心安宁片质量标准研究

郭强

(河南省食品药品检验所，河南 郑州 450003)

·中药工业·

心安宁片质量标准研究

郭强*

(河南省食品药品检验所，河南 郑州 450003)

目的：建立心安宁片质量标准。方法：采用薄层鉴别方法进行定性鉴别，运用高效液相色谱法测定葛根素的含量。结果：确立了制剂中葛根、制何首乌的鉴别方法。通过方法学系统考察，建立了葛根素的含量测定方法，其葛根素的线性范围为0.212～3.392 μg，回归方程：Y=4 528 774X-79 624(r=0.999 9)，平均加样回收率为98.9%，RSD=2.64%(n=6)。结论：建立的鉴别和含量测定方法简便、准确、重复性好，适用于心安宁片的质量控制。

心安宁片；葛根；制何首乌；二苯乙烯苷；葛根素；高效液相色谱

心安宁片收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》(第四册)，由葛根、山楂、制何首乌、珍珠粉4味中药组成，具有养阴宁心、化瘀通络、降血脂的功能，用于血脂过高、心绞痛以及高血压引起的头痛、头晕、耳鸣、心悸等症[1]。原质量标准只收载了其性状和检查项，并无定性鉴别和含量测定项，为了有效地控制心安宁片的质量，本文采用TLC对葛根、制何首乌进行鉴别，采用HPLC测定葛根中葛根素的含量，将其作为控制本制剂内在质量的指标。

1 仪器与材料

Waters2695高效液相色谱仪(配四元泵、自动进样器、Waters2487紫外检测器)；安捷伦1100高效液相色谱仪(配四元泵、自动进样器、VWD紫外检测器)。

心安宁片(实验室自制)；葛根对照药材、制何首乌对照药材、二苯乙烯苷、葛根素(中国食品药品检定研究院，批号分别为121551-200601，121454-200703，110844-200606，110752-200511)；甲醇为(德国Merck公司)色谱醇；水为超纯水；其他溶剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 葛根的薄层色谱鉴别 取心安宁片4片，除去糖衣，研细，加入三氯甲烷50 mL，超声10 min，放冷，滤过，残渣加甲醇10 mL，放置2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL,使其溶解，作为供试品溶液[2]。另取葛根对照药材0.8 g，同法制成对照药材溶液。再取葛根素对照品，加甲醇制成质量浓度为1 mg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。按其处方比例制备不含葛根的阴性样品，照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国人民共和国药典》2010版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述4种溶液各10 μL，分别点于同一用羧甲基纤维素钠制备的硅胶G薄层板上，使其成条状，以三氯甲烷-甲醇-水(7∶>2.5∶>0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑，阴性对照无干扰。

2.1.2 制何首乌的薄层色谱鉴别 取心安宁片4片，除去糖衣，研细，加乙醚50 mL，超声处理20 min，滤过，残渣用水饱和的正丁醇提取2次，每次30 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL，使其溶解，作为供试品溶液[2]。另取制何首乌对照药材0.25 g，加乙醇20 mL，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至3 mL，作为对照药材溶液。再取二苯乙烯苷对照品，加甲醇制成质量浓度为0.5 mg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。按其处方比例制备不含制何首乌的阴性样品，照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国人民共和国药典》2010版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述4种溶液各3 μL，分别点于同一用羧甲基纤维素钠制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲醇(6∶>2∶>1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸硫酸溶液，稍加热。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。

2.2 葛根素的含量测定

2.2.1 色谱条件 填充剂为用十八烷基硅烷基键合硅胶；流动相为甲醇-水(25∶>75)；检测波长为250 nm；流速为1.0 mL·min-1；柱温为35 ℃；进样量为10 μL；理论板数按葛根素峰计算应不低于4000。

2.2.2 供试品溶液的制备 取心安宁片20片，除去糖衣，研细，取约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[2-6]。

2.2.3 对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇制成质量浓度为80 μg·mL-1的溶液，即得。

2.2.4 阴性对照品溶液的制备 按处方取不含葛根的其他药材，照本制剂的制备工艺制成阴性对照制剂，再按2.2.2项下方法制成阴性对照溶液。

2.2.5 阴性干扰试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪。结果表明，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上有色谱峰，而阴性对照色谱中在与对照品色谱相应位置上则未出现明显色谱峰，表明在该HPLC测定条件下，葛根素的测定无明显干扰。见图1。

A.葛根素对照品；B.供试品；C.缺葛根的阴性对照品；1.葛根素图1 心安宁片对照品、供试品及阴性对照溶液HPLC图

2.2.6 线性关系考察 精密取葛根素对照品，分别制成质量浓度为21.2、42.4、84.8、169.6、339.2 μg·mL-1的样品，进样量10 μL，测定峰面积，将样品质量浓度与峰面积进行线性回归，回归方程为Y=4 528 774X-79 624(r=0.999 9)，葛根素在0.212～3.392 μg呈良好的线性关系。

