舒筋活血丸中羟基红花黄色素A的含量测定

杨银凤，幸 而，王 岩，曾源泉

（1.广东药学院，广东广州510006；2.广州诺金制药有限公司，广东广州513024）

舒筋活血丸中羟基红花黄色素A的含量测定

杨银凤1，2，幸 而2，王 岩1，曾源泉2

（1.广东药学院，广东广州510006；2.广州诺金制药有限公司，广东广州513024）

目的 完善舒筋活血丸的企业内控标准提供试验数据。方法 应用高效液相色谱法（HPLC）对舒筋活血丸（大蜜丸）中的羟基红花黄色素A进行定量分析。结果 建立了本品中羟基红花黄色素A的HPLC定量测定法，色谱图表明主成分专属性试验无干扰；精密度试验相对标准偏差（RSD）为0.13%；重复性试验RSD为1.95%；进样量在0.277 2～2.772 0 μg内呈良好线性关系，r=0.999 9；12 h内连续多次测定同一舒筋活血丸样品溶液，RSD为0.80%，表明稳定性良好；平均加样回收率为97.85%，RSD为1.88%。结论 HPLC法定量检测舒筋活血丸中羟基红花黄色素A方法可靠，可用于企业内部控制舒筋活血丸的质量。

活血； 筋； 红花； 色素类； 色谱法，高压液相； 质量控制； 舒筋活血丸； 羟基红花黄色素A

舒筋活血丸（大蜜丸）主要包括土鳖虫、红花、桃仁、大黄、苏木、续断、马钱子（制）等20味中药，具有舒筋活络功能，临床上主要用于跌打损伤、瘀血肿痛的治疗[1]。原卫生部颁布的标准中只有性状检查和制剂通则检查，未能准确有效地控制舒筋活血丸的质量。本文通过系列试验研究，应用高效液相色谱法（HPLC）定量检测舒筋活血丸中的羟基红花黄色素A，对其标准进行研究，以有效控制本企业所生产制剂质量。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 FC204电子天平，Shimadzu AUW-120D电子天平，KQ-1000DE型数控超声波清洗器，TDL-60B离心沉淀机，Waters Ac Quity H UPLC class液相色谱仪，Waters PDA检测器，Phenomenex C18柱。

1.1.2 试剂 舒筋活血丸（广州诺金制药有限公司，每丸6 g，批号：5A01601），羟基红花黄色素A对照品（按91.8%计，中国药品生物制品检定所，批号：11637-200905），乙腈、甲醇（广州飞恩新材料科技有限公司，色谱级），其余试剂为分析纯，硅藻土（天津市大茂化学试剂厂）。

1.2 方法[2-9]

1.2.1 色谱条件 Phenomenex C18柱（250.0 mm×4.6 mm，5 μ）；流动相为乙腈-甲醇-0.7%磷酸溶液（2∶26∶72）[2]，进样量10 μL，流速1.0 mL/min，按表1进行梯度洗脱，紫外检测波长为403 nm。A为甲醇，B为乙腈-0.7%磷酸溶液。

表1 洗脱梯度

1.2.2 对照品溶液制备 以25%甲醇为溶剂，将适量羟基红花黄色素A对照品（按91.8%计）置于容量瓶中[2]，制成130 μg/mL的对照品溶液，即得。

1.2.3 供试品溶液制备 取舒筋活血丸1丸，精密称定，加2/3样品量的硅藻土与样品混合研细，充分转移至具塞锥形瓶中[4]，精密加入50 mL 25%甲醇，盖上瓶塞，超声提取（功率300 W，频率50 kHz）40 min[2]，摇匀，提取液以4500r/min的速率离心15min，取上清液的续滤液，即得。

1.2.4 阴性样品溶液制备 取依据同一工艺要求制成的舒筋活血丸缺红花阴性制剂，按1.2.3项供试品处理方法，制备红花阴性样品溶液[5]，即得。

1.2.5 分析方法 分别将对照品、供试品及阴性样品溶液用0.22 μm滤头过滤，按1.2.1项下色谱条件注入液相色谱仪测定，得相应峰面积。

1.2.6 专属性考察 将1.2.2至1.2.4项下各溶液按前述色谱条件分别进行测定，得HPLC色谱图观察。

1.2.7 精密度考察 取同一份羟基红花黄色素A对照品溶液，按1.2.1项下所述条件，重复进样6次，记录主峰峰面积，计算得相对标准偏差（RSD）。

1.2.8 线性试验 精密称定羟基红花黄色素A对照品7.55 mg[2]，置于25 mL容量瓶中，以适量25%甲醇充分溶解，定容，即得。分别精密移取上述溶液1、2、3、5、7mL，加25%甲醇稀释至10 mL，并对所得6个不同浓度的对照品溶液进行测定，记录色谱峰面积，以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，作回归曲线，得相关系数。

