一例鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定

钱丽梅

(张家港市大新镇动物防疫站,江苏张家港 215600)

一例鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定

钱丽梅

(张家港市大新镇动物防疫站,江苏张家港 215600)

本实验从张家港某养鸡场采集临床疑似传染性候气管炎的病鸡喉头气管、肺脏等病料,接种鸡胚绒毛尿囊膜进行痘斑检查和琼脂扩散试验。结合临床、剖检和实验所得的结果可确认该病原为传染性喉气管炎病毒,并提出相应防治措施。

鸡传染性喉气管炎病毒;分离;鉴定

1 送检病鸡

2014年1月江苏金坛某农户送至动物医院发病死亡鸡，通过问诊，可知鸡场饲养近900只鸡，死亡40只，有出现张口呼吸，发病率不高，每日均可见10～20只鸡出现张口呼吸，咳嗽。

2 临床症状和剖检症状

发病鸡主要表现为精神沉郁、食欲不振、伸颈张口呼吸、咳嗽，产蛋下降。剖检鸡只可见喉头气管黏膜肿胀、充血，气管渗出多量黏液。根据流行病学特点、临床症状和病理变化可初步诊断为鸡传染性喉气管炎。采集病变组织通过实验室诊断方法进一步确诊病因[1]。

3 实验室检测

3.1 病料的采集与处理

疑似病料来源于江苏张家港某鸡场，采集病禽的喉头、气管和肺脏等病变组织，并将样品放入样品袋中，并做好标记，保存于-20℃冰箱中。实验前取出病料，在超净台中将采集的病料组织用剪刀剪碎、研磨，在剪碎的病料中按1：5加入含抗生素的PBS磨匀，移入数个指形管中，标记。将指形管放入液氮罐中冷冻，数十分钟后取出融化，反复冻融三次。将冻融过的指形管8000 r/min离心10 min，取上清液作为接种鸡胚的病毒材料。

3.2 鸡胚接种及痘斑检查

取上述病毒材料经绒毛尿囊膜接种10日龄SPF鸡胚，每胚接种0.2ml，石蜡封口，放入37℃恒温培养箱中孵育。每天观察鸡胚两次，连续检查7d，弃去24h内死亡的鸡胚，5d内死亡的鸡胚，放4℃冷却后，观察鸡胚绒毛尿囊膜上有无形成痘斑；7d后仍未死亡的鸡胚，置于4℃冰箱冷却，观察鸡胚绒毛尿囊膜上有无形成痘斑。

鸡胚接种病料后120h观察鸡胚，鸡胚出现死亡。剖检死亡鸡胚，绒毛尿囊膜上出现大小不等、数量不一的白色不透明样斑块，胚体表面充血，发育受阻。观察结果如图1所示：

3.3 琼脂扩散试验

使用梅花形打孔器打孔，挑出孔内琼脂，在火焰上封底。用移液器进行加样，中心孔加滴阳性血清，在周边相邻两孔内滴加待检抗原及试验用抗原对照，加样均以加满不溢出为度。加样后，静置，将平皿置37℃温箱中反应，经24～48 h观察结果。

待检抗原、对照用标准抗原与中心孔ILTV阳性血清之间，均出现明显的白色沉淀线。如图2所示：

图2 ILTV琼脂扩散试验1.ILTV阳性血清 2.标准抗原 3.待检抗原

4 小结与讨论

本实验从江苏张家港某养鸡场采集临床疑似ILT的病鸡喉头气管、肺脏等病料，通过接种鸡胚绒毛尿囊膜进行痘斑检查，结果表明该病毒在绒毛尿囊膜上可形成明显痘斑；通过琼脂扩散试验表明待检病毒与标准阳性血清之间可见明显的沉淀线。临床感染鸡表现出呼吸困难、咳出含血渗出物等特征病变。经痘斑检查、琼脂扩散试验及临床症状初步确定病原为传染性喉气管炎病毒。

由于目前对 ILT 尚无特效药物治疗，所以临床上常用对症综合治疗，以缓解症状，减少并发症的发生。如投服清热解毒、止咳镇痛、消炎为主的中成药以减少死亡。在饮水中添加红霉素、强力霉素或氨茶碱等药物防止继发感染，促进康复。用复合多维、加倍量饮水以及适当增加饲料中的蛋白质含量等增加机体抵抗力[2]。

[1] 卡尔尼克BW，高福等（译）.禽病学（第9版）[M].北京：北京农业出版社，1991：419- 426.

[2] 朱道中，辛朝安.传染性喉气管炎[J].养禽与禽病防治，1999，（3）：36-38.

图1 经CAM途径接种鸡胚后在CAM上形成的痘斑样病变（箭头指示）