姬松茸多糖对辐射损伤大鼠的免疫调节作用

周国清，蓝蕾，姜颖，刘剑英

基础医学

姬松茸多糖对辐射损伤大鼠的免疫调节作用

周国清，蓝蕾，姜颖，刘剑英＊

姬松茸多糖；辐射损伤；大鼠；免疫调节

辐射可引起机体物质代谢紊乱、造成机体免疫系统损伤，还会引起机体多种器官的氧化损伤，使体内防御系统被严重破坏［1］。目前一些效果明显抗辐射药物往往因其不良反应较大无法广泛应用［2］，研究利用纯天然植物中的活性成分提高机体抗辐射能力，预防和减轻辐射对机体的损害逐渐成为新的研究热点。

姬松茸（A garicus blazei m urill，APM）原产于巴西，故又名巴西蘑菇。该菌鲜香脆嫩，营养价值丰富，其含有的多糖类成分具有提高机体免疫力、防癌抗癌、降糖降脂、抗炎、抗动脉硬化等多种生物学活性［3-5］。但迄今为止，尚未见对其抗辐射损伤的免疫调节作用研究报告，本文主要研究姬松茸多糖对辐射损伤大鼠淋巴细胞增殖活性和红细胞溶血度的影响。

1　材料与方法

1.1原料及试剂

1.1.1姬松茸多糖购自西安森冉生物工程有限公司，多糖浓度为50%，产品批号：SR20140416。

1.1.2主要试剂淋巴细胞增殖活性（MTT）试剂盒、大鼠淋巴细胞分离液、PBS、1640培养基、红细胞裂解液、D-Hanks液，上述试剂均由青岛渝邑祥科贸有限公司提供。水合氯醛，由天津化学试剂一厂生产。

1.1.3实验动物实验动选择清洁级SD健康雄性大鼠40只，周龄6周，体重（140±20）g，于实验室适应性喂养1周。

1.1.4主要仪器紫外线分光光度计（美国Bechmann DU640型）、电子天平（BL121SS北京Sartorius）、离心机（德国Eppendorf 5801型）、酶标仪（美国Bio-Rad550型）、CO2培养箱（上海跃进医疗器械厂）等。

1.2辐射损伤大鼠模型建立

1.2.1实验动物及分组采用完全随机分组的方法将40只实验大鼠随机分为4组，正常对照组、模型对照组、姬松茸多糖低剂量组（100mg/kg·d）、姬松茸多糖高剂量组（200mg/ kg·d），每组10只，分笼饲养，自然昼夜，节律光照，饲养温度（20±5）℃，相对湿度为40%～60%。

1.2.2建立动物模型4组大鼠普通饲料适应性喂养7 d后开始造模，给予直线加速器X射线照射，皮源距100 cm，剂量率100 cGy/分，全身辐射，辐射剂量为5.0Gy。见表1。

表1　实验动物模型建立对照表

1.3实验内容

1.3.1体重测量用电子天平每日上午9点称量实验大鼠的体重，选取实验前、造模后、实验结束三次统计体重，进行分析。

1.3.2样品采集造模后灌胃饲养14 d，末次给药后24 h称重，腹腔注射10%水合氯醛给予麻醉（0.3m l/100 g），腹主动脉取血4m l。

1.3.3实验方法

1.3.3.1淋巴细胞增殖活性分离淋巴细胞悬液，接种于96孔板中，100μl/孔，每孔细胞数>100个。将培养板在培养箱（37℃，5%CO2）预培养。做细胞数目测定时，向每孔加入10μl的CCK-8溶液。在CO2培养箱内孵育2 h。用酶标仪测定在450～490 nm处的吸光度。

1.3.3.2红细胞溶解度取新鲜抗凝全血2ml，经生理盐水洗涤、离心配制成体积分数为1%的红细胞悬液，取4m l分装为A、B两管备用。A管加入2m l的过氧化氢，B管加入2ml的蒸馏水，于37℃水浴恒温箱温浴30min，后离心取其上清液用分光光度计在540 nm波长比色。

