输精管结扎术后附睾液抗精子抗体的研究*

刘 晃 郑厚斌 庞 韬 邓顺美 崔 蓉 姜彦嘉 唐运革

广东省计划生育科学技术研究所， 国家卫生和计生委男性生殖与遗传重点实验室（广州 510600）

输精管结扎术后附睾液抗精子抗体的研究*

刘 晃 郑厚斌 庞 韬 邓顺美 崔 蓉 姜彦嘉 唐运革

广东省计划生育科学技术研究所， 国家卫生和计生委男性生殖与遗传重点实验室（广州 510600）

目的 探讨抗精子抗体（AsAb）在输精管结扎术后患者附睾液中的表达及其对生育力的影响。方法对2011年1月至2014年9月住院行输精管复通术的132例患者（A组）进行附睾液的AsAb检测，与同期132例育龄男性（B组）的精浆AsAb表达情况进行对比，随访1年，观察两组对象配偶的妊娠情况。结果 A组患者附睾液AsAb的总阳性率为9.10%（12/132），其中IgG为1.52%（2/132）、IgM为0.76%（1/132）、IgA为6.82%（9/132）；B组的精浆AsAb总阳性率为8.33%（11/132），其中IgG为2.27%（3/132）、IgM为0.76%（1/132）、IgA为5.30%（7/132），两组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。随访1年后，A组患者配偶的妊娠率为23.48%（31/132），略比B组34.85%（46/132）低，两者间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 输精管结扎术后附睾液中AsAb的表达程度与正常育龄男性精浆AsAb表达相当，但其复通后配偶的妊娠率要略比正常育龄期男性配偶的妊娠率低，AsAb可能对输精管复通后男性的生育力有一定影响。

输精管； 附睾； 抗精子抗体； 生育力

世界卫生组织（WHO）的数据显示，全世界男性不育症的各种病因学分类中，大概有15%～30%可能是由于体内血清或者是精浆中存在抗精子抗体（antisperm antibody，AsAb）等免疫因素所导致，其目前的检出率大约为20%～30%［1］。对于AsAb产生的原因，多数学者认为是由于输精管道的梗阻，导致输精管道内压力增高，附睾小管膨胀，精子漏出或者是附睾内精子变性，促使精子被吞噬细胞或者是附睾上皮细胞吸收，从而刺激并启动了自身免疫而产生抗体［2］。笔者对输精管结扎术后患者附睾液中的AsAb表达程度与正常育龄男性精浆中AsAb的表达程度进行了对比，发现两者AsAb的表达却未见明显差异，但其复通后配偶的妊娠率要略比正常育龄期男性配偶的妊娠率低，现报道如下。

资料与方法

一、一般资料

A组：2011年1月至2014年9月132例输精管结扎者，因再生育要求持当地计划生育管理部门证明前来我院要求行输精管复通术。年龄在34～48岁间，平均（35.62±2.17）岁；结扎年限2～11年，平均（4.53±2.62）年；其中有一次生育史47人，有两次或两次以上生育史85人。住院期间进行详细的病史收集，排除传染性疾病、遗传性疾病、获得性外伤性疾病、全身系统性疾病等，排除手术禁忌证等，并由专人进行详细的体格检查，采用Prader's睾丸模型测量法测量睾丸大小，手术前采用化学发光免疫分析法检测性激素水平（应用德国Bayel公司试剂盒，按试剂盒要求规范操作）。

B组：为同期在我院门诊进行生育检查的对象，年龄在33～44岁间，平均（34.47±2.93）岁，其中无生育史47人，有一次生育史52人，有两次或以上生育史33人。所有对象在门诊也由专人进行详细的病史收集和体格检查，排除相关疾病，按相同方法测量睾丸体积，并检测性激素水平。

（三）

两组对象的配偶年龄29～40岁，平均（31.3±4.6）岁，均监测月经规则，输卵管通畅，子宫状况良好，排卵功能正常，排除宫颈疾病，无放置节育环，尽可能排除导致配偶不孕的相关因素。两组一般人口学特征比较无明显差异（P＞0.05），具有可比性。

