益生菌对溃疡性结肠炎小鼠TNF—α表达的影响

耶绪龙　宦欣　于庆功

【摘要】 目的 探讨益生菌对溃疡性结肠炎（UC）小鼠结肠黏膜肿瘤坏死因子-α表达的影响及可能作用机制。方法 随机将20只雄性BALB/C小鼠分为实验组与对照组各10只。两组小鼠均给予100mg/Kg的三硝基苯磺酸乙醇（TNBS）溶液灌肠诱导溃疡性结肠炎。随后分别给予空灌胃针，对照组行生理盐水灌胃0.3ml/次，2 次/日。实验组行益生菌菌液0.6×106CFU/ml灌胃，观察两组小鼠的体重、粪便性状及隐血。1周后行结肠组织病理学评分；ELISA方法检测TNF-α表达。结果 TNBS灌肠后2组小鼠均不同程度出现腹泻、粘液便、血便等症状。实验组疾病活动指数为（3.02±0.72）；组织学损伤评分为（2.87±2.01）；结肠组织TNF-α的表达情况为（18.57±3.63）pg/ml；低于对照组（4.35±0.36）；（4.03±1.28）；（22.25±2.06）pg/ml（P<0.05）。结论 益生菌对急性UC有治疗作用，其机制可能与益生菌能抑制TNF-α的表达有关。

【关键词】溃疡性结肠炎；益生菌；肿瘤坏死因子-α

【中图分类号】R574.62 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0090-02

溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis，UC）是一种慢性非特异性炎症，病变呈弥漫性，其主要在黏膜和黏膜下层累计。近年UC的发病率逐年上升。有统计其发病率在西方国家可高达10～15/10万，患病率已超过200/10万[1]。有研究表明肠道内菌群的改变在UC发病中起重要作用。益生菌可能在调节肠道黏膜免疫和恢复肠上皮屏障功能上起到重要作用。

1、材料与方法

1.1一般材料： 健康20只雄性BALB/C小鼠，6-8 周龄，体重18.0±2.0g。饲养小鼠1周左右后，随机分为实验组与对照组各5只。

1.2方法：2组小鼠按照100mg/Kg体重的TNBS灌肠诱导结肠炎造模方法[2]：灌肠后分别给予空灌胃针。对照组小鼠进行生理盐水灌胃0.3ml/次，2 次/日。实验组给予益生菌菌液0.6×106CFU/ml灌胃。观察2组小鼠体质量改变和粪便性状，采用粪便隐血试剂盒检测粪便隐血，评估小鼠疾病活动指数=（体质量下降分数+粪便性状分数+便血分数）/3[3]。灌肠1周后处死小鼠，采用HE染色后按黏膜潰疡程度、上皮细胞增生程度、炎性细胞浸润程度、隐窝萎缩和坏死程度每项（0-2分）进行组织学损伤评分。距肛门4cm处取0.5cm长结肠组织2块，低温PBS溶液冲洗，组织匀浆并离心，取上清液用ELISA法检测结肠组织TNF-α表达。

1.3 统计学处理 数据结果以均数±标准差表示，计量资料进行方差齐性检验后，各组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），经SPSS13.0统计软件处理，以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 2组小鼠TNBS灌肠后均出现体质量降低、排黏液稀便数量增多，粪便隐血阳性等。实验组疾病活动指数（3.02±0.72）低于对照组疾病活动指数（4.35±0.36）（P<0.05）。

2.2 结肠组织病理学结果显示2组小鼠结肠上皮有不同程度损伤，细胞坏死，腺体破坏，黏膜下均可见炎性细胞浸润。实验组组织学评分：（2.87±2.01）明显低于对照组（4.03±1.28）（P<0.05）。

2.3 通过ELISA方法检测小鼠结肠组织中TNF-α的浓度。结果显示实验组为（18.57±3.63）pg/ml明显低于对照组（22.25±2.06）pg/ml（P<0.05）。

3、讨论

益生菌在肠道内黏膜的能量代谢、组织再生修复和肠道内免疫平衡过程中起重要作用， 肠道内肠黏膜所需能量的约60%以上来源于益生菌的氧化与吸收。有研究表明， 益生菌能通过改善UC肠黏膜的通透性使其恢复正常，同时抑制NF-κB的表达。Lührs等[4]证实， 用一种叫酪酸盐的益生菌灌肠治疗UC患者， 其临床症状可改善， 肠黏膜中NF-κB的表达也下调。有实验证实：肠道内益生菌可能是直接阻断TNF-α的过度表达， 进而消除肠道内炎症，并且可以促进肠上皮组织的再生和修复，可对溃疡性结肠炎达到治疗效果。

本实验结果显示：用益生菌治疗TNBS诱导的UC小鼠时，实验组结肠黏膜中TNF-α的表达低于对照组。可见益生菌能通过某种机制有效地抑制TNF-α的表达，进而减轻肠道的炎症反应，缓解UC的临床症状，起到治疗UC的作用。

参考文献

[1] Jiang XL， CUi HF. An analysis of 10218 ulcerative colitis cases in China.World J Gastroenterol. 2002， 8（1）：158-161.

[2]Mane J， Loren V， Pedrosa E， et al. Lactobacillus fermentum CECT 5716 prevents and reverts intestinal damage on TNBS-induced colitis in mice.Inflamm Bowel Dis， 2009，15： 1155-1163.

[3]Peran L， Camuesco D， Comalada M， et al. Preventative effects of a probiotic， Lactobacillus salivarius ssp. salivarius， in the TNBS model of rat colitis.World J Gastroenterol， 2005，11：5185-5192.

[4] Lührs H，Gerke T，Müller JG，et al.Butyrate inhibits NF-kappaB activation in lamina propriamacrophages of patients with ulcerative colitis. Scand J Gastroenterol， 2002，37：458-466.