金嗓口服液质量标准提高研究*

程猷，卢来春，傅若秋，盛芳芳，刘冰，王林丽

（中国人民解放军第三军医大学第三附属医院野战外科研究所药剂科，重庆400042）

金嗓口服液质量标准提高研究*

程猷，卢来春，傅若秋，盛芳芳，刘冰，王林丽

（中国人民解放军第三军医大学第三附属医院野战外科研究所药剂科，重庆400042）

目的探讨金嗓口服液的质量标准。方法采用薄层色谱（TLC）法对处方中黄芩、薄荷、金银花进行定性鉴别，以高效液相色谱（HPLC）法对制剂中黄芩所含黄芩苷含量进行测定。结果定性鉴别方法专属性强。黄芩苷质量浓度在0.019 71～0.197 1 g/L范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.999 9），平均加样回收率为103.02%，RSD为1.84%（n=9）。结论该法简便，专属性、重复性好，可有效控制金嗓口服液的质量。

金嗓口服液；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准；黄芩

金嗓口服液是笔者所在医院专家根据中医理论，经多年科研、临床实践而制成的中药复方制剂，由黄芩、板蓝根、金银花、薄荷等8味中药组方，具有清热解毒、利咽喧声之功效，主要用于治疗急慢性咽喉炎、急慢性扁桃体炎、急性会厌炎，效果显著［1］。目前该制剂的质量标准中仅对金银花进行了薄层色谱（TLC）鉴别，无主要中药成分的含量测定标准。本研究中拟采用高效液相色谱（HPLC）法对该制剂黄芩中黄芩苷进行含量测定，同时对黄芩、金银花、板蓝根进行TLC鉴别，进一步完善其质量标准，保证用药安全。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ-500E型医用超声波清洗器；BT 25S型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；ULUP-Ⅲ-10T型触摸屏高端超纯水器（成都优普电子产品有限公司）。黄芩苷对照品（批号为110715-201318）、绿原酸对照品（批号为110753-201314），（R-S）告依春对照品（批号为111753-201304），均由中国食品药品检定研究院提供；金嗓口服液（本院自制，批号为140512）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；硅胶薄层色谱G板（青岛海洋化工厂分厂）；聚酰胺薄膜板（国药集团化学试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

黄芩：取样品10m L，加50%甲醇超声30 min，滤过，滤液蒸干，加甲醇1 mL使残渣溶解，作为供试品溶液。精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另按供试品溶液制备方法制备缺黄芩药材的阴性对照品溶液。照TLC法［2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB］试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（7∶2∶0.5∶1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，至薄层近湿。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同的黄色斑点，阴性无干扰（见图1 A）。

板蓝根：取黄芩鉴别项下的供试品溶液作为供试品溶液。精密称取（R-S）告依春对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另按供试品溶液制备方法制备缺板蓝根药材的阴性对照品溶液。依法试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1）为展开剂（饱和后取上清液），展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰（见图1 B）。

金银花：取样品10 mL，水浴蒸干，加入95%乙醇15 mL（热熔），过滤，滤液浓缩至2 mL，作为供试品溶液。精密称取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另按供试品溶液制备方法制备缺金银花药材的阴性对照品溶液。依法试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层版上，以醋酸丁酯-甲酸-正丁醇-水（42∶15∶10∶15）上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰（见图1 C）。

图1 薄层色谱图

2.2 黄芩苷含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸-0.1%三乙胺水溶液（57∶43）；柱温：30℃；检测波长：280 nm；流速：1 mL/min；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液制备

精密称定黄芩苷对照品10.23 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，静置，即得质量浓度为0.102 3 g/L的对照品溶液。精密量取金嗓口服液5 mL，置100 mL容量瓶中，加入50%甲醇70 mL，超声30 min，放冷，再用50%甲醇定容，摇匀，静置，即得供试品溶液。按金嗓口服液处方比例取缺黄芩药材制成溶液，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验：分别取空白溶液（提取溶剂）、阴性对照品溶液、对照品溶液及供试品溶液各10 μL，按拟订色谱条件进样，记录色谱图。结果供试品溶液色谱中黄芩苷与其他杂质分离度良好，阴性对照品溶液色谱在黄芩苷相应位置处无干扰（见图2）。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察：称取黄芩苷对照品19.71 mg，精密称定，用甲醇定溶于100 mL容量瓶中，超声1 mim，使其完全溶解，摇匀，静置，即得质量浓度为0.197 1 g/L的黄芩苷对照品溶液，精密吸取，置10 mL容量瓶中，配制成6个不同梯度的对照品溶液（0.1576 8，0.098 55，0.078 84，0.059 13，0.039 42，0.019 71 g/L），依法测定。以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X，g/L）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=318 075.5 X-22.3，r=0.999 9（n=7）。结果表明，黄芩苷质量浓度在0.019 71～0.197 1 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次。结果的RSD为0.71%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品，依法制备供试品溶液，分别精密量取4，5，6 mL，平行3份。结果的RSD＜2.0%（n=9），表明该方法重复性良好。

