栝蒌薤白保健酒抗动脉粥样硬化的实验研究

刘宁宁,李鑫辉,李雅婧,葛 辉,姜友贵

栝蒌薤白保健酒抗动脉粥样硬化的实验研究

刘宁宁,李鑫辉,李雅婧,葛 辉,姜友贵

目的研究栝蒌薤白保健酒对动脉粥样硬化大鼠血脂和炎症因子的影响,探讨对动脉粥样硬化的保护作用机制。方法大鼠40只,随机分为空白组、模型组、他汀组、保健酒组,每组10只。采用全自动生化分析仪检测血脂水平,采用放射免疫法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)水平。结果与模型组比较,他汀组、保健酒组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、TNF-α和IL-2水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),与他汀组比较,保健酒组TC水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),TG、LDL-C、TNF-α和IL-2水平差异无统计学意义。结论栝蒌薤白保健酒对动脉粥样硬化鼠血脂和炎症因子具有调节作用,提示栝蒌薤白保健酒对动脉粥样硬化具有抑制作用。

动脉粥样硬化;栝蒌薤白保健酒;血脂;炎症因子

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种多因素参与的疾病,发病机制错综复杂,是心脑血管病发生的最主要原因,针对以上人群,自主研制了栝蒌薤白保健酒,是根据传统中药组方,结合现代新工艺研究制作的一种药酒。栝蒌薤白保健酒组方首见于《金匮要略》,主治“胸痹不得卧、心痛彻背”。方中栝蒌开结豁痰,薤白温中散结,复方栝蒌薤白白酒汤具有通阳散结、祛痰行气之功效。近代药理实验结果已表明,栝蒌、薤白具有扩张冠脉、缩小梗死面积、抗脂质过氧化、抗血小板聚集等作用[1,2]。本研究观察栝蒌薤白保健酒对血脂和炎症水平的影响,为栝蒌薤白保健酒抗动脉粥样硬化,防治心血管疾病提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD系大鼠40只,雌雄各半,清洁级,日龄30d～45d,体重150g～200g,由湖南中医药大学动物实验中心提供。

1.2 仪器 全自动生化分析仪,CL-7200型,岛津仪器厂生产;电热恒温水槽,SSW型,上海博迅实业有限公司生产;H- 600型透射电镜(Hitachi,Japan), Olympus显微镜(Japan);放射免疫计数器,acl500r型,中国科技大学。

1.3 试剂及药物 栝萎薤白保健酒,自发研制,含生药0.45 g/mL。维生素D3,购自上海第九制药厂;甲巯咪唑,购自上海中西药业股份有限公司;胆酸钠,购自温州生物化学制药厂;总胆固醇(TC),购自北京化学试剂公司;猪油为市售食用猪油;血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-2(IL-2)试剂,购自北京科美东雅生物技术有限公司;总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒,购自北京北化康泰临床试剂有限公司;阿托伐他汀钙片,辉瑞制药有限公司生产。

1.4 分组及给药 将大鼠按雌雄和体重分层,再用随机数字表法随机分为空白组、模型组、他汀组、保健酒组,每组10只大鼠,雌雄各半。给药剂量根据成人(60 kg)临床剂量,按动物体表面积换算,空白组和模型组在大鼠AS模型建立后灌胃蒸馏水10 mL/(kg·d);他汀组灌胃阿托伐他汀钙片,蒸馏水融化10 mL/(kg·d),含生药1.8 g/(kg·d);保健酒组灌胃栝蒌薤白保健酒2.7 mL/(kg·d),含生药1.2 g/(kg·d),每日1次,连续灌胃14 d。

1.5 大鼠AS模型建立 模型的复制参照温进坤等[3]的方法略作修改。空白组大鼠喂食普通饲料;模型组、他汀组、栝蒌薤白保健酒组建立AS模型,首先腹腔注射维生素D3(7×105IU/kg,分4次,隔2 d注射1次),然后喂食高脂饲料,在大鼠标准饲料配方中添加1%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.1%甲巯咪唑、5%猪油,93.4%为普通饲料[4]。按清洁级动物饲养,饮用洁净水,整个试验周期为8周。于造模8周后随机抽取空白组1只,造模组5只,观察主动脉的病理形态学变化,以观察到主动脉AS病变为标准确定造模成功。

1.6 检测指标 分别于8周后禁食过夜,鼠颈动脉取血,分离血清,采用全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C。采用放射免疫法测定血清TNF-α和IL-2。处死动物,分离各组大鼠主动脉弓,截取主动脉弓放入4%多聚甲醛固定液中固定,石蜡包埋、切片、HE染色,光镜观察主动脉形态以确定造模成功。

1.7 统计学处理 采用SPSS11.50统计软件分析,计量资料用均数±标准差(x±s)表示,多组间两两比较用单因素方差分析,方差齐时,两两比较用q检验,方差不齐时用非参数检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 栝蒌薤白保健酒对AS大鼠血脂水平的影响 与空白组比较,模型组TC、TG、LDL-C水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),说明大鼠AS模型建立后血脂水平明显升高,符合动脉粥样硬化特征。与模型组比较,他汀组、保健酒组TC、TG、LDL-C,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与他汀组比较,保健酒组TC,差异有统计学意义(P<0.05),TG、LDL-C水平差异无统计学意义。说明栝蒌薤白保健酒对AS大鼠有明显的降低血脂作用,且与他汀类药物降血脂水平相当。详见表1。

表1 各组血脂水平比较(±s)mmol/L

表1 各组血脂水平比较(±s)mmol/L

组别nTCTG LDLC空白组 101.31±0.12 0.52±0.12 1.15±0.05模型组 106.65±1.131)1.65±0.021)5.15±1.361)他汀组 103.15±1.561)3)0.82±0.121)3)2.63±1.331)3)保健酒组10 3.87±1.341)2)4)0.95±0.231)2)3.01±0.331)2)与空白组比较,1)P<0.01;与模型组比较,2)P<0.05,3) P<0.01;与他汀组比较,4)P<0.05。

