养阴柔肝、化瘀息风法对自发性高血压大鼠血管重塑的影响*

雍苏南王顺民张稳谭元生

（湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙410007）

·研究报告·

养阴柔肝、化瘀息风法对自发性高血压大鼠血管重塑的影响*

雍苏南王顺民张稳谭元生△

（湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙410007）

目的观察养阴柔肝、化瘀息风法对自发性高血压大鼠（SHR）的降压作用及其对血清一氧化氮（NO）、胸主动脉中膜厚度（MT）、管腔直径（LD）及MT/LD的影响。方法以12只8周龄Wistar-kyoto（WKY）大鼠为正常组，48只8周龄SHR随机分为4组：模型组（SHR-M）、卡托普利组（SHR-K）、复方七芍降压片低剂量治疗组（SHR-D）、复方七芍降压片高剂量治疗组（SHR-G）。连续灌胃8周，观察血压、血清NO和胸主动脉中膜形态学变化，测定MT、LD，并计算MT/LD。结果与正常组比较，SHR各组血清NO显著降低（P＜0.01），MT明显增厚，LD缩小，MT/LD升高（P＜0.01）；养阴柔肝、化瘀息风法治疗后，SHR各组血压明显下降（P＜0.01），血清NO升高（P＜0.01），胸主动脉中膜增厚减轻，管腔直径变大（P＜0.01），MT/LD降低（P＜0.01）。结论养阴柔肝、化瘀息风法能有效降低SHR血压，升高血清NO水平，有效逆转SHR血管重塑。

养阴柔肝、化瘀息风法复方七芍降压片自发性高血压大鼠血管重塑NO

高血压病是全球面临的重大心脑血管疾病之一，为全球范围内的重大公共卫生问题。本病易引发中风、心肌梗死、心衰及肾功能衰竭等并发症［1］，严重危害人类身体健康。血管重塑既是高血压所致的病理变化，又是高血压维持和加剧的结构基础，也是导致心血管事件死亡率和发生率增高的主要原因［2］。本研究观察以“养阴柔肝、化瘀息风”立法的复方七芍降压片对自发性高血压大鼠血清一氧化氮（NO）、胸主动脉中膜厚度（MT）、管腔直径（LD）和MT/LD的影响，旨在分析养阴柔肝、化瘀息风法对自发性高血压大鼠（SHR）血管重塑的影响及可能机制，进一步揭示复方七芍降压片的降压机制，为临床应用提供理论基础。现报告如下。

1　材料与方法

1.1动物8周龄SHR 48只，体质量230～270 g，雄性，清洁级，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物生产许可证号：SCXK（沪2007-0005）。8周龄Wistar-kyoto（WKY）大鼠12只，体质量225～280 g，雄性，清洁级，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物生产许可证号：SCXK（沪2007-0005）。实验动物环境设施合格证号：SYXK（湘）2009-0001。

1.2药物与试剂复方七芍降压片，湖南中医药大学第一附属医院药剂科制备，批号20141116。卡托普利片（25 mg/片），中美上海施贵宝制药有限公司生产，批号20140914。大鼠用血清一氧化氮测定试剂盒，湖北武汉博士德试剂有限公司提供；10%水合氯醛，青岛海慈医疗集团药剂科提供。

1.3仪器DT1000A型电子天平（江苏省常熟市长春仪器厂制造），BP-2006A型智能无创血压计（北京软隆科技有限责任公司），Freezer超低温冰箱（Forma Scientific生产，美国），LKB-Ⅲ型超薄切片机（广州市华俊医疗器械有限公司），BMJ-1n型病理组织包埋机和包埋冷冻台（常州），TS-12F型生物组织自动脱水机（湖北），OLYMPU倒置显微镜和照相装置（日本OLYMPUS公司），KS400型图像分析仪（德国ZISSE公司）。

1.4分组及给药将48只SHR随机分为模型组（SHR-M）、卡托普利组（SHR-K）、复方七芍降压片低剂量治疗组（SHR-D）、复方七芍降压片高剂量治疗组（SHR-G）4组，每组12只，12只WKY大鼠为正常组。复方七芍降压片（压片前）成人每日用量为49 g，SHRD组以成人等效量［大鼠体表面积/成人平均体表面积×成人每日用量］灌胃，SHR-G组以成人等效量4倍灌胃，SHR-K组以成人等效量灌胃。同时，SHR-M组及正常组以等量蒸馏水开始灌胃，给药体积为10 mL/kg。各组每日灌胃1次，连续8周，灌胃期间每周测量1次血压和体质量，根据体质量随时调整给药量。

1.5SHR尾动脉压的测定分别在实验开始前、1周、2周、3周、4周、6周、8周后，采用尾动脉测压法应用智能无创血压计测量给药前后大鼠血压。在每周第7日14∶00～17∶00测各组大鼠的血压平均值，为该鼠所在周的血压值。

