SORL1基因多态性与散发性阿尔茨海默病的关联分析

王 健 杨军平 陈 洁

SORL1基因多态性与散发性阿尔茨海默病的关联分析

王 健 杨军平 陈 洁

目的 探讨SORL1基因多态性与散发性阿尔茨海默病的关联。方法 选取诊断为阿尔茨海默病的住院患者50例为研究组，社区健康老年人50例为对照组，比较2组SORL1基因型及等位基因。结果 研究组与对照组SORL1基因型（AG、AA、GG）分别为（50%、32%、18%；24%、16%、60%），差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组与对照组等位基因（G、A）分别为（44、56；22、78），差异有统计学意义（P＜0.05）。研究组70～80岁人群与对照组70～80岁人群的SORL1基因型（AG、AA、GG）分别为（48%、28%、24%；24%、14%、62%），差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组与对照组等位基因（G、A）分别为（42、58；28、72），差异有统计学意义（P＜0.05）。研究组＞80岁人群与对照组＞80岁人群的SORL1基因型（AG、AA、GG）分别为（54%、26%、20%；20%、17%、63%），差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组与对照组等位基因（G、A）分别为（48、52；16、84），差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 中国人群SORL1基因rs2282649位点的多态性与散发性阿尔茨海默病可能有关联。

阿尔茨海默病；SORL1基因；多态性

阿尔茨海默病是退行性脑变性病，病因不明[1]。阿尔茨海默病患者多是散发性，少数为家族性。前者发病与环境因素和多个基因共同作用。研究发现获得性或遗传性的SORL1受体表达改变,可能是阿尔茨海默病发病的机制[2-4]。本研究的目的为检测散发性阿尔茨海默病患者SORL1基因进行检测，试图发现散发性阿尔茨海默病与SORL1基因多态性的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年7月～2014年6月江西中医药大学附属医院诊断为阿尔茨海默病的住院患者50例（男32例，女18例）为研究组，年龄64～86岁，平均年龄（74.1±10.3）岁；社区健康老年人50例（男30例，女20例）为对照组，年龄63～88岁，平均年龄（73.6±12.1）岁。2组人员性别、年龄比较，差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 入选标准及排除标准 入选标准：所有入院后的临床资料、治疗经过完整，就诊时生命体征平稳，每个阿尔茨海默病患者无亲缘关系，呈散发病例；研究组简易智力状态检查量表(MMSE)：中学毕业患者总分＜24分，小学毕业总分＜20分，文盲总分＜20分。排除指标：入院时生命体征不平稳的患者；有各种急性、慢性感染,严重肝、肾功能不全，恶性肿瘤，自身免疫性疾病者，恶性心律失常者。

1.3 研究方法

1.3.1 SORL1基因位点 SORL1基因的多态性位点接近5’端rs2282649(A/G)SNP。

1.3.2 上游引物 5cCATGATCCAAATTATATGTGAAAAATTCAAT 3c，错配引物设计,将A转换为 C，引入一个MunI的酶切识别序列：CDAATTG；下游引物：5cCCCAAGAACATCAGGACACCAAC 3c，扩增产物长度为：181bp。

1.3.3 PCR条件 96℃预变性6min,按97℃进行50s，65℃进行30s，73℃进行1min，反复循环30次,最后1次循环到73℃时，延伸6min，2%的琼脂糖凝胶电泳（含EB）检测产物。

1.3.4 SORL1基因rs2282649(A/G)SNP MunI限制性片段长度多态性分析 MunI内切酶加入扩增产物中，加上缓冲液，37℃消化2.5h。在琼脂糖凝胶上进行电泳，分离片段。溴化乙啶染色，电泳结果用紫外透射反射仪观察。

1.4 统计学方法 所有数据采用SPSS18.0统计学软件进行处理。计量资料采用“x±s”表示，组间比较采用t检验；计数资料用例数（n）表示，计数资料组间率（%）的比较采用χ2检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SORL1基因rs2282649位点A/G多态性检查 G等位基因为MunI酶切识别点位，结果有三种基因型：AA型，只有1个181bp片段；GG型，酶切后显示2个片段：28bp和153bp；AG有3个28bp、153bp、181bp片段。见图1。

图1 SORL1基因rs2282649位点A/G多态性检查

2.2 研究组与对照组SORL1基因型以及等位基因比较研究组与对照组SORL1基因型及等位基因，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 2组SORL1基因型及等位基因比较

2.3 不同年龄的研究组与对照组SORL1基因型以及等位基因比较 研究组（70～80岁及＞80岁）人群与对照组（70～80岁及＞80岁）人群的SORL1基因型和等位基因比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同年龄的研究组与对照组SORL1基因型及等位基因比较

3 讨论

阿尔茨海默病属于老年期痴呆的一种，约占痴呆患者的50%，特征为持续神经功能障碍，典型的临床表现为认知障碍、学习障碍、记忆障碍、空间认知机能、注意障碍、问题解决障碍，对家庭来说造成了极重的负担[5-6]。

SORL1属于低密度脂蛋白,为膜蛋白,主要穿梭于高尔基体、内涵体和质膜，位于人类 11号染色体的长臂q2312～q2412区域，SORL1受体表达减少，导致阿尔茨海默病的发生，SORL1受体由SORL1基因编码。有学者指出[7]，SORL1基因的多态性与阿尔茨海默病有关联，与本次研究一致。本研究发现，研究组人群与对照组人群的SORL1基因型和等位基因差异有统计学意义，即SORL1基因rs2282649位点的A/G SNP多态性有差异。本研究认为可能是SORL1基因的多态性与不同种群、不同遗传背景有关[8]，但SORL1基因还有多处位点，这也是以后笔者研究的方向，可以扩大样本来满足SORL1基因的多态性的不同点位的检测。

[1] Morris JC,Storandt M,Miller JP,et al.Mild cognitive impairment represents earlyst age Alzheimer disease[J].Archives of Neurology,2001,58（7）：397-405.

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[3] Farrer LA,Cupples LA,Haines JL,et al.Effects ofage,sex,and ethnicity on the association between apolipoprotein E genotype and Alzheimer disease,A meta-analysis1APOE and Alzheimer Disease Meta Analysis Consortium[J].JAMA,2013,278(16)：1349-1561.

[4] Offe K,Dodson SE,Shoemaker JT,et al.The lipoprotein receptor LR11 regulates amyloid beta production and amyloid precursorprotein traffic in endosomal compartments[J].JNeurosc,2012,26(5)：1596-1631.

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[6] American Psychiatry Association.Diagnostic and statistical manual of mental disorders,fourth edition(DSM-Ô)[M].Washington DC APA,2009：256-281.

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[8] Tan EK,Lee J,Chen CP,et al.SORL1 haplotypes modulate risk of Alzheimercs disease in Chinese[J].NeurobiolAging,2009,30(7)：1048-1051.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.20.062

江西中医药大学课题（20132R006）

江西 330006 江西中医药大学附属医院检验科 （王健 杨军平陈洁）