王氏连朴饮对脾胃湿热证大鼠血清ALD、血浆ADH和β-EP影响的研究

钱益啸，李云鹏，陈景良，钟伟丽，贺婧，文小敏*（.南方医科大学中医药学院，广东广州5055；.南方医科大学中西医结合医院，广东广州5035）

王氏连朴饮对脾胃湿热证大鼠血清ALD、血浆ADH和β-EP影响的研究

钱益啸1，李云鹏1，陈景良2，钟伟丽2，贺婧2，文小敏1*
（1.南方医科大学中医药学院，广东广州510515；2.南方医科大学中西医结合医院，广东广州510315）

目的观察脾胃湿热证模型大鼠中血清醛固酮（ALD）、血浆抗利尿激素（ADH）及β-内啡肽（β-EP）的变化，并探讨王氏连朴饮的调控作用。方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、王氏连朴饮（高、中、低剂量）组。除正常对照组外，其余各组均采用复合因素法（外部湿热环境+肥甘饮食+病原微生物）造成脾胃湿热证大鼠模型，造模后按不同剂量组给予中药灌胃，采用放射免疫法检测血清ALD、血浆ADH和β-EP的水平。结果与模型组比较，王氏连朴饮（高、中、低剂量）组ALD、ADH以及β-EP水平明显降低（P＜0.01）；中剂量组与高、低剂量组之间比较水平降低，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。结论复合因素造模可以使脾胃湿热证大鼠ALD、ADH和β-EP发生异常改变，王氏连朴饮可降低ALD、ADH和β-EP的释放水平，且以中剂量组效果最好，这可能是其清热祛湿的作用机制之一。

王氏连朴饮；脾胃湿热证；醛固酮；抗利尿激素；β-内啡肽

〔Abstract〕ObjectiveTo observe the changes of serum ALD，plasma ADH and plasma β-EP in with damp-heat syndrome of spleen-stomach and the regulative action of Wangshi Lianpu drink（WSLPY）.Methods Forty male Wister rats wererandomlydividedintonormalcontrolgroup（NCG），modelgroup（MG），highdoseofWSLPYgroup （HWG），moderate dose of WSLPY group（MWG）and low dose of WSLPY group（LWG）.The mouse models in all groups but the normal control group were built with the compound factor method.The levels of ALD，ADH，and β-EP were detected by radioimmunoassay.Results Compared with normal control group，the concentration of ADH，β-EP in plasma and serum ALD of the rats in the model group increased significantly（P＜0.01）.Compared with the MWG and LWG，the MWG can reduce the levels of ADH，β-EP and ALD（P＜0.05，P＜0.01）.Conclusion The complex factors way that establishing the model rats withthespleenandstomachdamp-heatsyndromecanchangetheconcentrationofADH，β-EPandALD. Wangshi Lianpu drink could regulate the status of ALD，ADH and β-EP which was probably one of its mechanisms of clearing heat and expelling damp.

〔Keywords〕Wangshi Lianpu drink；damp-heat syndrome of spleen-stomach；ALD；ADH；β-EP

脾胃湿热证是指由于湿热内蕴中焦，脾胃功能失调为主要证候的一类湿热病证［1］，其临床症状复杂多变，病程日久缠绵。在其发生发展过程中，多种致病因素、湿热之邪和其他因素对人体的刺激引起机体做出应激反应，而下丘脑-垂体-肾上腺皮质（HPA）轴作为应激的枢纽，会发生神经-内分泌的改变。本文拟通过复合因素（外部湿热环境+肥甘饮食+病原微生物）造模［2-3］，探讨脾胃湿热证模型大鼠血清醛固酮（ALD）、血浆抗利尿激素（ADH）及β-内啡肽（β-EP）的变化，及王氏连朴饮清热祛湿的作用机制，现报道如下。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物南方医科大学实验动物中心提供40只SPF级雄性Wistar大鼠，体质量180～220 g，合格证号为SCXK（粤）2006-0015。

1.1.2药物药物均购自南方医科大学南方医院中药房，参照清·王孟英《霍乱论》原方组成：制厚朴6 g，川黄连、石菖蒲、制半夏各3 g，香豉、焦山栀各9 g，芦根60 g。把各药物在水中浸泡至少30 min，加约为药量8倍的水量，煎煮3次，采用冷凝管收集蒸汽中所挥发性的药物成分，并将3次药汁混合，离心取澄清药汁。依据《中药药理研究方法学》［4］中的人与大鼠之间剂量换算公式（大鼠按200 g/只计算），浓缩配制成浓度为0.48、0.97、1.94 g/mL的药液，存放于4℃冰箱备用。

