Leptin、NF-κBp65在子宫颈上皮内病变组织中的表达及意义

罗元　李辛辛　魏斐斐，3　林思彤　韦玉鸾　郑萍，3

作者单位：530021　南宁　1广西医科大学附属肿瘤医院病理科；530022　南宁　2南宁市第一人民医院病理科；530021南宁　3广西医科大学研究生学院；4广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科

临床研究

Leptin、NF-κBp65在子宫颈上皮内病变组织中的表达及意义

罗元1李辛辛2魏斐斐1，3林思彤1韦玉鸾4郑萍1，3

作者单位：530021南宁1广西医科大学附属肿瘤医院病理科；530022南宁2南宁市第一人民医院病理科；530021南宁3广西医科大学研究生学院；4广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科

目的 探讨瘦素（leptin）、核转录因子-κBp65（nuclear factorκBp65，NF-κBp65）与子宫颈上皮内瘤变（cervical inraepithelialneoplasia，CIN）发生、发展的关系。方法 采用免疫组化染色MaxVisionTM法检测63例慢性子宫颈炎（炎症组）、125例CIN组织（CIN组）中Leptin和NF-κBp65的表达。结果Leptin在炎症组中100%表达，且呈强阳性表达，在CIN组中随着CIN级别的升高其表达逐渐减弱；NF-κBp65在炎症组和CIN组织中阳性表达率均为100%，CIN组为强阳性表达，其表达强度随CIN级别升高而增强，差异有统计学意义（P＜0.05）。Leptin和NF-κBp65的表达强度呈负相关（r=-0.234，P＜0.05）。结论NF-κBp65的高表达对CIN的发生、发展起促进作用。在CIN发生、发展过程中，可能由于细胞异常增生影响Leptin合成与分泌而致其表达下降或异常。

子宫颈肿瘤；子宫颈上皮内瘤变；瘦素；核转录因子-κBp65；免疫组化

子宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，发病率居妇女恶性肿瘤的第2位。据统计，全世界每年约有529 800例新发病例和275 100例死亡病例，其中85%发生在发展中国家［1］。子宫颈癌的发生、发展是一个多因素、多步骤的长期过程，目前对子宫颈癌发生、发展机制的研究已趋于深入，这对子宫颈癌的早期诊断、早期治疗具有重要意义。瘦素（Leptin）是由肥胖基因（OB）编码的一种蛋白质产物，能通过多种效应的信号传导通路发挥生物学作用，目前研究认为其与肥胖、炎症及多种肿瘤的发生、发展有密切的关系［2］。在妇产科领域中鲜见对Leptin研究的文献报道。核转录因子-κBp65（nuclear factorκBp65，NF-κBp65）是一种细胞核转录因子，其与肿瘤的关系备受广大学者的关注。本研究观察Leptin、NF-κBp65蛋白在子宫颈炎与子宫颈上皮内瘤变（cervicalinraepithelialneoplasia，CIN）中的表达情况，探讨其与子宫颈上皮内瘤变-子宫颈癌发生、发展的关系。

1　资料与方法

1.1临床资料

选取广西医科大学附属肿瘤医院2008年7月至2010年7月间实施卫生部/中国癌症基金会子宫颈癌早诊早治项目所采集的子宫颈病变活检标本87例以及病理科部分存档蜡块标本101例（主要补充CINⅢ级/原位癌病例及CINⅡ级病例），共188例。患者年龄30～59岁，中位年龄43岁。其中慢性子宫颈炎63例（炎症组），CIN组中CINⅠ级37例、CINⅡ级47例、CINⅢ级/原位癌41例。CIN判断标准按照卫生部癌症早诊早治项目专家委员会/中国癌症基金会子宫颈癌早诊早治项目工作手册（2008年2月）技术方案（普及版）中CIN病理诊断报告标准为CINⅠ级：异型细胞累及鳞状上皮下1/3或限于下1/2，细胞异型性大多较轻，有时可见HPV感染的细胞病理变化。CINⅡ级：异型细胞累及鳞状上皮下1/2或限于下2/3，个别异型细胞可散在于鳞状细胞上1/3，但表层上皮总体仍分化良好。CINⅢ级/原位癌：鳞状上皮2/3以上或全层为异型细胞所代替，但上皮基底膜仍清晰完整。如全层为异型性强的恶性细胞时，则归入原位癌。由两名经验丰富且经过培训的病理专业医生进行双盲诊断。