2.2 栝蒌薤白保健酒对AS大鼠TNF-α和IL-2水平的影响 与空白组比较,模型组TNF-α和IL-2水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,他汀组、保健酒组TNF-α和IL-2水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);他汀组与保健酒组TNF-α和IL-2水平比较差异无统计学意义。说明栝蒌薤白保健酒对AS大鼠炎症因子水平有明显的抑制作用。详见表2。

表2 各组TNF-α和IL-2水平比较(±s)ng/mL

表2 各组TNF-α和IL-2水平比较(±s)ng/mL

组别n TNFαIL2空白组101.35±0.23 2.43±0.05模型组105.53±1.331)6.15±1.421)他汀组103.23±0.771)2)4.13±1.671)2)保健酒组102.95±1.121)3)4.01±1.131)2)与空白组比较,1)P<0.01;与模型组比较,2)P<0.05,3) P<0.01。

3 讨 论

动脉粥样硬化的特点是受累动脉病变从内膜开始。一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及血栓形成,纤维组织增生及钙质沉着,并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化,病变常累及弹性及大中等肌性动脉,一旦发展到阻塞动脉腔,则该动脉所供应的组织或器官将缺血或坏死。由于在动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样,因此称为动脉粥样硬化。本病的主要病理变化是动脉壁出现粥样斑块,而胆固醇和胆固醇酯则是构成粥样斑块的主要成分。临床资料表明,动脉粥样硬化常见于高胆固醇血症[5]。随着医学的发展,对动脉粥样硬化发病机制的研究转变为一种多种因素导致的炎症反应性疾病,炎症贯穿于动脉粥样硬化发生和发展的全过程,对动脉粥样硬化的形成和发展发挥了至关重要的作用[6]。炎症因子TNF-α和IL-2具有广泛的生物学活性,在动脉粥样硬化、代谢紊乱和炎症中发挥作用:可以降低高密度脂蛋白(HDL)水平及诱导胰岛素抵抗,诱导脂类和糖类代谢异常;也可导致内皮细胞功能障碍,促使血栓形成;并且还可以刺激炎症因子生成,直接发挥促炎作用,从而加速动脉粥样硬化的形成和发展。杜易平[7]探讨瑞舒伐他汀对兔动脉粥样硬化模型的斑块以及炎症因子的影响作用,结果显示瑞舒伐他汀能够较好地控制动脉粥样硬化模型兔的血脂水平以及炎症因子水平,减少动脉粥样硬化模型兔斑块的形成。陈晓等[8]研究显示,C反应蛋白(CRP)、TNF-α、白细胞介素-6(IL-6)等炎性因子的增加及脂质代谢紊乱与老年高血压患者颈动脉粥样硬化的发生关系密切。

AS属中医痰浊、血瘀的范畴。饮食不节、脾失健运而致痰浊,痰浊内聚,注入血脉,滞塞脉络,日久营血瘀滞,痰瘀互结,沉积血府,脉道失柔,这种痰浊瘀血相凝之结块即是AS斑块。栝蒌薤白白酒汤是治疗胸痹的名方,具有温通心阳,化痰通络的功效,从现代医学角度分析,栝蒌和薤白都有清除氧自由基的作用,因为氧自由基可以攻击蛋白质,使许多蛋白质功能丧失,直接作用于细胞膜与膜结。开发栝蒌薤白保健酒,研究其对动脉粥样硬化保护作用,采用喂食高脂饲料与一次性腹腔注射维生素D3相结合的方法,8周后成功建立了AS大鼠的模型,并在光镜下观察到了主动脉HE染色切片典型的AS斑块病变,实验结果显示保健酒对AS大鼠血脂水平有明显的降低作用,且与他汀类药物降血脂水平相当。观察栝蒌薤白保健酒对AS大鼠TNF-α和IL-2水平的影响,结果显示保健酒对AS大鼠炎症因子水平有明显的抑制作用。由此提示栝蒌薤白保健酒对动脉粥样硬化具有抑制作用。

随着生活水平的提高,人们对健康的需求也越来越高,栝蒌薤白保健酒不仅拥有纯粮酒的醇和,而且还可以调节生理机能。本研究提示栝蒌薤白保健酒对动脉粥样硬化具有抑制作用,因此栝蒌薤白保健酒达到养生和治病的目的,市场开发前景潜力较大。

参考文献:

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[6] 颜志钦,易兴阳,虞君儒,等.瑞舒伐他汀强化降脂对缺血性脑卒中血脂及颈动脉粥样硬化斑块的影响[J].中国药物与临床, 2013,13(11):1408-1419.

[7] 杜易平.瑞舒伐他汀对兔动脉粥样硬化斑块及炎症因子水平的影响[J].中国医药导报,2013,10(36):37-39.

[8] 陈晓,李玲芳.彩超联合CRP、TNF-α和IL-6评价老年高血压患者颈动脉粥样硬化的价值[J].放射免疫学杂志,2013,26(6): 830-831.

R543.5R289.5

:Adoi:10.3969/j.issn.1672-1349.2015.02.023

:1672-1349(2015)02-0198-03

2014-04-19)

(本文编辑郭怀印)

湖南省自然基金资助项目(No.12JJ3114);中国博士后基金项目(No.20110491254);湖南省教育厅基金项目(No.11C0962);湖南省大学生创新课题(No.180)

湖南中医药大学中医学院(长沙410208)

李鑫辉,E-mail:2208637467@qq.com