硝酸咪康唑乳膏中防腐剂测定方法的建立

刘燕

（陕西省榆林市药品检验所，陕西榆林719000）

硝酸咪康唑乳膏中防腐剂测定方法的建立

刘燕

（陕西省榆林市药品检验所，陕西榆林719000）

目的建立测定硝酸咪康唑乳膏中防腐剂含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.05 mol/L磷酸二氢钾-乙腈（72∶28）为流动相，检测波长为235 nm。结果苯甲酸、山梨酸、羟苯乙酯的检出限分别为4.77，5.26，10.24 ng，进样量线性范围分别12.5～200 μg，5～80 μg，25～400 μg，相关系数分别为0.999 96，0.999 97，0.999 91（n=6）。结论该方法操作简单、重复性好、检测结果准确，能更好地检测硝酸咪康唑乳膏中防腐剂的含量。

硝酸咪康唑；防腐剂；高效液相色谱法；含量

硝酸咪康唑为咪唑类广谱抗真菌药，对许多临床致病真菌如白色念珠菌、新生隐球菌、芽生菌、球孢子菌、拟酵母菌等深部真菌和一些表皮真菌及酵母菌等均有良好的抗菌作用，还对葡萄球菌、链球菌和炭疽杆菌等革兰阳性菌有抑菌作用［1-3］。硝酸咪康唑乳膏作为外用多剂量制剂，生产厂家为确保产品的稳定性，往往会添加不同种类和剂量的防腐剂。本研究中收集了市场上37家生产企业的产品，建立了能同时测定硝酸咪康唑乳膏中可能添加的3种防腐剂的高效液相色谱（HPLC）法，为更好地控制产品质量提供了有效的检测方法。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱仪；Empower工作软件；赛多利斯BP211D型电子分析天平（精度0.01 mg）。硝酸咪康唑乳膏（37家生产企业市售样品共146批）；苯甲酸对照品（批号为100870-200801），山梨酸对照品（批号为100870-200801），羟苯乙酯对照品（批号为100870-200801），均购自中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯（Merck公司），水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果［4-5］

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.05 mol/L磷酸二氢钾-乙腈（72∶28）；检测波长：235 nm；流速：1.0 mL/min。理论板数按苯甲酸峰计算不低于5 000，苯甲酸峰与山梨酸峰分离度不低于2.0。精密称取苯甲酸、山梨酸、羟苯乙酯对照品适量，加乙醇溶解并稀释成质量浓度分别为0.05，0.02，0.1 g/L的溶液，作为混合对照品溶液，精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪。结果色谱图中苯甲酸峰与山梨酸峰的分离度为4.7（见图1）。

2.2 溶液制备

取供试品内容物约2.5 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入乙醇20 mL，振摇至完全溶解，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。精密称取苯甲酸、山梨酸、羟苯乙酯各适量，用乙醇稀释成含苯甲酸、山梨酸、羟苯乙酯0.05，0.02，0.10 g/L的混合溶液，作为对照品溶液。按处方量精密称取不含防腐剂的样品2.5 g，置具塞三角瓶中，精密加入乙醇20 mL，振摇至完全溶解，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为空白溶液。

2.3 测定方法

精密吸取空白溶液、混合对照品溶液、供试品溶液、对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。按自身对照外标法计算各防腐剂含量，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.4 方法学考察

线性关系考察：取苯甲酸对照品、山梨酸对照品、羟苯乙酯对照品适量，加流动相制成每1 mL含苯甲酸12.5，25.0，50.0，100.0，200.0 μg，含山梨酸5，10，20，40，80 μg，含羟苯乙酯25，50，100，200，400 μg的溶液，分别取10 μL，注入高效液相色谱仪，以质量浓度（X）为横坐标、峰面积的对数（Y）为纵坐标进行线性回归。结果见表1。

表1 线性关系考察结果（n=5）

检出限和定量限确定：将对照品溶液进行适当稀释，制得一系列不同质量浓度的溶液，依法进行分析，以S/N=3为检测限，S/N=10为定量限。结果苯甲酸检测限为4.77 ng，定量限为9.54 ng；山梨酸检测限为5.26 ng，定量限为10.52 ng；羟苯乙酯检测限为10.24 ng，定量限为20.48 ng。

