奶牛乳房炎病原菌分离鉴定和耐药性的调查

程霞

摘要：奶牛乳房炎是由于物理、化学、生物等因素引起的乳房炎症，是奶牛常见病和多发病之一，给奶牛饲养业带来了巨大的经济损失。该病可使奶牛泌乳机能受损，生殖机能失调，导致产奶量下降，乳品质量发生改变，延长产后发情和妊娠时间，造成严重的经济损失。本文通过对奶牛乳房炎病原菌分离鉴定和其耐药程度的调查，可以更好地指导临床治疗工作。进行临床采集病原菌标本和耐药性实验，根本目的是为了防治奶牛乳房炎，促进我国奶制品产业的健康发展。

关键词：奶牛乳房炎；病原菌；耐药性调查

奶牛乳房炎主要是由微生物引起的一类疾病，物理或化学性损伤也可导致该病发生，它已成为世界奶牛养殖业的主要杀手，导致奶产量减少，乳品质量下降而造成巨大的经济损失，还会产生严重的食品安全问题。掌握奶牛乳房炎致病菌的种类和耐药性对预防治疗工作是至关重要的。

1 材料与方法

1.1 关键材料和试剂

培养基：普通营养琼脂、绵羊鲜血、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、甘露醇高盐琼脂、叠氮钠血；营养肉汤和各种生物微量鉴定管（购自兰州荣昌生物制品有限公司）。

试验试剂：阿莫西林、青霉素、庆大霉素、林可霉素、诺氟沙星、环丙沙星、红霉素、四环素、恩诺沙星。

1.2 采集乳样

乳样的数量是100份，在整个采集过程中注意清洁，采集之前用清水和酒精对乳头进行消毒，之后对乳头进行擦拭，擦拭材料应选择消毒纸。采样过程中要从第四奶开始采集，大约5～10mL，置于灭菌瓶中在零下20℃的温度下保存。

实验试剂：革兰氏染色试剂，CMT试剂，药敏纸片。

实验仪器：恒温培养箱、高压灭菌锅、接种针、L棒、酒精灯、吸管和锥形瓶等。

1.3 分离鉴定病原菌

在兀菌操作下，将普通琼脂培养基和血液琼脂培养基进行接种，放置在37℃的条件下约24～48h，选取不同的菌落涂片进行染色检查，从中分离出链球菌的菌株和葡萄球菌的菌株。在菌株培养工作完成后，将检验出的菌类进行株菌培养，加入营养汤缩短培养时间，时间在24h之内，再选用合理的试剂进行鉴定，鉴定过程要按照完整的流程，过程保持连续以免发生错误，在整个过程中要进行严格的兀菌操作，一旦被细菌感染，实验即兀效。

1.4 耐药性的实验

耐药性可选用较常见的药物进行测试，这些药物效果明显成本较低，比如青霉素类的、糖苷类的和四环素类的等等，具体的测试方法包括3个程序：通过可行的方法来调节菌液的浓度，再将细菌进行涂片来接种，实验结束后，测量出具体的数据并认真记录。

2 结果分析

2.1 细菌分离

在100份样品中查出有91份含有6种病原菌，其中金黄色葡萄球菌占52.78%，表皮葡萄球菌占12.67%，停乳链球菌占20.83%，无乳链球菌占2.12%，乳房链球菌占6.94%，大肠杆菌占2.78%。根据分离和鉴定，总细菌中主要的细菌有金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌、停乳链球菌以及其他细菌等。

2.2 耐藥性实验

对复方新诺明有较强耐药性的菌类：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乳房链球菌和大肠杆菌；对四环素有较强耐药性的菌类：金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌；对万古霉素和青霉素有较强耐药性的菌类：大肠杆菌和停乳链球菌。接种有分离菌落营养肉汤的小白鼠12h后，出现腹泻，发烧各状况，精神萎靡，18h后死亡3只，其他没有太大变化，收集死亡小白鼠肝脏、脾病料，涂片。革兰氏显镜与上述细菌分离生化结果是一样的。

3 讨论

经过本次调查，发现奶牛乳房炎的致病菌种类主要有葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌，其中葡萄球菌46株，站24.8%，链球菌100株，占总数的55%，大肠杆菌34株，约占18.4%，其他细菌主要为沙门氏菌和棒状菌混合感染比较严重，这三种菌类的致病因素都与环境卫生质量差有关，因此发生奶牛乳房炎的主要原因是养殖场在饲养和挤奶过程中没有做好卫生工作。长期以来，人们一直关注如何防止奶牛乳房炎却没有考虑到卫生消毒问题。由于长期使用抗生素，养殖场中的细菌有一定的耐药性，消毒液不能杀死它们。因此，养殖户们要做好养殖场的卫生工作，保持舍内外清洁，挤奶过程中严把消毒关，做到提前预防，早发现，早治疗，严格控制病情的蔓延。

药敏实验表明：分离出的细菌很大部分对环丙沙星、氧氟沙星，左氧沙星有很大的刺激感应，不过对青霉素、红霉素等却有很大的耐药性，由此可见，奶牛市场防治乳房炎的药物使用有很大的盲目性存在，过度使用青霉素、红霉素这些抗生素，免疫系统就会出现很大的抗药性，导致细菌肆意滋生，因此要加强抗生素科学用药的宣传。

目前，在奶牛乳房炎的防治过程中，抗生素仍发挥着难以比拟的作用，但它也造成了很大的问题，大量的耐药性细菌使奶牛的生活环境受到威胁。这就要求在病症出现时，要采用药物交叉使用的方法，防止菌体内出现耐药基因。