3种茶抗氧化性的研究

杨莉莉，侯冬岩，回瑞华

(1．辽宁师范大学化学化工学院，辽宁大连116029;2．鞍山师范学院化学与生命科学学院，辽宁鞍山114007)

茶叶中的茶多酚，是极强的消除有害自由基的天然物质［1，2］，其抗氧化性能比BHA、BHT、维生素E要优越，可达L-抗坏血酸的100倍［3］，是目前发现和利用的天然理想的抗氧化剂［4］．氧自由基吸收能力法(oxygen radical absorbance capacity，ORAC)是目前国际上正在采用评价总抗氧化能力的最新方法，现已经成为美国农业部、美国卫生院、FDA评价食品抗氧化能力的重要标准．美国、欧洲、日本等国家的食品、功能食品企业普遍采用ORAC作为功能食品的重要评价标准．月光白茶为白茶，碧云仙茶为野生绿茶，沉香茶为运用珍贵的药材沉香木的鲜叶通过现代科技手段与茶叶一起加工而成，本研究通过对3种茶类样品抗氧化能力进行评价研究，以期为茶叶保健功效的评价提供数据支持，为人们正确认识茶叶保健功效提供科学指导．

1 实验部分

1．1 仪器与试剂

1．1．1 主要仪器 Cary Eclipse荧光分光光度计(美国Varian公司);RE-52C型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司);HX-200A型高速中药粉碎机(浙江省永康市溪岸五金药具厂);202-2A型数显电热恒温干燥箱(上海阳光实验仪器有限公司);AL 204电子天平(梅特勒-托利多公司(上海)有限公司)．

1．1．2 试剂 乙酸乙酯(分析纯，天津市博迪化工有限公司);无水乙醇(分析纯，天津利安隆博华医药化学有限公司);磷酸氢二钠、磷酸二氢钠(分析纯，沈阳市试剂三厂);苯甲酸(分析纯，沈阳试剂厂);过氧化氢(30%，国药集团化学试剂有限公司)．

1．1．3 样品 沉香茶、碧云仙、月光白．

1．2 溶液的制备

1．2．1 pH=7．00 的 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液

0．2 mol/L NaH2PO4溶液:用蒸馏水将7．81 g NaH2PO4溶解，转移至250 mL容量瓶中，定容，摇匀，备用;

0．2 mol/L Na2HPO4溶液:用蒸馏水将35．51 g Na2HPO4溶解，转移至500 mL容量瓶中，定容，摇匀，备用．

将这两种溶液按照39∶61的比例混合即为pH=7的磷酸盐缓冲溶液．

1．2．2 0．08 mol/L的苯甲酸溶液 准确称量2．44 g苯甲酸固体粉末，用蒸馏水将其溶解并定容在250 mL容量瓶中，摇匀，备用．

1．2．3 4．74×10－3g/mL 的 Co2+溶液 称取 0．474 0 g 六水合氯化钴，用水溶解，转至 100 mL 容量瓶中，定容，摇匀，备用．

1．3 样品处理

称取0．45 mm筛的样品粉末1．00 g于锥形瓶中，加入25 mL蒸馏水．超声15min，抽滤后，滤渣加入25 mL蒸馏水．超声15 min，抽滤．将滤纸上的不溶物在60℃下烘干．向烘干后的不溶物中加入25 mL乙酸乙酯，超声15 min，滤渣加入25 mL乙酸乙酯，超声15 min，合并两次滤液，于旋转蒸发仪中浓缩溶液，浓缩液用无水乙醇定容到100 mL容量瓶中，所得即为样品中脂溶性成分的溶液．

1．4 实验方法

体系1:将0．08mol/L苯甲酸溶液10mL加入25mL的比色管，用pH=7．0的磷酸盐缓冲溶液定容，摇匀．

体系2:在25mL的比色管中加入0．08mol/L的苯甲酸10mL溶液，再依次加入4．74×10－3g/mL的Co2+0．1 mL和0．3 mL30%的过氧化氢，用pH=7．0的磷酸盐缓冲溶液定容至25 mL，摇匀．

体系3:在一系列25 mL的比色管中加入10 mL苯甲酸溶液，再依次加入体系2的样品液0．5 mL和0．1 mL的Co2+和0．3 mL30%的过氧化氢，用pH=7．0的磷酸盐缓冲溶液定容，摇匀．

将以上3个体系的溶液于沸水浴中放置45 min后，室温下静置5 min，于荧光仪上分别测定各溶液的荧光强度．

1．5 激发和发射波长的确定

按1．4试验方法，分别扫描体系2中苯甲酸溶液和体系3中样品溶液的激发波长和发射波长，所得的荧光光谱如图1～2所示．

由图1～2可知，苯甲酸的最大激发和发射波长分别为312 nm，408 nm;样品溶液的最大激发和发射波长为312 nm，408 nm．

2 结果与分析

2．1 影响荧光强度单因素实验

2．1．1 缓冲溶液的选择 分别配置 pH 为 5．0，6．0，7．0，8．0，9．0 的磷酸盐缓冲溶液，按 1．4 实验方法，测得各溶液的荧光强度，实验结果见表1．

