乙型肝炎患者血清HBV cccDNA与肝组织HBV cccDNA、血清HBV DNA的关系及意义

张房英 吴启文 赖小丽 熊晓英 姚叶萍 黄莉美

·临床与基础研究·

乙型肝炎患者血清HBV cccDNA与肝组织HBV cccDNA、血清HBV DNA的关系及意义

张房英 吴启文 赖小丽 熊晓英 姚叶萍 黄莉美

目的 探讨乙型肝炎患者血清HBV共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）与肝组织HBV cccDNA、血清HBV DNA的关系及意义。方法 从本院2011年9月～2013年9月收治的乙型肝炎患者中随机选择69例进行研究。结果 15例肝组织及其血清标本中，HBV cccDNA阳性检出率方面，血清标本显著低于肝组织，经比较差异有统计学意义，（χ2=7.13，P＜0.05）。肝组织HBV cccDNA和血清中HBV cccDNA水平以及血清HBV DNA水平之间均呈正相关关系，（r=0.62，r=0.72，均P＜0.05）。随着HBV DNA水平的升高，血清HBV cccDNA拷贝数呈现出不断增大的情况，二者水平之间呈正相关关系（r=0.82，P＜0.05）。69例血清标本中，HBV DNA≥105拷贝/m L的高水平组的血清HBV cccDNA阳性检出率达到96.6%，显著高于HBV DNA水平较低组（103拷贝/m L≤HBV DNA＜1×105拷贝/m L）经比较差异有统计学意义，（χ2=6.27，P＜0.05）。69例乙型肝炎患者血清标本中，随着病程的不断进展，HBV cccDNA检出率呈现出不断上升的情况，其中肝癌组的检出率最高，不同病程之间的阳性检出率比较均有统计学意义，（均P＜0.05）。结论 乙型肝炎血清HBV cccDNA可间接反映出患者肝组织内的HBV cccDNA情况，与HBV DNA之间具有显著的相关性，且与病程有关。

乙型肝炎；HBV cccDNA；HBV DNA；血清；肝组织

乙型肝炎患者在感染HBV之后，在其肝细胞核内可以检测到一种特殊的病毒DNA，即cccDNA［1］。临床研究发现，乙型肝炎患者血清和肝组织HBV cccDNA含量之间具有一定的相关性［2］。研究中，笔者即对乙型肝炎患者血清HBV cccDNA与肝组织HBV ccc DNA、血清HBV DNA的关系及意义进行分析，现报道如下。

资料和方法

一、一般资料

从本院2011年9月～2013年9月收治的乙型肝炎患者中随机选择69例进行研究，其中男39例，女30例，年龄37～81岁，平均年龄（49.1±2.6）岁。所有患者均经临床诊断，确诊为乙型肝炎。研究获得医学伦理学相关部门同意，所有患者均了解研究相关情况，并签署知情同意书，自愿参与研究。

二、方法

抽取所有患者的清晨空腹静脉血送检，对患者进行肝组织活检，并妥善保存标本。利用FQ-PCR技术对患者的肝组织及血清标本进行HBV cccDNA以及血清HBV DNA进行定量PCR检测。

三、统计学方法

研究所得数据均输入Excel表格，建数据库，并使用SPSS公司推出的SPSS 15.0软件进行统计分析，研究所得计数资料均进行χ2检验，计量资料均进行t检验，并以进行表示。并对P 值进行检测，如果可得P小于0.05，则视为差异有统计学意义。

结 果

一、肝组织和血清HBV cccDNA检出率比较

15例肝组织及其血清标本中，HBV cccDNA阳性检出率方面，血清标本显著低于肝组织，经比较差异有统计学意义，（χ2=7.13，P＜0.05）。具体结果如表1所示。

表1 肝组织和血清HBV cccDNA检出率分析

二、肝组织HBV ccc DNA水平与血清HBVcccDNA、HBV DNA及HBs Ag的相关分析

经统计，肝组织HBV ccc DNA和血清中HBV cccDNA水平以及血清HBV DNA水平之间均呈正相关关系，（r=0.62，r=0.72，均P＜0.05）。

三、血清HBV DNA水平与HBV cccDNA水平的相关性分析

对血清HBV cccDNA与HBV DNA分布的散点图（见图1）进行分析可以发现，随着HBV DNA水平的升高，血清HBV cccDNA拷贝数呈现出不断增大的情况，二者水平之间呈正相关关系（r=0.82，P＜0.05）。

图1 血清HBV cccDNA与HBV DNA分布的散点图

四、不同HBV DNA水平组血清HBV cccDNA检出率比较

经统计，在69例血清标本中，HBV DNA≥105拷贝/m L的高水平组的血清HBV cccDNA阳性检出率达到96.6%，显著高于HBV DNA水平较低组（103拷贝/m L≤HBV DNA＜1×105拷贝/m L）经比较差异有统计学意义，（χ2=6.27，P＜0.05）。具体结果如表2所示。

表2 不同HBV DNA水平组血清HBV cccDNA检出率分析

五、肝患者不同病程进展间血清HBV cccDNA检出率比较

69例乙型肝炎患者血清标本中，随着病程的不断进展，HBV cccDNA检出率呈现出不断上升的情况，其中肝癌组的检出率最高，不同病程之间的阳性检出率比较均有统计学意义，（均P＜0.05）。具体结果如表3所示。

