范围为0.513 2 mg/L～102.6 mg/L，R2=0.999 9（n=7），检出限（S/N＝3）0.075 mg/L，定量限（S/N＝10）为0.50 mg/L，相对标准偏差（RSD）0.41%（n=6），回收率96.93%～100.81%。

盐析；正己烷提取；外标法；气相色谱法；β-苯乙醇

The detection method of the β-phenylethanol content in Chinese-rice wine with capillary gas chromatography is established.The β-phenylethanol was detected by HP-INNOWAX gas chromatography column and FID detector after β-phenylethanol in Chinese-rice wine was extracted with hexane by salting out with sodium chloride and concentrated by nitrogen-blow.Qualitative analysis was achieved by retention time and quantitative analysis was obtained byexternal standard method.The linear calibration curve is from 0.5132 mg/L to102.6 mg/Lwith a correlation of 0.999 9（n=7）;The detection limit（S/N=3）is 0.075 mg/L，the quantitative limit（S/N=10）is 0.50mg/L；The relative standard deviation（RSD）is 0.41%（n=6）and the recovery rate are between 96.93%and 96.93%.

salt out；hexane extraction；external standard；gas chromatography；β-phenylethanol

TS262.4

A

1673-6044（2015）04-0061-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2015.04.017

*赵阳，男，1988年出生，2010年毕业于中国药科大学中药学专业，质量工程师。

2015-09-17