1.1.3菌种及试剂ALD、ADH和β-EP放免试剂盒均购自北京普尔伟业生物科技有限公司。侵袭性大肠杆菌，浓度为109/mL，由南方医科大学微生物实验室提供。

1.1.4高糖高脂饲料采用自制饲料，于普通饲料中混入12%猪油和8%蜂蜜混合加工而成，由南方医科大学实验动物中心制作提供。

1.1.5主要仪器AvantiTM230型超速冷冻离心机（美国BECKMAN公司）；SN-695型放射免疫γ计数测量系统（上海核福光电仪器有限公司）；仿真模拟气候仓［模拟湿热环境设置为温度（33±2）℃、相对湿度75%±5℅，由南方医科大学公共卫生热带学院提供］。

1.2方法

1.2.1动物分组将40只SPF级雄性Wistar大鼠按随机数字表法抽取8只，分在正常对照组，其余32只造模后随机分为模型组、王氏连朴饮（高、中、低剂量）4组，每组8只。造模前所有动物适应性饲养3 d后禁食12 h，自由饮水。

1.2.2造模与给药（1）正常对照组：在20～28℃温度，50%～60%相对湿度的环境下，给以普通混合饲料、清水饲喂，每日上午9时投食。（2）脾胃湿热证大鼠模型：在20～28℃温度，50%～60%相对湿度环境下，给以高糖高脂饲料喂养10 d。然后置于仿真模拟气候仓（每天上午9时至11时）共8 d。第19天回归自然环境，上午9时开始灌胃：模型组按2 mL/200 g给予大肠杆菌1次，24 h后再加强感染1次（1 mL/200 g）；王氏连朴饮高、中、低剂量组分别给予浓度为1.94、0.97、0.48 g/mL的王氏连朴饮煎剂灌服大鼠（2 mL/200 g体质量），1次/d。7 d后所有动物处死取相关组织并做检查。

1.2.3标本采集及检测大鼠于处死前，禁食、不禁水12 h，用10%水合氯醛按照0.72 mL/200 g腹腔注射麻醉后迅速打开腹腔：（1）检测ALD：经腹主动脉采血2 mL置入普通采血管，待凝固后，进行4℃3 000 r/min离心10 min，分离血清，冻存于-20℃冰箱待测。（2）检测ADH、β-EP：经腹主动脉采血2 mL置入加有乙二胺四乙酸和抑肽酶的采血管内，轻缓混匀，进行4℃3 000 r/min离心10 min，分离血浆，冻存于-20℃冰箱待测。以上标本均利用放射免疫法检测，按照试剂盒说明严格操作。

1.3统计学分析

2　结果

与正常对照组比较，模型组血清ALD、血浆ADH、β-EP显著升高，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。经灌服王氏连朴饮1周后，与模型组比较，王氏连朴饮（高、中、低剂量组）的ADH和β-EP均有下降，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。对ADH、β-EP的影响，中剂量与高、低剂量比较，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），而高剂量与低剂量之间，差异无统计学意义（P＞0.05）。对ALD的影响，王氏连朴饮（高、中、低剂量）组之间，差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1。

表1　各组大鼠血清ALD、血浆ADH以及β-EP含量比较（±s，n=8，pg/mL）

表1　各组大鼠血清ALD、血浆ADH以及β-EP含量比较（±s，n=8，pg/mL）

注：与模型组比较**P＜0.01；与正常对照组比较##P＜0.01；与王氏连朴饮中剂量组比较△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别正常对照组模型组王氏连朴饮高剂量组王氏连朴饮中剂量组王氏连朴饮低剂量组ALD 0.13±0.02** 0.26±0.03 0.16±0.02** 0.14±0.02** 0.15±0.02** ADH 132.26±24.54** 295.99±34.33 235.05±24.49**##△△191.06±20.55**##241.14±23.57**##△△β-EP 472.37±33.68** 698.26±62.95 597.20±54.20**##△△511.59±51.66** 568.02±51.61**##△