1.2.9 稳定性考察 分别在0、120、240、360、480、600、720 min按照色谱方法对同一份舒筋活血丸样品溶液进行测定，记录色谱峰面积，得目标峰面积的RSD。

1.2.10 重复性试验 取6份相同批次的样品，按1.2.3项下方法制得样品待测液，按1.2.1所述条件分别测定，得色谱峰面积，计算样品溶液中主成分含量的RSD。

1.2.11 回收率试验 精密称取6份已测知主成分含量的舒筋活血丸3.0 g[9]，各加入2.0 g硅藻土研细，精密加入对照品溶液1.7 mL（0.277 2 mg/mL）[4]，按照指定方法检测，得RSD。

2 结 果

2.1 各组样品HPLC色谱图 数据统计结果显示，舒筋活血丸样品溶液在羟基红花黄色素A对照品相同保留时间处有一色谱峰，且阴性样品溶液在目标峰附近无干扰，达到了系统适应性要求。见图1～3。

2.2 专属性考察 HPLC色谱图显示阴性样品主成分保留时间附近无干扰。见图3。

图1 对照品溶液HPLC色谱图

图2 供试品溶液HPLC色谱图

图3 阴性样品溶液HPLC色谱图

2.3 精密度考察 6次主峰峰面积分别为3 416 008、3 406 401、3 404 738、3 405 946、3 410 298、3 412 327 μV·s，RSD为0.13%，结果表明本法精密度良好。

2.4 线性试验 相关系数为 0.999 9，回归方程 Y= 29 000 000X-39 090（n=6），结果表明进样量在0.277 2～2.772 0 μg内线性关系良好。

2.5 稳定性考察 目标峰面积的RSD为0.80%。结果表明舒筋活血丸样品溶液在12 h内具有良好稳定性。

2.6 重复性试验 样品溶液中主成分含量的RSD为1.95%。

2.7 回收率试验 RSD为1.88%，见表2。

表2 回收率试验结果

3 讨 论

本品为大蜜丸，需要用硅藻土进行分散，才能使药品有效成分得到充分提取。硅藻土的用量约为舒筋活血丸的2/3。由于舒筋活血丸中的药材细粉粒直径小，提取液采用滤纸过滤后，滤液很难通过0.22 μm的滤膜，故采用离心沉淀的方法除去细粉药渣，并对离心的时间和转速进行了考察，先后采用3 000 r/min 5 min，3 000 r/min 10 min，4 500 r/min 10 min，4 500 r/min 15 min进行离心，根据离心后上层溶液通过0.22 μm微孔滤膜的难易程度，最终选定转速4 500 r/min离心时间15 min。

传统工艺采用等度洗脱，20 min内各色谱峰分离度良好，但120min处仍有杂质峰，若洗脱时间少于120min，杂质峰会顺延至下一进样的谱图，影响谱图的真实性，故为了减少测定时间，洗除杂质，通过试验研究，改用梯度洗脱，大大提高了测定效率，并对本方法进行考察，经验证，方法可靠。因此，本法可作为企业内部控制舒筋活血丸质量的项目之一，也为后续制定法定标准提供了参考。

舒筋活血丸中羟基红花黄色素A的含量测定目前仍鲜见报道，本文在2010版药典红花药材含量测定项的基础上进行改进，峰型仍旧有些许拖尾，后续可针对此问题继续研究。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.23.042

B

1009-5519（2015）23-3629-03

2015-08-17）

关于论文“讨论”的基本要求

本刊编辑部

杨银凤（1989-），女，广东普宁人，在读硕士研究生，主要从事中药制剂研究与开发工作；E-mail：yangyinfeng1017@163.com。

王岩（E-mail：gdpuwy@126.com）。

现就有关论文中讨论的基本要求介绍如下：（1）讨论应围绕论文的主题及中心内容，阐明本论文研究的原理和概念；（2）分析结果中各种数据或现象的理论根据；（3）对结果的理论或实践意义进行科学评价，但应与主题和结果紧密联系；（4）客观、恰当地评价研究成果的应用价值，指出结果的可能误差；（5）指出存在的问题，提出新的研究方向或展望，给读者以启迪；（6）用语应精炼，避免对前文内容、方法与结果的过多重复；（7）应重点突出，主次分明。