1.6血清NO含量的测定最后1次给药后，实验动物予以禁食12 h，用10%水合氯醛（0.2 mL/kg）腹腔注射麻醉，做腹部正中切口，腹主动脉取血5 mL，3500 r/min离心10 min，于-70℃低温下冷冻大鼠血清备用，严格按照试剂盒说明书的步骤，测定血清NO含量。

1.7主动脉血管HE染色摘取胸主动脉，置于10%甲醛溶液固定，酒精梯度脱水，浸蜡包埋，二甲苯透明，常规切片，将血管横切，切成厚度约7 μm的薄片，HE染色。于×400高倍镜下观察组织形态学变化，并射片、采图，并对HE染色图片进行图像分析，依次测定MT、LD，并计算MT/LD。

1.8统计学处理应用SPSS17.0统计软件处理。计量资料以（±s）表示，数据之间比较采用单因素方差分析（ANOVA），组间两两比较采用最小显著差值法（LSD），同一组治疗前后比较采用配对t检验。P＜0.05为差异有显著统计学意义。

2　结果

2.1各组SHR尾动脉压比较见表1。SHR-M组的血压随用药时间的推移逐渐增高，两治疗组及SHR-K组则均有下降；与SHR-M组比较，1周后SHR-K组血压显著降低（P＜0.01），2周后SHR-G组血压开始明显降低（P＜0.01）；整个疗程中，两治疗组血压均高于SHR-K组（P＜0.01），第3周后，SHR-G组血压水平开始低于SHR-D组（P＜0.05）。说明复方七芍降压片确有降压效果，且SHR-G组降压效果优于低剂量组。

表1　各组大鼠治疗前后血压变化比较（mmHg，±s）

表1　各组大鼠治疗前后血压变化比较（mmHg，±s）

与WKY组比较，#P＜0.01；与SHR-M组比较，△P＜0.01；与SHR-K组比较，▲P＜0.01；与SHR-D组比较，*P＜0.05；与治疗前比较，●P＜0.01。

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2.2大鼠血清NO水平比较治疗4周后，与正常组［NO浓度（94.68±26.88）mol/L］比较，SHR-M组血清N0浓度［（52.26±9.65）mol/L］明显降低（P＜0.01）；与SHR-M组比较，各治疗组NO浓度［SHR-D组（168.04±27.4）mol/L，SHR-G组（174.84±34.95）mol/L］均升高（P＜0.01）；两治疗组均较SHR-K组［（98.54± 6.23）mol/L）］明显升高（P＜0.01），两治疗组间血清NO水平无明显差异（P＞0.05）。

2.3各组大鼠胸主动脉形态学比较正常组胸主动脉壁内皮完整、厚薄均匀，中膜平滑肌细胞排列有序，中间弹力纤维清晰；SHR-M组胸主动脉管壁明显增厚，内皮连续性差，中膜平滑肌细胞肥大、排列紊乱，弹力纤维略有增多，纹路欠清。与SHR-M组比较，SHRK组管壁可见轻度增生，内皮连续性尚可，中膜平滑肌层及弹力纤维病理改变不典型；两治疗组镜下图像与SHR-K组大致相似，仅见少许内膜增生，而高剂量较低剂量增生轻。见图1。

图1　各组大鼠胸主动脉形态学比较（HE×400）

2.4各组大鼠MT、LD及MT/LD比较见表2。与正常组比较，SHR-M组胸主动脉中膜明显增厚、管腔直径缩小，MT/LD升高，与SHR-M组比较，SHR-K组MT明显变薄（P＜0.01），LD明显变大（P＜0.01），MT/ LD值明显降低（P＜0.01）。两治疗组与SHR-K组对中膜厚度、管腔直径及MT/LD的作用效果相当，均有降低MT/LD的趋势，其中SHR-G组较SHR-D组效果更明显（P＜0.05）。

3　讨论

高血压病血管重塑是指由血压升高所导致的机体血管结构的改变，即在高血压病发病过程中，大中血管出现血管壁中膜增厚、管腔变小，血管壁层厚度和腔径大小的比值增加等慢性重塑性改变，血管重塑还可稀疏微小动脉的血管结构，改变侧枝循环，从而导致机体血管功能异常［3］。NO是由NOS以L-精氨酸为底物合成，NOS/NO系统能保护内皮功能，使得内膜厚度和狭窄率显著减低，血管重塑减轻，同时HO-1/CO与NOS/ CO系统可能通过减弱NF-κB活性及降低TNF-α、内皮素-1水平而抑制再狭窄进展［4］。NO作为最重要的内皮舒血管因子，可调控血管平滑肌细胞从而调节机体器官的血流量，使其保持相对稳定，发挥血管自身调节作用，最终调节机体血压水平［5-6］。NO缺乏时，这种调节功能受损甚至缺失，可能导致高血压病的发病［7］。血管重塑使得血管阻力增加，导致或加重靶器官的损害。目前研究认为高血压病的治疗在降低血压的基础上，还应强调保护靶器官，阻止或逆转高血压病并发症。其中，靶器官损害的共同病理学基础——血管重塑现象起着关键性的作用［8］。