1.2免疫组化方法及结果判定

所有标本均用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋并切片。采用免疫组化染色MaxVisionTM法。实验操作按试剂盒说明书进行。以PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性切片作阳性对照。光学显微镜下观察显色反应。Leptin、NF-κBp65阳性结果判定标准：Leptin为细胞质染成棕黄色颗粒，NF-κBp65蛋白以细胞核呈棕黄色为阳性表达。按染色强度评分：0分为无染色，1分为浅黄色，2分为黄色，3分为棕黄色；按阳性细胞所占百分比评分：0分为阴性，1分为阳性细胞占10%，2分为阳性细胞占11%～50%，3分为阳性细胞占51%～75%，4分为阳性细胞＞75%。每张切片分别从上下左右及中间观察5个不连续的高倍视野（×400），取均值为该切片的积分值。阳性程度按积分值分为＜2分为阴性（-），3～5分为弱阳性（+），6～8分为阳性（++），≥9分为强阳性（+++）。

1.3统计学处理

采用SPSS 13.0统计学软件进行统计分析。等级资料采用秩和检验，两者相关性采用Spearman等级相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1Leptin与NF-κBp65在各种子宫颈病变组织中的表达

Leptin在炎症组中100%表达，且呈强阳性表达（图1A）；在CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级/原位癌中随着CIN级别的升高其表达逐渐减弱（表1）。NF-κBp65在各组子宫颈病变中均呈不同程度的阳性（+～+++）表达，表达率均为100%。随着CIN级别的升高，NF-κBp65蛋白的表达逐渐增强，在CINⅢ级/原位癌组织中呈强阳性表达（图1B）。

表1　Leptin及NF-κBp65在各种子宫颈病变组织中的表达情况（n）

图1　Leptin与NF-κBp65在子宫颈病变组织中的表达

2.2Leptin及NF-κBp65在各种子宫颈病变组织中表达的两两比较

Leptin蛋白的表达在炎症组与各组CIN之间表达的差异均具有统计学意义（P均＜0.05）；各组CIN之间的两两比较差异均具有统计学意义（P均＜0.05）。NF-κBp65蛋白的表达在炎症组与CINⅢ级及CINⅠ级与CINⅢ级、CINⅡ级与CINⅢ级之间的差异有统计学意义（P均＜0.05）；在炎症组与CINⅠ级、CINⅡ级及CINⅠ级与CINⅡ级之间差异无统计学意义（P均＞0.05）。见表2。

表2　Leptin及NF-κBp65在各种子宫颈病变组织中表达的两两比较结果

2.3Leptin与NF-κBp65在各种子宫颈病变组织中表达的相关性

Spearman等级相关分析显示，两者在慢性子宫颈炎症、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级/原位癌组织中的表达呈负相关（r=-0.234，P＜0.05）。

3　讨论

Leptin是肥胖基因（OB）编码的16kD（1kD-0.9921 ku）的小分子多肽激素，主要合成于白色脂肪细胞。Leptin与其受体结合后通过JA K2/STAT3途径与特定基因启动子区域的DNA元件相互作用，从而发挥生物学作用，如免疫、造血、生殖、创伤愈合和血管形成等［3］。体内外实验均证实，机体在炎症状态下Leptin浓度升高，激活并趋化中性粒细胞，刺激单核巨噬系统和淋巴细胞的增殖，诱导外周血液白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（tumornecrosis factorα，TNF-α）等炎性因子的表达，从而参与炎性反应［3～5］。本研究结果显示，Leptin在慢性子宫颈炎组织中呈强阳性表达，进一步证实Leptin是子宫颈炎症的重要参与因子。

