高效液相色谱法测定牛黄解毒片中黄芩苷大黄素的含量

范亚刚 左文松 杨琰

摘要：目的采用高效液相色谱法测定牛黄解毒片中黄芩苷丶大黄素的含量。方法KromasilC18（150×4.6 mm，5 um）为分析柱，流动相为0.05%磷酸溶液-乙腈（75∶25），柱温30℃，流速1.0 mL·min-1，检测波长254 nm。结论本方法简便、快速，结果准确、可靠，重现性好，适用于牛黄解毒片中黄芩苷、大黄素的含量测定。

关键词：高效液相色谱；牛黄解毒片；含量测定；大黄素；黄芩苷

中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1007-2349（2015）05-0080-02

牛黄解毒片是一种历史悠久、疗效确切的中成药，为《中国药典》[1]一部收载品种，由人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草八味药组成，临床主要用于清热解毒，火热内盛，咽喉肿痛，牙龈肿痛，口舌生疮，目赤肿痛，原标准仅对黄芩中的黄芩苷进行了含量测定，文献资料[2～3]中，也多为对处方中的一味药大黄的5种成分进行含量研究，为更好的保证药品质量，笔者采用高效液相色谱法对大黄中的大黄素和黄芩中的黄芩苷进行同时测定。

1仪器与试药

1.1仪器岛津LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司）检测器：SPD-20A（D2+W）电子天平：CPA-225D，BP-221D

1.2试药黄芩苷、大黄素对照品均由中国药品生物制品检定所提供（纯度均为100.00%），牛黄解毒片由昆明中药厂提供。磷酸为分析纯、乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2方法

2.1色谱条件：KromasilC18（150×4.6 mm，5 mm）色谱柱；流动相为0.05%磷酸溶液：乙腈=75∶25；检测波长为254 nm；柱温：30℃，见图1。

2.2对照品贮备液的制备分别称取黄芩苷16.67 mg置于50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀；大黄素9.82 mg置于200 mL的容量瓶中加甲醇稀释至刻度摇匀，精密量取25 mL于50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，即得对照品贮备液。

2.3方法学考察

2.3.1线性关系考察精密量取各对照品贮备液，分别置于同一量瓶中，加甲醇分别制成含黄芩苷浓度0.006 7、0.013 0、0.033 4、0.066 7、0.100 0 mg/mL，大黄素0.000 491、0.000 982、0.002 455、0.004 910、0.007 365 mg/mL的溶液，取10ul注入液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，大黄素回归方程为y=4E+07x-140 4.6 R2=0.999 9，表明在0.000 491 mg/mL ～0.007 365 mg/mL范围内呈良好的线性关系；

黄芩苷回归方程为y=1E+07x-336 3.2 R2=0.999 8，表明在0.006 7 mg/mL ～0.100 0 mg/mL范围内呈良好的线性关系

2.3.2精密度试验精密称取样品0.252 4 g于50 mL容量瓶中，加少许50%甲醇溶液超声30 min，再加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取5 mL于10 mL容量瓶中加50%甲醇溶液稀释至刻度线摇匀，过滤，照液相色谱条件重复进样6次（n=6），大黄素和黄芩苷的RSD分别为 0.15%和0.05%，表明精密度良好。

2.3.3稳定性试验取2.3.2项下溶液于0、2、6、12，24 h进样测定，大黄素和黄芩苷的RSD分别为0.73%、0.85%，表明大黄素、黄芩苷在24 h内基本稳定。

2.3.4重复性试验精密称取同一批次牛黄解毒片细粉六份，按样品处理方法处理后进行测定，按外标法计算各组分的含量，大黄素和黄芩苷的RSD分别为 0.93%和1.07%，表明重复性良好。

2.3.5耐用性试验取样品溶液，分别采用不同比例的流动相、不同规格的色谱柱、不同柱温进行测定，结果表明该方法耐用性良好。

2.3.6回收率试验精密称取牛黄解毒片细粉六份分别置于六个50 mL容量瓶中，分别加入大黄素、黄芩苷对照品适量，加50%甲醇溶液少许超声30 min，再加50%甲醇溶液稀释至刻度线摇匀，过滤，精密量取10 uL注入液相色谱仪，计算回收率，大黄素平均回收率为100.46%，RSD%为1.27%，黄芩苷平均回收率为102.91%，RSD%为1.94%，表明该方法的回收率良好，结果见表1、2。

3结果与结论

1.经试验证明该法简便、快速、灵敏度高、结果准确，两种组分可同时测定，能更好的保证药品质量。

2.经紫外扫描，在254nm波长处测定灵敏度较高，峰形较好，分离较好干扰因素较少。故选择254nm为测定波长。

参考文献：

[1]《中国药典》2010版一部.

[2]牛黄解毒片中大黄五种成分的HPLC 测定 马 宁；罗 艳；黄海萍；龚秋红；胡良；中国医药工业杂志 230 2005，36（4）.

[3]李太平，丁小文，等.HPLC法测定牛黄解毒片中大黄素、大黄酸的含量中成药 2003，25（4）；293-295.