表2　各组大鼠MT、LD及MT/LD比较（s，±s）

表2　各组大鼠MT、LD及MT/LD比较（s，±s）

与WKY组比较，#P＜0.05；与SHR-M组比较，△P＜0.01；与SHR-K组比较，*P＞0.05；与SHR-D组比较，●P＞0.05。

组别nMT/LD WKY组120.078±0.009 SHR-M组120.118±0.007#SHR-K组120.091±0.006#△MT（μm）LD（mm）87.01±7.211.115±0.005 109.55±8.52#0.928±0.006#92.38±6.31#△1.014±0.007#△SHR-D组120.096±0.008#△*96.33±5.89#△*1.005±0.008#△*SHR-G组1294.36±5.95#△*●1.011±0.006#△*●0.093±0.007#△*●

高血压病属中医学“眩晕”“头痛”范畴。眩晕可定位于肝肾，肝肾阴虚，水不涵木，阴不维阳，肝阳上亢，肝风内动，发为眩晕，即肝阳化风。肝肾阴虚，一方面阴虚可致血枯脉涩，日久成瘀，瘀血阻络，髓海失濡；另一方面，阴虚阳亢，肝失疏泄，气血运行不畅，日久亦可致瘀血阻络，气血不能上达，清窍失养，眩晕发作，即瘀血化风。故高血压患者中医病机可用“虚、瘀、风”来概括，并且中医理论认为瘀血停滞导致脉络损伤，脉络损伤反过来又能加重瘀血停滞，这与高血压病与血管重塑的关系有类似性，现代一些研究证实高血压病血管重塑与血瘀证型有密切关系［9］。基于高血压病“虚”“瘀”“风”病机特点而创制的复方七芍降压片主要由钩藤、川芎等组成，具有养阴柔肝、化瘀息风之效。前期临床及动物实验研究［10-12］表明该方降压疗效明确，兼改善血管内皮功能，亦可上调心肌组织IL-10的表达而逆转SHR左室肥厚。本实验通过检测SHR大鼠主动脉中层厚度和腔径大小的比值说明血管重塑的程度，结果显示采用养阴柔肝、化瘀息风立法的复方七芍降压片能有效升高SHR血清NO水平，调节SHR血管重塑效果明显，说明养阴柔肝、化瘀息风法可抑制SHR的血管重塑，这种影响对于降低血压、延缓高血压病病程进展、保护患者靶器官、改善预后可能有极为重要的意义。

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Effects of the Treatment of Enriching Yin to Emolliate Liver and Resolving Stasis to Extinguish Wind on Vascular Remodeling in Rats with Spontaneously Hypertension

YONG Sunan，WANG Shunmin，ZHANG Wen，et al.
The First Affiliated Hospital of Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Hunan，Changsha 410007，China

Objective：To explore the effects of the treatment of enriching yin to emolliate liver and resolving stasis to extinguish wind on blood pressure，serum nitric oxide（NO）and thoracic aortic tissue samples in rats with spontaneously hypertension.Methods：Twelve 8-week-old Wistar-kyoto（WKY）rats were used as the normal group（n=12）.Forty-eight 8-week-old spontaneous hypertension rats（SHR）were divided into 4 groups at random：the model group（n=12），the captopril group，the Chinese medicine group of low and high dose.In the following treatment of 8 weeks，blood pressure was measured from tail artery，and the 1evels of serum NO were measured and thoracic aortic tissue samples were clipped to observe the morphology under HE staining，measuring MT，LD and MT/LD of thoracic aortas by using computer aided imaging measurement system.Results：Compared with the normal group，in the model group，the level of serum NO decreased significantly（P＜0.01）and thoracic aortic wall was thickened.MT/LD of thoracic aorta had a significant increase（P＜0.01）.In the following treatment of traditional Chinese medicine，blood pressure dropped sharply（P＜0.01）and serum NO had a significant increase（P＜0.01）；thoracic aortic wall became thinner and MT/LD of thoracic aorta had a significant decrease（P＜0.01）.Conclusion：The treatment of enriching yin to emolliate liver and resolving stasis to extinguish wind can lower blood pressure，and increase the level of serum NO，with a protective effect on vascular remodeling in the SHR.

Enrich yin to emolliate liver and resolve stasis to extinguish wind treatment；Compound Qishaojiangya tablets；Spontaneously hypertensive rats；Vascular remodeling；NO

R285.5

A

1004-745X（2015）10-1696-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.10.002

2015-07-03）

国家自然科学基金面上项目（81473616）；湖南省科技计划项目（2013SK2025）；湖南省中医药科研计划项目（201403）；湖南省中药粉体与创新药物研究省部共建国家重点实验室培育基地开放基金项目（ZYFT201407）

（电子邮箱：sunan0526@163.com）