头孢米诺与维多利亚蓝B的显色反应及应用

江 虹， 胡文蓉， 庞向东

(长江师范学院化学化工学院，重庆 408100)

头孢米诺钠为头霉素衍生物，由半合成法制取，其作用和性质与第三代头孢菌素相近，对革兰阳性菌和革兰阴性菌具有广谱抗菌活性，临床上主要用于敏感细菌引起的败血症、扁桃体炎、支气管炎、肺炎、肾盂肾炎、膀胱炎、胆囊炎、胆管炎、腹膜炎、盆腔腹膜炎、子宫附件炎、子宫内感染、盆腔死腔炎、子宫旁组织炎等各种感染的治疗。目前，测定头孢米诺的方法主要是高效液相色谱法[1 - 3]，也有毛细管电泳法[4]、化学发光法[5]和荷移分光光度法[6]的报道。而高效液相色谱法除仪器价格较贵不易普及外，还存在实验时间长、前处理较麻烦等问题。

本实验用维多利亚蓝B作探针，采用分光光度法研究了头孢米诺含量的定量分析方法。该方法的灵敏度比文献方法[6](ε=1.47×104L/(mol·cm))高约3倍，且可在两个波长下选择测定。方法用于头孢米诺钠药物及人体尿液中头孢米诺含量的测定，结果满意。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

U-3010型紫外-可见分光光度计(日本，日立公司)；pHS-3C 精密酸度计。

头孢米诺(CEMI，重庆药检所提供)标准溶液：配成519.6 mg/L 储备液，冰箱中4 ℃保存，用时稀释10倍。维多利亚蓝B(VB，成都市科龙化工试剂厂)溶液：1.0×10-3mol/L。三羟甲基氨基甲烷(Tris)-HCl缓冲溶液：0.1 mol/L HCl和0.2 mol/L Tris混合，用酸度计调节，配成pH=3.0～9.8的系列缓冲溶液。所用试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。

1.2 实验方法

于10 mL具塞比色管中，依次准确加入适量的51.96 mg/L CEMI 标准溶液或头孢米诺钠样液，0.50 mL pH=7.05 的 Tris-HCl 缓冲溶液，3.0 mL 1.0×10-3mol/L维多利亚蓝B溶液，用水稀释至刻度，摇匀，5 min后，以试剂空白作参比，在最大正吸收630 nm波长，或最大负吸收424 nm波长处测其吸光度A。

2 结果与讨论

2.1 吸收光谱

图1 吸收光谱

按实验方法配制溶液，以试剂空白作参比，在380～800 nm波长范围内扫描吸收光谱(图1)。结果表明，CEMI溶液在可见光区几乎无吸收，VB 溶液在可见光区有强烈吸收，其最大吸收波长位于504 nm，CEMI 与VB 溶液的反应产物在可见光区产生一个明显的正吸收峰和一个明显的负吸收峰，其最大正吸收波长位于630 nm，红移126 nm，其最大负吸收波长位于424 nm，紫移80 nm，由此说明CEMI 与 VB 反应确实生成了新物质。在630 nm 和424 nm 处，一定浓度范围的CEMI 与新物质的吸光度呈线性关系，遵从比耳定律，可用于CEMI 的定量分析。

可能的反应机理：VB属三苯甲烷类的碱性染料，CEMI中的羧酸根离子很容易与其以静电引力结合生成疏水性的物质。除此以外，维多利亚蓝B的结构中有一个对醌基，而头孢米诺的结构中含有氨基，它们中的未共用电子对可以与对醌基上的不饱和键发生共轭作用，使最大吸收峰红移，颜色加深，从而产生正吸收峰。在短波方向，VB 与CEMI 发生褪色反应，吸收峰紫移并产生负吸收，这种现象与生成的新物质的性质有关。

2.2 溶液酸度及用量的选择

在630 nm 处，试验了不同pH 值的 Tris-HCl缓冲溶液对体系吸光度的影响。结果表明：适宜的pH范围为7.05～7.68。实验用pH=7.05 的 Tris-HCl 缓冲溶液，用量在0.50～1.0 mL 范围内，体系的吸光度值相对较高，灵敏度较大。当缓冲溶液的用量大于1.0 mL或小于0.5 mL 时，体系的吸光度值均有不同程度的下降，故实验选用0.5 mL pH=7.05 的缓冲溶液。

2.3 显色剂溶液浓度的选择

在630 nm 处，试验了不同浓度的VB 溶液对体系吸光度的影响。结果表明：VB 溶液的浓度为 3.0×10-4mol/L 时，体系的吸光度相对较大。实验选用1.0×103mol/L VB 溶液3.0 mL。

2.4 试剂加入顺序的选择

在630 nm 处，试验了Tris-HCl溶液、CEMI 和VB 溶液在不同加入顺序时对体系吸光度的影响。结果表明：按实验方法中试剂加入顺序为最佳。

2.5 反应时间及稳定性

在630 nm 处，考察了不同时间对体系吸光度的影响。结果表明：CEMI 与 VB 的反应在5 min内即可完成，且在室温下放置2 h，其吸光度基本不变。实验选在5 min 后测定。

2.6 标准曲线及灵敏度

按实验方法配制标准系列溶液并分别在630 nm 和 424 nm 处测定溶液的吸光度，作A-c标准曲线。其一元线性回归方程、相关系数、线性范围及表观摩尔吸光系数等列于表1。

表1 标准曲线相关参数

2.7 方法的选择性

考察了630 nm 处某些常见物质对测定5.12 mg/L CEMI 的影响。结果表明：相对误差控制在 ±5% 以内时，下列物质不干扰测定：100倍的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、D-果糖、L-组氨酸、L-色氨酸、L-亮氨酸、NaCl、KCl，50倍的甘氨酸、谷氨酸、柠檬酸三钠；20倍的KNO3、Mg(NO3)2、Pb(NO3)2、Na2S2O3；10倍的抗坏血酸、尿素、头孢西丁、CaCl2、BaCl2；5倍的FeCl3。方法具有较好的选择性。

2.8 样品测定

取注射用头孢米诺钠(山西威奇达药业有限公司)1支，将其内容物溶解后转入1 000 mL 容量瓶中，用水稀至刻度，摇匀。取该液3.00 mL稀释至100 mL，摇匀，即为待测液。取待测液1.0 mL按实验方法配制溶液，在最大正吸收波长处测定头孢米诺钠溶液中 CEMI 的含量，平行测定6份，同时做加标回收试验，结果见表2。取正常人的尿样过滤，并将滤液稀释10倍。取1.0 mL 稀释液按实验方法配制溶液，在最大正吸收波长处测定尿样中 CEMI 的含量，并做加标回收试验，结果见表2。

表2 样品分析结果及回收试验(n=6)

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3 结论

本方法简便、快速、灵敏，可用于药物及尿样中头孢米诺含量的测定，也可用于头孢米诺生产过程中的质量控制。