二、方法

（一）手术方法

所有输精管复通手术对象采用局部麻醉或者硬外麻醉下行显微输精管吻合术，术中用1mL注射器配钝针头吸取输精管结节近睾端溢出液，个别输精管结节近睾端溢出不多者可加注0.9%生理盐水冲洗附睾小管后回抽，抽取所得附睾液体送实验室行AsAb检测。

（二）检测方法

A组患者按照手术方法收集附睾液标本，B组对象参照第5版《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》［3］的标准收集禁欲3～7d后的精液标本。所得附睾液标本和精液标本，均依据WHO推荐的IBT试验法，按照IBT试剂盒（美国BIO-RAD公司生产）的使用操作说明书进行规范操作，每份标本同时检测IgA、IgG、IgM。

（三）诊断标准

1. AsAb阳性标准：参照IBT试剂盒（美国BIORAD公司生产）的使用操作说明书标准。

2. 研究对象配偶受孕标准：有专人负责随访1年，以B超确诊受孕或术后已分娩小孩为准。

（四）统计学方法

所得数据均采用SPSS18.0软件进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差（s）表示，两组间比较采用t检验。计数资料比较采用x2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

一、两组对象一般人口学特征比较

A、B两组在年龄、睾丸体积、性激素水平等一般人口学特征方面比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

二、两组AsAb表达水平与配偶妊娠情况比较

A组患者附睾液AsAb的总阳性率为9.10%（12/132），其中IgG为1.52%（2/132）、IgM为0.76%（1/132）、IgA为6.82%（9/132）；B组的精浆AsAb总阳性率为8.33%（11/132），其中IgG为2.27%（3/132）、IgM为0.76%（1/132）、IgA为5.30%（7/132）。随访1年后，A组患者配偶的妊娠率为23.48%（31/132），略比B组34.85%（46/132）低，两者间比较差异有统计学意义，（F1=0.051，P1=0.821；F2=4.239，P2=0.040）。

表1 两组间一般人口学特征比较（s）

表1 两组间一般人口学特征比较（s）

组别 例数（n） 年龄（岁） 睾丸体积（mL） FSH（mIU/mL） LH（mIU/mL） PRL（ng/mL） T（nmol/L）A组 132 35.62±2.17 14.87±2.51 7.29±1.45 5.14±1.47 8.73±2.21 9.47±1.88 B组 132 34.47±2.93 15.12±2.49 7.13±1.32 5.35±1.52 8.61±2.07 9.75±1.71 T - 0.259 -0.858 -0.708 0.855 0.961 -1.267 P - 0.396 0.194 0.238 0.191 0.173 0.102

讨 论

一、输精管结扎与AsAb的产生

目前国内外众多的学者都普遍认为AsAb的产生是机体免疫系统异常引起，它是导致男性不育的一个比较明确的重要因素［4］。AsAb的基本概念是生物机体产生了一种能够附着在精子表面、并且能够与精子表面特异性抗原相互结合的特殊物质，理论上认为它能够包被精子、凝集精子和抑制精子的运动等等，通过阻碍精子与卵子的结合，阻碍受精卵的形成，从而导致不育症的发生。众所周知人类男性精子的产生是在睾丸的生精小管，而曲细精管有着血睾屏障的保护作用，使得精子被隔离开来，避免了机体免疫系统的识别，从而完成了减数分裂和精子的发生，然而当这种特殊的屏障环境受到破坏的情况下，生精小管产生的精子就有可能被自身免疫系统所识别，从而产生AsAb，影响生殖的繁衍。当前多数学者认为，输精管结扎术后，生殖管道受到了梗阻，势必会导致精液淤积，引起生殖管道内的压力增高，附睾小管膨胀，精子漏出形成精子肉芽肿或者是刺激了附睾内皮细胞，造成内皮细胞对精子的吸收加强和吞噬细胞的吞噬作用加强，刺激了人类敏感的免疫系统产生免疫反应，从而引起AsAb的发生［2］。国外学者利用动物模型进行了相应的研究，其中Chehval等［5］发现成年大鼠在切去单侧输精管后15d，大鼠体内血液中便开始有AsAb的产生。Flickinger等［6］发现输精管结扎后立即吻合的大鼠产生的血清AsAb明显比结扎后一段时间后吻合的大鼠少。在人类输精管结扎术与AsAb的研究中，国内外学者发现，输精管结扎术后男性血清AsAb的阳性率可以高达50%～80%，而且多数是在术后半年到1年之间AsAb的表达程度达到最高峰，有的输精管结扎后男性可以在术后20～30年内均存在AsAb［7］。我们在研究中也发现，A组132例输精管结扎对象在行输精管结扎术2～11年，平均（4.53±2.62）年后仍有9.10%（12/132）的对象能从附睾液中检测到AsAb的表达，本研究的AsAb表达程度比相关文献的低，这可能与我们检测的标本不同有一定关系，我们检测是的附睾液，而目前多数学者检测的是血清。这表明血清AsAb与附睾液AsAb的表达不一定相关，这与国内外有关学者的研究相一致［8，9］。