精密度试验：取同一对照品溶液，连续进样6次，测定色谱主峰峰面积。结果峰面积的RSD苯甲酸为0.36%，山梨酸为0.74%，羟苯乙酯为1.41%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一混合对照品溶液，测定其室温放置0，0.5，1，2，4，8，12，24 h时的主峰峰面积。结果苯甲酸、山梨酸及羟苯乙酯的RSD分别为0.51%， 0.49%，0.91%（n=8），表明溶液在24 h内较稳定。

破坏性试验［5］：取混合对照品溶液10 mL，置强光下照射0，1，2，4，6，8，12，24 h，分别取各时间段破坏的溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，测定各主峰峰面积。结果苯甲酸、山梨酸及羟苯乙酯峰面积的RSD分别为1.24%，1.36%，1.89%（n=8），表明溶液在光照条件下24 h内较稳定。

加样回收试验：取硝酸咪康唑乳膏原料及相关辅料，按处方量制成样品，分别加适量苯甲酸、山梨酸、羟苯乙酯，测定其含量，计算加样回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果

2.5 样品含量测定

对全国37个生产企业生产的146批次硝酸咪康唑乳膏进行测定，结果有11个生产企业的产品检出苯甲酸，占29.73%；有1个生产企业的产品检出山梨酸，占2.70%；有22个生产企业的产品检出羟苯乙酯，占59.46%；有3个生产企业的产品均未检出上述3种防腐剂，占8.11%。

3 讨论

由样品检测结果可见，各生产企业产品添加防腐剂的种类不尽相同，表明各生产企业生产工艺有一定差异，故产品质量也存在差异；甚至有些企业不同批次间样品防腐剂检测结果相差4倍以上，说明部分生产企业在添加防腐剂量上有一定随意性。该方法的建立，对于控制企业产品质量、建立较合适的防腐剂限度标准具有很好的指导意义。

为得到较理想的分离条件，曾使用0.15%乙酸铵-甲醇（90∶10）为流动相，结果羟苯乙酯相对保留时间为2.54 min，通过不断改变流动相比例，羟苯乙酯相对保留时间变化不大；最后尝试使用0.05 mol/L磷酸二氢钾-乙腈为流动相，通过不断改善两相配比，最终得到较理想的分离条件。

本研究中所建立的色谱条件可同时对硝酸咪康唑乳膏中所添加的防腐剂进行定量检测，方法检测灵敏度高、分析时间短、分离效果好，结果准确可靠，可作为有效控制硝酸咪康唑乳膏产品质量的标准。同时，对其他外用多剂量制剂中防腐剂的检测也具有很好的借鉴意义。

［1］刘海玲，吴燕，曹晓云.高效液相色谱法测定硝酸咪康唑栓中两种杂质的含量［J］.天津药学，2002，14（1）：65-66.

［2］王小亮，刘雪峰，席志芳，等.硝酸咪康唑原料及其制剂有关物质测定方法的建立［J］.药物分析杂志，2012，32（11）：2 025-2 030.

［3］张秉华，宋莉，杜珊，等.HPLC法测定硝酸咪康唑原料有关物质的研究［J］.药物分析杂志，2013，33（4）：638-641.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：952.

［5］傅强.药物分析实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2008 54.：

Construction of a Method to Determine the Antiseptics in Miconazole Nitrate Cream

Liu Yan
（Shaanxi Yulin Institute for Drug Control，Yulin，Shaanxi，China 719000）

ObjectiveTo establish a method to determine the antiseptics in Miconazole Nitrate Cream.MethodsThe HPLC analysis was performed on Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column；the mobile phase consisted of 0.05 mol/L monopotassium phosphate and acetonitrile（72∶28）；the detective wavelength was 235 nm.ResultsThe limit of detection was 4.77，5.26 and 10.24 ng for benzoic，sorbic acid and ethylhydroxybenzoate respectively.It had good linear relationship at the range of 12.5～200 μg，5～80 μg，25～400 μg respectively and the correlation coefficient was 0.999 96，0.999 97 and 0.999 91（n=6）for benzoic，sorbic acid and ethylhydroxybenzoate respectively.ConclusionThe method is simple，good in repeatability，accurate for quantitation and can be used for determining the antiseptics in Miconazole Nitrate Cream.

Miconazole Nitrate；antiseptic；HPLC；content

R927.11；R978.5

A

1006-4931（2015）20-0085-02

2014-12-11）