近年来国内外研究多数报道Leptin与肿瘤发生、发展有关［2，5］，其中与子宫颈癌、子宫内膜癌、结肠癌、前列腺癌和胃癌等肿瘤的发生有促进关系［6］，Leptin蛋白在这些肿瘤组织中均呈不同程度的高表达，Leptin及其受体同时可引起乳腺细胞的增生和乳腺癌的发生［7］。但亦有研究发现，Leptin的表达在单纯增生-非典型增生-子宫内膜癌的发展中呈递减趋势［8］。Mantovani等［9］对晚期恶性肿瘤患者血浆进行测定发现血浆瘦素水平与癌的进展成负相关。Petridou等［10］研究表明，在绝经前的妇女中，瘦素水平与乳腺癌发生的危险性存在负相关。Elinav等［11］首次发现，在肝癌小鼠模型中，外源瘦素能显著减小肿瘤大小和提高小鼠存活率。进一步研究表明，Leptin诱导的抑制作用大部分可能通过其诱导自然杀伤细胞的增殖和活化介导。Thompson等［12］研究发现，在大鼠肝癌H4IIE细胞体外培养模型中，Leptin通过抑制p38-MAPK信号传导通路抑制细胞增殖。但目前对Leptin是否能促进肿瘤形成仍存在一定争议。本实验结果显示Leptin蛋白的表达下降可使子宫颈上皮细胞增生，支持Leptin能抑制细胞增殖的论点。

NF-κB是一种重要的细胞核转录因子，其活化与肿瘤细胞转移密切相关，可促进转移相关因子如基质金属蛋白酶、纤溶酶原动物尿激酶等的表达［13］。NF-κB通常由p50和p65亚基组成，可调控多种生长因子。NF-κB信号传导通路属于受调蛋白水解酶依赖的受体信号传导通路，抑制肿瘤细胞的NF-κB通路可以阻断细胞周期，诱导细胞调亡，由此认为NF-κB对肿瘤的增殖起十分关键的作用［14］。近年研究［15～17］发现，黑色素瘤、子宫颈癌、非小细胞肺癌、结肠癌等肿瘤中存NF-κB异常表达及活化而促进肿瘤发生、发展。本研究结果表明，NF-κBp65在CINⅢ级/原位癌组织中多呈强阳性表达；随着子宫颈上皮内瘤变级别的升高其NF-κBp65蛋白的表达逐渐增强，提示NF-κBp65的高表达对CIN的发生、发展有促进作用，这与上述报道结果相似。

有文献报道［18］，Leptin与成纤维细胞增殖以及上皮再生密切相关，成纤维细胞及其他细胞的增殖是创伤修复的基础，再上皮化是创面闭合的中心环节，主要由角质形成、迁移完成，而Leptin具有调节角质化细胞生长因子和表皮生长因子的作用。另有报道［19］，核转录因子NF-κB家族的Rel B以细胞特异性的方式对活化的成纤维细胞和血管内皮细胞合成和分泌炎性分子的过程进行负调控。本研究发现NF-κBp65与Leptin表达呈负相关，但有关NF-κBp65与Leptin之间有无相关调控作用的机制，有待进一步深入研究。

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［2015-04-08收稿］［2015-08-15修回］［编辑阮萃才］

Expression and clinical significance of Leptin and NF-κBp65 in cervical intraepithelial neoplasia

Luo Yuan1，Li Xinxin2，Wei Feifei1，3，Lin Sitong1，Wei Yuluan4，Zheng Ping1，3（1Department of Pathology，Affiliated Tumor Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530021，P.R.China；2Department of Pathology，The First People′s Hospital of Nanning，Nanning 530022，P.R.China；3Graduate School of Guangxi Medical University；4Department of Gynecology and Oncology，Affiliated Tumor Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530021，P.R.China）

Li Xinxin.E-mail：7965257@qq.com

Objective To explore the expression of Leptin and NF-κBp65 in cervical intraepithelial neoplasia and its clinical significance.M ethods Expression of Leptin and NF-κBp65 was analyzed immunohistochemically in 63 patients with chronic cervicitis and 125 patients with cervical intraepithelial neoplasia.Results Leptin expression was detected in 100%of samples from patients with chronic cervicitis，and staining intensity was strong.NF-κBp65 was detected in 100%of samples from both groups of patients.NF-κBp65 staining intensity was significantly higher in cervical intraepithelial neoplasia than in chronic cervicitis，and intensity increased with severity of neoplasia.Leptin and NF-κBp65 expression correlated negatively in both sets of patients. Conclusion High expression of NF-κBp65 promotes the development of cervical intraepithelial neoplasia.As this disease develops，Leptin expression decreases and becomes abnormal.

Cervical neoplasm；Cervical intraepithelial neoplasia；Leptin；NF-κBp65；Immunohistochemistry

R737.33

A

1674-5671（2015）05-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2015.05.04

广西卫生厅科研基金资助项目（重200870）

李辛辛。E-mail：7965257@qq.com