二、附睾液AsAb对生育力的影响

有研究分析出人类抗精子抗体的产生时间可以短至数天，当机体免疫系统做出免疫应答后数天内即可在人体内检测到AsAb的存在，其可以存在血液、精液、睾丸鞘膜积液或者是女性宫颈黏液等人类体内组织液中。Safarinejad对行睾丸鞘膜积液手术的患者进行了研究，发现在睾丸鞘膜积液中可以检测到AsAb的存在，其检出率高达27%［10］。人类的AsAb主要有IgM 、IgG和IgA三种亚型。首先表达的时间也有先后之分，以IgM最早出现，继而转化为IgG和IgA并可以长期存在于体内，其中IgG主要分布于血液中，IgA主要分布于除血液以外的其他组织液中。各种亚型的AsAb的作用部位和作用机制也有所区别，国外学者［11，12］发现IgM型主要作用于是抑制顶体反应；IgG型主要是使得精子凝聚，制约精子活动能力；IgA型能够降低精子的宫颈粘液穿透能力；他们还发现当AsAb结合于精子头部或者是精子表面全部时，生育的能力下降80%以上，当AsAb结合的部位是精子尾部或者是体部时，生育的能力下降30%左右。国外还有分析认为［13］，血清学AsAb的表达强度与生育力水平呈负相关，其中11例AsAb滴度≥1 024的男性竟然无1例能够生育。我们在既往的研究中也发现，虽然输精管复通术后的患者其精子质量能够在一年后达到正常参考范围，但是其配偶受孕率要低于育龄人群自然受孕率［14］；而输精管附睾吻合术后再通的患者2年内的配偶受孕率也比WHO育龄人群2年的自然受孕率低［15］，其可能原因尚不明确。在此次研究中我们发现，132例复通术后的A组患者在附睾液中AsAb的总阳性率为9.10%（12/132），其中IgG为1.52%（2/132）、IgM为0.76%（1/132）、IgA为6.82%（9/132），主要是以IgA的形式存在，随访1年内A组患者配偶的妊娠率为23.48%（31/132），略比B组34.85%（46/132）低，两者间比较差异有统计学意义（P＜0.05），因此，我们认为这可能是由于AsAb的作用部位不同所导致了两组的配偶受孕率出现一定的差异，这也可能是解释我们既往研究所发现的复通术后配偶受孕率会比正常育龄人群低的一个重要原因，AsAb可能对输精管复通后对象的生育力存在一定的影响。

1 WHO:WHO manual for the standardized investigation，diagnosis and management of the infertile male， Cambrige University Press. Cambrige 1st ed.2006:11-46

2 Mazzilli F， Rossi T， Delno M， et al. Azoospermia: incidence， and biochemical evaluation of seminal plasma by the differential pH method. Panminerva Med 2000；42（1）: 27-31