1.4实验数据处理采用SPSS19.0软件进行分析，数据以±s表示，采用t检验比较实验各组差别有无显著性。

2　结果

2.1一般情况造模前，4组实验大鼠体重无明显差异（P＞0.05），说明动物分组合理。造模后各组动物的体重较造模前均有所增加，模型对照组和姬松茸多糖高、低剂量组动物体重增加均显著低于正常对照组（P＜0.05）；干预后，姬松茸多糖高、低剂量组大鼠的体重较模型对照组均显著增加（P＜0.05）。见表2。

表2　实验大鼠造模前后体重变化

2.2姬松茸多糖对辐射损伤大鼠淋巴细胞增殖活性和红细胞溶解度的影响与正常对照组相比，模型对照组淋巴细胞增殖活性下降，差异有显著性（P＜0.05）；与模型对照组相比，姬松茸多糖高、低剂量组淋巴细胞增殖活性升高，差异有显著性（P＜0.05）；与姬松茸多糖低剂量相比，姬松茸多糖高剂量组淋巴细胞增殖活性差异不显著（P＞0.05）。

与正常对照组相比，模型对照组组红细胞溶血度下降，差异有显著性（P＜0.05）；与模型对照组相比，姬松茸多糖低剂量组红细胞溶解度差异无显著性（P＞0.05），姬松茸多糖高剂量组红细胞溶解度升高，差异有显著性（P＜0.05）；与姬松茸多糖低剂量组相比，姬松茸多糖高剂量组红细胞溶血度升高，差异有显著性（P＞0.05）。见表3。

表3　姬松茸多糖对辐射损伤大鼠淋巴细胞增殖活性和红细胞溶解度的影响

3　讨论

随着工业信息技术的不断发展，电脑、微波炉、手机等电子设备的普及，生活中接触到的辐射越来越多，长时间接触辐射会对人体产生一定的危害。另外，接受放射治疗的癌症患者，以及辐射相关职业从业人员也会受到一定程度辐射损害，因此，辐射损伤逐渐受到人们的关注［6］。辐射损伤的主要危害之一是损伤机体免疫系统，降低淋巴细胞增殖活性以及红细胞溶血度等一系列免疫学指标，导致免疫力低下，引发各种病症。除此之外，辐射损伤还会对内分泌系统、神经系统、消化系统以及机体其他组织器官等各方面产生不同程度的危害。同时会引起记忆力衰退、视力下降、浑身无力、染色体畸变率升高以及细胞微核率升高等主要表现［7-9］。

在机体免疫系统中，淋巴细胞的增殖是人体对非己抗原刺激而产生免疫应答过程中的重要表现。机体经非己抗原刺激促进淋巴细胞增殖产生效应淋巴细胞，进而吞噬非己抗原，最终达到维护人体内环境稳定的目的。淋巴细胞增殖的效果直接影响效应淋巴细胞产生的数量，产生效应淋巴细胞的数量决定了人体免疫应答反应的强度，从而反映了人体细胞免疫的状态。因此，淋巴细胞增殖活性是衡量细胞免疫的一个检测指标［10］。本次实验结果表明辐射损伤后大鼠的淋巴细胞增殖活性明显下降，姬松茸多糖干预后淋巴细胞增殖活性较模型对照组明显上升，说明姬松茸多糖能显著提升辐射损伤大鼠的淋巴细胞增殖活性。

红细胞免疫是脊椎动物非特异性免疫系统的重要组成部分，其免疫活性与生物进化水平、环境因素、药物等密切相关。RBC免疫功能对环境和药物因素的改变较为敏感，是检测机体健康状况的一个重要指标［11］。本次实验结果表明辐射损伤后大鼠的红细胞溶血度明显下降，姬松茸多糖干预后红细胞溶血度较模型对照组明显上升，姬松茸多糖高剂量组的差异更显著，说明姬松茸多糖能显著提升辐射损伤大鼠的红细胞溶血度。

综上所述，姬松茸多糖可显著提高辐射损伤大鼠的淋巴细胞增殖活性和红细胞溶血度，对辐射损伤大鼠的免疫调节具有一定的保护作用。

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［2015-06-18收稿，2015-07-17修回］

［本文编辑：吴蓉］

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