定量限：将黄芩苷对照品溶液进行稀释，信噪比约为10∶1确定其定量限。结果定量限为2.98 ng。

稳定性试验：精密量取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，8，12 h时按拟订色谱条件测定。结果的RSD为0.75%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为140512），按低、中、高3个浓度精密量取4，5，6 mL，置100 mL容量瓶中，平行3份，分别精密加入黄芩苷对照品（0.102 3 g/L）3 mL，用50%甲醇定容，按供试品溶液方法制备，再按拟订色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 黄芩苷加样回收试验结果（n=9）

2.2.4 样品含量测定

分别精密量取3批样品溶液5 mL，置100 mL容量瓶，按供试品溶液方法制备，按拟订色谱条件测定。结果批号为140512，140721，140825的3批样品中黄芩苷含量分别为1.592，1.593，1.594 g/L。

3 讨论

本制剂由多味中药材提取而成，成分复杂，本试验中选择了起主要功效的药材进行TLC法定性鉴别，并作了阴性对照试验，结果表明阴性对照品无干扰。本方法专属性较强，简单易行，重复性好，可作为全面、准确的质量控制方法。作板蓝根定性鉴别时，对比了正丁醇-冰醋酸-水（19∶5∶5）［2］、乙酸乙酯-冰醋酸-石油醚（10∶5∶2）的展开效果，发现前者Rf较大，后者几乎展不开，综合考虑，最终选择正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1）作为展开剂。

黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根，为本制剂的君药，具有清热燥湿、泻火解毒之功效［2］，有抗呼吸道合胞病毒作用［3］，2010年版《中国药典（一部）》规定黄芩苷为黄芩的指标成分［4］。目前对黄芩苷的质量控制方法主要为HPLC法［5］、紫外检测法［6］、液-质联用法等［7］。本试验中采用HPLC法对黄芩苷进行定量测定，对流动相进行了考察，发现甲醇-水时目标峰拖尾严重，采用甲醇-磷酸水-三乙胺系统时峰形较好，经筛选，最终确定最佳流动相为甲醇-0.1%磷酸0.1%三乙胺水溶液（57∶43）。在样品前处理方法考察中，对比了加热回流提取［8］和超声提取方法［9-10］，发现二者对黄芩苷含量并无影响。还对超声时间进行考察，发现30 min时样品已提取完全，因此确定超声时间为30 min。该方法前处理无需净化，操作简便、快速，测定结果准确可靠，重复性好，实用性强，可用于金嗓口服液中黄芩苷的定量测定。下一步拟建立板蓝根的含量测定方法，更好地保证金嗓口服液药品质量。

［1］王林丽，孟德胜，姬长友，等.金嗓口服液治疗咽喉疾病240例［J］.中国药业，2011，20（20）：75.

［2］黄际薇，麦海燕，江先合.岗梅感冒灵颗粒薄层色谱鉴别方法的研究［J］.中国实用医药，2013，8（25）：1-2.

［3］厍士芳.黄芩属植物的药用价值研究［J］.中医药信息，2012，29（3）：139-142.

［4］高燕，王变利，赵渤年.黄芩水提物体外抗呼吸道合胞病毒作用［J］.中国医院药学杂志，2015，35（2）：104-107.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：282-283.

［6］纪松岗，刘晓帆，朱臻宇，等.高效液相色谱法测定小柴胡汤中黄芩苷、汉黄芩苷的含量［J］.第二军医大学学报，2010，31（9）：1 010-1 013.

［7］张静，刘文翔，韩艳婷，等.HPLC测定银黄口服液中绿原酸、黄芩苷和木犀草苷的含量［J］.西北药学杂志，2011，26（4）：237-239.

［8］王林丽，孟德胜，钟后维.金嗓口服液的质量标准研究［J］.中国药业，2004，13（10）：32-33.

［9］张淑瑜，于燕莉，毕云生，等.退烧颗粒中黄芩苷的成分鉴别和含量测定［J］.解放军药学学报，2015，31（1）：65-67.

［10］刘春憬.正交优化黄芩中黄芩苷的提取工艺［J］.农产品加工，2015（1）：22-24.

Improve Study on Quality Standards of Jinsang Oral Solution

Cheng You,Lu Laichun,Fu Ruoqiu,Sheng fangfang,Liu Bing,Wang Linli
（Department of Pharmacy,The Third Affiliated Hospital of the Third Military Medical University,Chongqing,China400042）

ObjectiveTo study the quality standards of Jinsang Oral Solution.MethodsTLC method was used for the qualitative identification of Scutellaria baicalensis,Mentha haplocalyx,Lonicera japonica.The content of Baicalin was determined by HPLC.ResultsThe identification method was specific.Linear range of determination of Baicalin was 0.019 71-0.197 1 g/L（r=0.999 9）.The average recovery rate was 103.02%,RSD=1.84%（n=9）.ConclusionThe method is simple,accurate and reproducible for the quality control of Jinsang Oral Solution.

Jinsang Oral Solution；TLC；HPLC；quality standands；scutellariae

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）20-0081-03

程猷（1987-），男，硕士研究生，研究方向为中药质量控制，（电话）023-68757098（电子信箱）cy67100971@163.com；王林丽（1964-），女，大学本科，副主任药师，研究方向为中药制剂研究，本文通讯作者，（电话）023-68757195。

2015-01-07；

2015-03-24）

*军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题，项目编号：13ZJZ01-6。