3 WHO.WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. Fifthed.WHO 2010； 224-225

4 Dohle GR， Colpi GM， Hargreave TB， et al. EAU guideline on male infertility. Eur Uro1 2005； 48（5）: 703-711

5 Chehval MJ， Doshi R， Kidd CF， et al. Antisperm autoantibody response after unilateral vas deferens ligation in rats: when does it develop？ J Androl 2002； 23（5）: 669-673

6 Flickinger CJ， Vagnetti M， Howards SS. Antisperm autoantibody response is reduced by early repair of a severed vas deferens in the juvenile rat. Fertil Steril 2000； 73（2）: 229-237

7 傅广波， 钱立新， 崔毓桂. 男性自身抗精子抗体的临床研究. 国外医学计划生育分册 2005； 24（6）: 317-321

8 Naz RK， Chauhan SC. Presence of antibodies to sperm YLP （12） synthetic peptide in sera and seminal plasma of immunoinfertile men. Mol Hum Reprod 2001； 7（1）: 21-26

9 李宏军， 郭应禄， 王彦， 等. 精浆及血清抗精子抗体的比较研究. 生殖与避孕 1997； 17（5）: 308-310

10 Safarinejad MR. Antisperm antibodies in hydroceles before and after surgery. Fertil Steril 2003； 79（2）: 457-458

11 Kipersztok S， Kim BD， Morris L， et al. Validity of a rapid assay forantisperm antibodies in semen. Fertil Steri 2003；79（3）: 522-528

12 Myogo K， Yamano S， Nakagawa K， et al. Spermimmobilizing antibodies block capacitation in human spermatozoa. Arch Androl 2001； 47（2）:135-142

13 Shibahara H， Hirano Y， Takamizawa S， et al. Effect of spermimmobilining antibodies bound to the surface of ejaculated human spermato zoa on sperm motility in immunologically infertile men. Fertil Steril 2003； 79（3）: 641-642

14 刘晃， 唐立新， 唐运革， 等. 输精管吻合术后男性生育力的临床观察. 中国男科学杂志 2011； 25（10）: 35-38

15 刘晃， 唐立新， 汤乐， 等. 附睾输精管吻合术后男性生育力的临床评估. 山西医科大学学报 2014； 45（3）: 220-223

（2015-09-12收稿）

Study on antisperm antibody in epididymal fi uid after vasectomy*

Liu Huang， Zheng Houbin， Pang Tao， Deng Shunmei， Cui Rong， Jiang Yanjia， Tang Yunge
Family Planning Research Institute of Guangdong Province， Guangzhou 510600 ， China

Objective To investigate the expression of antisperm antibody in epididymal fi uid after vasectomy and explore its effects on the fertility. Methods Total of 132 patients （group A） who underwent vasectomy reversal during the 2011-1 ～ 2014-9 were enrolled in the study. The antisperm antibody in the epididymal fi uid of patients were detected. Other 132 fertile men （group B） were set as the controls. All subjects were followed up for 1 year， and their spouse's pregnancy were observed. Results The total positive rate of antisperm antibodies in the epididymal fi uid of group A was 9.10%（12/132）， among them the IgG was 1.52%（2/132）， IgM was 0.76% （1/132）， IgA was 6.82% （9/132）， and the total positive rate of antisperm antibody in the seminal plasma of group B was 8.33% （11/132） ， among them the IgG was2.27% （3/132）， IgM was 0.76% （1/132）， IgA was 5.30% （7/132）， there was no significant difference between the two groups （P＞0.05）， after followed up for 1 years， the spouse's pregnancy rate of group A was 23.48%（31/132）， it was little lower than that of the group B（ 34.85%，46/132）， There was statistical difference between the two groups（P＜0.05）. Conclusion The expression level of antisperm antibody in the epididymal fi uid of the patients after vasectomy was close to that of the normal reproductive age men， but the spouse's pregnancy rate of the patients who underwent vasectomy reversal is little lower than that of the normal reproductive male's apouse.

epididymis； vas deferens； antisperm antibody； fertility

资助: 广东省医学科研基金（项目编号：A2015245）

10.3969/j.issn.1008-0848.2015.11.011

R 169.4