3　讨论

脾胃湿热证是临床常见和多发病证，其发生原因多样，中医认为主要和外部湿热环境、饮食不节、内伤脾胃等多种因素有关。查阅相关文献［5-8］发现：清代医家王孟英在《霍乱论》中提出的王氏连朴饮是治疗这一症候的首选方之一，方中栀子、黄连性均苦寒，共奏清热泻火燥湿之功，而厚朴、半夏、石菖蒲三者配伍并施，苦温和辛温相配，辛苦开泄，燥湿化浊，半夏兼和胃止呕之效，豆豉透热，芦根生津，有清热燥湿、理气化浊之功。

目前对脾胃湿热证的相关发病机制仍不十分清楚，但考虑内外湿热、肥甘厚腻以及湿热之品刺激之下，机体内部会出现全身性的非特异性反应，以及神经内分泌的兴奋表现，在行为和内环境的代谢等各方面也都会产生相应的变化［9］，这可能与神经内分泌系统的相关改变有关。本课题组［10］前期已通过大量相关实验发现SPF级Wistar大鼠在脾胃湿热复合因素造模的过程中，湿热环境、高脂高糖饮食和生物刺激会让大鼠发生一定的应激反应，神经内分泌系统出现兴奋，HPA轴进入亢进状态，其中血清皮质醇和促肾上腺皮质激素分泌水平明显增高。在神经内分泌系统中，β-EP是一种与体内应激反应关系密切的内源性阿片肽，有研究表明［11］炎性疼痛使β-EP的消耗增多，促使体内合成与释放更多的β-EP来对抗疼痛，使痛与镇痛维持在一个较高的水平，这是机体对伤害性刺激自身的适应性调整。有研究显示［12］缩泉丸可以增加自然衰老大鼠血中ALD和ADH的含量，有明显的抗利尿作用，可以从调节水、电解质的重吸收和分泌发挥作用。刘德芳等［13］在进行湿阻中焦证大鼠造模过程中发现，湿阻中焦证大鼠的ADH释放和ALD分泌水平均有升高的趋势，提示两者可能共同参与了湿阻中焦证模型中水、电解质平衡的调节。此外研究还发现［14］，在一定的热暴露后，可引起机体水盐代谢紊乱，并通过HPA轴的神经内分泌参与了热应激的反应，肾素-血管紧张素-醛固酮系统这在一过程中具有重要作用。而ALD也会作用于中枢神经系统中的下丘脑，下丘脑分泌激素促使垂体释放ADH，来进行肾小管对水分的重吸收作用。ALD、ADH的相互作用对水盐代谢及维持机体内环境的恒定起着重要作用。

本实验结果显示脾胃湿热证模型组大鼠ALD、ADH及β-EP的表达升高，与正常对照组比较有统计学意义，表明脾胃湿热证大鼠机体在对抗湿热刺激，体内钠离子及水份的吸收增加，远端肾小管与集合管水分重吸收加强，被保留在体内，存在水、钠潴留现象；灌服王氏连朴饮汤煎剂高、中、低3种剂量后，各组均有不同程度的降低，以中剂量组效果最好，ALD、ADH和β-EP表达与模型组比较有统计学意义，提示王氏连朴饮能调节内分泌激素使机体水电解质的平衡，适应环境改变，促进机体内稳定，其机制可能与上调神经内分泌激素表达有关，这可能是其清热祛湿作用机制之一。

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（本文编辑匡静之）

Effect of Wangshi Lianpu Drink on Serum ALD，Plasma ADH and β-EP in Rats with Damp-Heat Syndrome of Spleen-Stomach

QIAN Yixiao1，LI Yunpeng1，CHEN Jingliang2，ZHONG Weili2，HE Jing2，WEN Xiaomin1*
（1.College of Pharmacy，Southern Medical University，Guangzhou，Guangdong 510515，China；2.Hospital of Integrated TCM and Western Medicine，Southern Medical University，Guangzhou，Guangdong 510315，China）

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-070X.2015.02.006.017.03

2014-11-12

广东省中医药局项目资助（2008195）；广东省中医药局项目资助（20131242）。

钱益啸，男，在读硕士研究生，主要从事脾胃病的基础与临床治疗研究。

*文小敏，男，教授，医学博士，硕士研究生导师，E-mail：wxm@fimmu.com。