2.2.7 精密度 精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定峰面积积分值，结果RSD=0.78%，表明精密度良好。

2.2.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号：110101)10 μL，分别在0、2、4、6、8、10 h内注入液相色谱仪中，测定葛根素峰面积，结果表明本品在10 h内稳定，RSD=0.8%。

2.2.9 重复性试验 取同一批号(批号：110101)样品6份，按2.2.2项下方法，制备6份供试品溶液，分别测定葛根素含量，结果平均质量分数为22.7 mg·g-1，RSD=1.5%，表明样品的重复性良好。

2.2.10 加样回收率试验 取已知含量的样品(批号：110101，葛根素质量分数为22.7 mg·g-1)6份，每份约0.1 g，精密加入对照品溶液(质量浓度为0.045 4 mg·mL-1，配制方法：精密量取葛根素对照品22.70 mg，加入30%乙醇溶解并定容至500 mL)50 mL，按上述含量测定方法进行测定，结果见表1。

表1 心安宁片中葛根素回收率测定(n=6)

2.2.11 样品测定 取10批样品按2.2.2项下方法制成供试品溶液，注入液相色谱仪，按2.2.1的色谱条件进样，并按外标一点法测定葛根素的含量，结果见表2。

由表2可知，10批样品中葛根素平均质量分数为21.7 mg·g-1，按含量平均值的80%折算成每片的含量作为含量测定的指标，暂定心安宁片每片含葛根以葛根素(C21H20O9)计，不得少于5.2 mg。

表2 心安宁片中葛根素含量测定

注：样品规格为片芯重0.3 g。

3 讨论

3.1指标选定依据 葛根为方中主药，具有解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络的功能，可用于治疗发热头痛，眩晕头痛，中风偏瘫，胸痹心痛。葛根素是葛根的主要药理活性成分，因此将葛根对照药材、葛根素对照品和葛根素的定量列入心安宁片质量标准。方中制何首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨、化浊降脂的功能。二苯乙烯苷是制何首乌中主要药理活性成分，据文献报道[7]，二苯乙烯苷已在降血脂等方面显示出药理活性，因此将制何首乌对照药材及二苯乙烯苷作为定性鉴别的指标。薄层色谱研究中，曾选定对山楂中熊果酸进行鉴别研究，结果阴性对照有干扰，故山楂暂不定入质量标准。

3.2含量测定提取方法选择 含量测定中，供试品溶液提取溶剂选用了甲醇、95%乙醇、30%乙醇3种，但甲醇提取容易使葛根素不易分离，而95%乙醇测得的葛根素含量偏低，参照《中国人民共和国药典》2010版一部葛根含量测定项下方法，选定30%乙醇作为提取溶剂。提取方法比较了超声提取和回流提取，结果同在30 min超声时间条件下，回流提取所得含量相对更高，故选用回流提取。分别加入30%乙醇25、50、100 mL，结果在其他条件相同的情况下，加入30%乙醇25 mL所得含量偏小，而50 mL与100 mL的结果接近，故选用加入30%乙醇50 mL，回流提取30 min作为心安宁片的提取方法。

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂：第四册[S].北京，1991：51.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：312-313，715-716.

[3] 闫春风，徐晓伟，李君，等.HPLC测定柴芩软胶囊中葛根素的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(18)：98-99.

[4] 黄平，陶秀华，邾枝花.HPLC测定丹葛胶囊剂中葛根素的含量[J].安徽卫生职业技术学院学报，2012，11(5)：83-84.

[5] 任晓明，赵辉，夏洪颖.HPLC法测定降压平片中葛根素的含量[J].中国药师，2012，15(10)：1510-1511.

[6] 刘利敏，胡译方.HPLC法同时测定葛根芩连片黄芩苷和葛根素的含量[J].安徽医药，2012，16(11)：1598-1599.

[7] 鲁坚，侯双菊，千梅，等.二苯乙烯苷的研究进展[J].安徽化工，2006，141(3)：10-13.

StudiesonQualityStandardofXin’anningTablets

GUOQiang*

(HenanInstituteforFoodandDrugControl，Zhengzhou450003，China)

Objective：To establish the quality standards for Xin’anning Tablets.Methods：TLC was adopted for qualitative identification.The content of puerarin was detected by HPLC.Results：The identifying method of kudzu root and Radix Polygonum Multiflorum was established.The determination method for the content of puerarin was established.The calibration curve of puerarin was liner in the range of 0.212-3.392 μg.The regression equation wasY=4 528 774X-79 624(r=0.999 9).The average recovery was 98.9% and RSD was 2.64%(n=6).Conclusion：The method is simple，accurate and reproducible.It can be used for the quality control.

Xin’anning Tablets；kudzu root；Radix Polygonum Multiflorum；stilene glucoside；puerarin；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.3.016

2014-07-04)

*

郭强，主管药师，研究方向：药品检验及药品质量标准；Tel：(0371)63388128，E-mail：35451981@qq.com