表3 肝患者不同病程进展间血清HBV cccDNA检出率分析

讨 论

在乙型肝炎HBV病毒的整个生活周期中，cccDNA的形成发挥着十分重要的作用。乙型肝炎治疗只有清除了细胞核内的cccDNA，才能彻底消除乙型肝炎患者病毒携带状态［3，4］。目前通过抽血化验检测出外周血单个核细胞内和肝组织的HBVcccDNA，这样可以避免和克服以往乙型肝炎病毒指标检测的局限性，cccDNA检测是目前诊断乙型肝炎病情和判断疗效最有潜力和价值的指标［5，6］。

临床可以用来检测是否感染HBV，HBV cccDNA的形成会对乙型肝炎病毒的复制、感染等产生较大的影响［7］。如果肝细胞中还存在HBV cccDNA，那么HBV病毒便不会停止复制。因此，临床可以通过肝组织活检的方式来对乙型肝炎患者肝组织中的HBV cccDNA水平的变化情况进行检测［8］。从而更好的了解患者体内HBV感染、复制情况，更好的评估患者的病情和治疗效果等。本研究结果显示，15例肝组织及其血清标本中，HBV cccDNA阳性检出率方面，血清标本显著低于肝组织。即提示，较之血清HBV ccc DNA检测，肝组织HBV cccDNA检测可以更加准确的评价HBV的感染情况［9］。本研究结果还显示，肝组织HBV cccDNA和血清中HBV cccDNA水平以及血清HBV DNA水平之间均呈正相关。随着HBV DNA水平的升高，血清HBV cccDNA拷贝数呈现出不断增大的情况，二者水平之间呈正相关关系［10］。即提示，血清HBV cccDNA可以间接地反映患者肝组织内HBV cccDNA的情况。结果还发现，69例血清标本中，HBV DNA≥105拷贝/m L的高水平组的血清HBV cccDNA阳性检出率达到96.6%，显著高于HBV DNA水平较低组（103拷贝/m L≤HBV DNA＜1× 105拷贝/m L）经比较差异有统计学意义。即说明，高水平复制状态离不开高浓度模板，而高水平HBV DNA会伴随高浓度HBV cccDNA［11］。同时，本研究69例乙型肝炎患者血清标本中，随着病程的不断进展，HBV cccDNA检出率呈现出不断上升的情况，其中肝癌组的检出率最高，不同病程之间的阳性检出率比较均有统计学意义。即提示，HBV cccDNA可能会与患者的病情活动以及肝细胞破坏等伴随出现。对于未出现症状的HBV携带者，如果病情长期处于稳定状态，肝细胞未出现明显损伤，则较难检测到HBV cccDNA。如果患者的病情出现恶化，肝细胞内容物会大量释放，肝细胞核中的HBV cccDNA便会大量释放到血液中，较易临床监测［12］。

综上所述，乙型肝炎血清HBV cccDNA可间接反映患者肝组织内的HBV cccDNA情况，与HBV DNA之间具有显著的相关性，且与病程有关。

1 陶晨，叶伟.乙型肝炎病毒感染患者血清cccDNA检测及其临床应用.肝脏，2012，17：132-134.

2 刘志红，江建宁，李华东，等.核苷（酸）类似物对乙肝患者肝细胞内HBV cccDNA和tDNA及血清HBs Ag的影响研究.中国全科医学，2012，15：865-867.

3 Nebbia G，Peppa D.Maini M K Hepatitis B infection：eurrent eoncepts and future challenges.QJM，2012，105：109-113.

4 李忠斌，任晓强，刘妍，等.血清病毒检出核苷（酸）类似物耐药突变的慢性乙肝患者PBMCs中HBV cccDNA基因突变特点分析.解放军医学杂志，2012，37：556-560.

5 杨晓瑞，吴学炜，臧利敏，等.HBV cccDNA SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法的建立及初步应用.现代预防医学，2012，39：4200-4204.

6 Thompson A J.Serum hepatitis B surface antigen and hepatitis B eanligen tilers：disease phase influences correlation with viral load and intrahepalic hepatitis B virus nmrkers.Hepatology，2010，51：1933-1944.

7 Ying C，Johnny S，He ML.HBV cccDNA patients’sera as an indicator for HBV reactivation and an early signal of liver damage. world J Gastroenterol，2004，10：82-85.

8 许春海，李兆申，代俊英，等.单核细胞乙型肝炎病毒ccc DNA检测方法及应用价值.中华实验和临床病毒学杂志，2011，25：307-309.

9 肖晓光，李艳莲，王晶，等.乙型肝炎患者外周血单个核细胞HBV cccDNA含量的检测及其临床意义.大连医科大学学报，2010，32：348-351.

10 宋闽宁，黄文琪，闵峰，等.HBV感染恢复期血清标志物与肝细胞HBV cccDNA检测对照.中西医结合肝病杂志，2012，22：334-336.

11 王美容，邱宁，卢实春，等.肝组织中HBV cccDNA荧光定量聚合酶链反应检测法的建立.中华流行病学杂志，2011，32：504-509.

12 盛慧萍，杨岩，赖雅芳，等.慢性乙型肝炎患者肝组织中HBV ccc DNA定量与病情的相关性分析.山东医药，2010，50：12-14.

2014-08-26）

（本文编辑：冯珉）

511300 广东，增城市人民医院感染科（张房英，吴启文，赖小丽，熊晓英，姚叶萍），内三科（黄莉美）