表1 不同缓冲溶液的荧光强度数据

结果表明，当磷酸盐缓冲溶液的pH为7时，荧光强度最强．因此本实验选择磷酸盐缓冲溶液的pH为7时进行测定．

2．1．2苯甲酸浓度的选择 分别配置 0．02，0．05，0．08，0．11，0．14 mol/L 的苯甲酸溶液，按 1．4 实验方法，测得各溶液的荧光强度，实验结果见表2．

表2 不同苯甲酸浓度的荧光强度数据

结果表明，在实验过程中，随着苯甲酸浓度的升高，产物的荧光强度逐渐增大，而当苯甲酸浓度超过0．08 mol/L时，产物的荧光完全达到饱和，这说明苯甲酸过量了．因此本实验选择当苯甲酸浓度为0．08 mol/L时进行测定．

2．1．3 过氧化氢用量对荧光强度的影响 分别移取 0．1，0．2，0．3，0．4，0．5，0．6，0．7 mL30%的过氧化氢，按1．4实验方法，测得各溶液的荧光强度，实验结果见表3．

表3 不同过氧化氢用量的荧光强度数据

结果表明，当过氧化氢的用量小于0．3 mL时，随着过氧化氢用量的增大，荧光强度也在增加，当过氧化氢的用量大于0．3 mL时，荧光强度逐渐减小，这是因为过氧化氢浓度过大时存在自分解效应．因此，本实验选择氧化剂30% 过氧化氢的用量为0．3 mL．

2．1．4 Co2+浓度的影响 分别移取 1．4 的 Co2+溶液 0．01，0．05，0．1，0．2，0．3 mL，按 1．4 实验方法，测得各溶液的荧光强度，并扫描溶液的激发波长和发射波长，实验结果见表4．

表4 不同Co2+浓度荧光强度数据

结果表明，Co2+浓度适量增大，产物的荧光强度逐渐增大，但Co2+浓度大于4．74×10－4g/mL时，虽然荧光强度继续增大，但总体的影响但不太显著，而且，当Co2+浓度为4．74×10－4g/mL时，杂峰的荧光强度最低，因此本实验选择 1．2 的 Co2+溶液 0．1 mL，即 Co2+浓度 4．74×10－4g/mL 时进行测定．

2．2 方法稳定性

按1．4实验方法，将体系2的溶液于沸水浴中分别放置15，25，35，45，55 min，分别测定各溶液的荧光强度，实验结果见表5．

表5 稳定性实验数据

由表5可得，该试验方法在45～55min时，荧光强度基本不变，实验方法稳定，因此本实验选择体系的溶液于沸水浴中放置45 min后，室温下静置5 min，于荧光仪上分别测定各溶液的荧光强度

2．3 样品对羟基自由基的抑制率的计算

根据1．4实验方法所得的荧光强度数据，按照以下公式［5］计算样品对羟基自由基的清除率:

清除率 =［1－(Ii－Ib)/(Ij－Ib)］×100%，其中，Ii—体系3(加样品后的钴离子-过氧化氢溶液);Ij—体系2(加样品前的钴离子-过氧化氢溶液);Ib—体系1(只有苯甲酸的溶液)．

2．4 荧光法的测定结果

样品溶液对羟基自由基的清除率:在1．4的实验方法下，测定各个样品溶液的荧光强度，每个样品溶液测定3次，取其平均值，在2．3计算方法下得到样品溶液对羟基自由基的清除率，列于表6．

表6 样品溶液对羟基自由基的清除率

3 结论

综上所述，3种茶类样品中对羟基自由基的清除率由大到小顺序依次为:月光白—沉香茶—碧云仙，即抗氧化性月光白茶最强，这是由于白茶独特的制作工艺，特点是既不破坏酶的活性，又不促进氧化作用，因此，抗氧化性较其它茶类较强．沉香茶发挥了沉香的药物功效又保全了茶叶的功效，长期饮用能防病抗衰老，增强体质，是一种不可多得、适合饮用的绿色饮品．有研究表明，沉香茶能明显改善心脑血管方面衰老状态(动脉硬化、冠心病、心律失常、高血压、高血脂、脑中风等)，并能有效清除体内垃圾，防止疾病发生．碧云仙茶为野生养生茶，抗氧化性较弱．

［1］侯冬岩，回瑞华，刁全平，等．岩茶大红袍的抗氧化性能分析［J］．鞍山师范学院学报，2012，14(2):16－19．

［2］侯冬岩，回瑞华，刘晓媛，等．红茶茶多酚及抗氧化性能测定［J］．食品科学，2005，26(8):367－371．

［3］侯冬岩，回瑞华，唐蕊，等．普洱茶茶多酚及清除·OH 能力的研究［J］．食品科学，2006，27(10):165－168．

［4］回瑞华，侯冬岩，刘晓媛，等．绿茶及其饮料中茶多酚的光谱分析及抗氧化性能测定［J］．卫生研究，2005，34(6):752－754．

［5］Osawa T，NamikiM．A novel type of antioxidant is olated from leafwax of Eucalyptus leaves［J］．Agricultural Biology Chemistry，1981，45(3):735－739．