抗环瓜氨酸肽抗体不同检测方法比较分析

阳海红，吕小元

（1.邵阳市中心医院，湖南422000；2.邵阳医学高等专科学校，湖南邵阳422000）

抗环瓜氨酸肽抗体不同检测方法比较分析

阳海红1，吕小元2

（1.邵阳市中心医院，湖南422000；2.邵阳医学高等专科学校，湖南邵阳422000）

目的比较分析电化学发光免疫（ECLIA）法与酶联免疫吸附（ELISA）法检测抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体的相关性，并探讨其临床诊断效率和实用性。方法选择湖南省邵阳市中心医院2013年1月至2014年12月收治的类风湿关节炎患者210例作为观察组，另选择对照组178例，其中风湿性疾病患者71例，健康者107例。采用ECLIA法和ELISA法检测研究对象血清中抗CCP抗体，观察2种方法检测抗CCP抗体的诊断灵敏度和特异度。结果ECLIA法检测抗CCP抗体的灵敏度为71.43%（150/210），特异度为98.31%（175/178）；ELISA法检测抗CCP抗体的灵敏度为69.52%（146/210），特异度为96.63%（172/178）。2种方法测定388份血清标本，阳性147例，阴性230例。二者总体符合率为97.16%（377/388），差异有统计学意义（χ2=35.538 9，P＜0.05）。结论ECLIA法检测抗CCP抗体对类风湿关节炎诊断的灵敏度、特异度与ELISA法具有较好的一致性，可在临床检验中推广应用。

电化学；免疫测定；自身抗体/诊断应用；酶联免疫吸附测定；关节炎，类风湿/诊断

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种异质性、系统性自身免疫性疾病，可呈慢性侵蚀性进展，易导致关节受损、功能障碍及残疾[1]。目前，尚缺乏诊断该病的特异性方法，漏、误诊率较高。有研究显示，抗环瓜氨酸肽（cyclic citrullinated peptide，CCP）抗体对RA的早期诊断具有重要临床意义，其已成为RA的一项具有高度特异性诊断指标[2-3]。临床检测抗CCP抗体的试剂及方法有很多种，其中酶联免疫吸附（enzyme-linked im munosorbent assay，ELISA）法具有不易实现自动化、检测复杂、检测时间长、易受人为影响等缺点。另外一种新的测定方法——电化学发光免疫（eletrochemiluminescence immunoassay，ECLIA）法具有敏感度高、测定范围宽、快速、稳定性高、准确性好等优点[4]，且采用自动化检测，已成为国外一些实验室检测抗CCP抗体的重要方法。本研究同时采用ELISA法与ECLIA法对388例血清样本进行了抗CCP抗体检测，旨在比较研究2种检测方法的相关性，并探讨其临床诊断效率和实用性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 资料

1.1.1 一般资料 选择2013年1月至2014年12月湖南省邵阳市中心医院风湿免疫科门诊和住院RA患者 210例作为观察组，其中男80例，女130例；年龄47～65岁，平均（56±13）岁，均按照1987年美国风湿病学会修订的关于RA分类标准确诊[5]。另选择对照组178例，其中风湿性疾病患者71例，健康者107例。71例风湿性疾病患者中强直性脊柱炎17例，骨关节炎13例，系统性红斑狼疮11例，干燥综合征10例，痛风10例，系统性硬化症6例，多发性肌炎或皮肌炎4例；男26例，女45例；年龄41～63岁，平均（51±15）岁；107例健康者中男47例，女60例；年龄44～65岁，平均（50±11）岁。

1.1.2 仪器与试剂 ELISA法检测采用上海KHB ST-360酶标仪，试剂盒由欧蒙医学实验诊断公司提供；ECLIA法检测采用瑞士罗氏公司的Cobas6000全自动电化学发光免疫分析仪，试剂由罗氏诊断公司提供。所有检测均严格按试剂盒说明书操作。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 用真空采血管采集所有研究对象清晨空腹静脉血4 mL，并于30 min内以3 000 r/min离心10 min分离血清，然后置入-20℃冰箱保存，1次溶解后测定。

1.2.2 结果判定 判定标准以试剂盒说明书为准，ECLIA法以CCP＞17 U/mL判定为阳性；ELISA法以CCP≥18 U/mL判定为阳性。计算2种检测方法的灵敏度、特异度。灵敏度=观察组阳性例数/总例数×100%；特异度=对照组阴性例数/总例数×100%。

1.3 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件进行数据分析，计数资料以率或构成比表示，组间比较采用χ2检验；相关分析采用Pearson相关系数法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 2种方法检测抗CCP抗体的灵敏度和特异度比较 ECLIA法检测抗CCP抗体的灵敏度为71.43%（150/210），特异度为98.31%（175/178）；ELISA法检测抗CCP抗体的灵敏度为69.52%（146/210），特异度为96.63%（172/178），见表1。

2.2 2种方法检测抗CCP抗体的一致性 388份血清标本中2种方法检测均为阳性147例，均为阴性230例。2种方法所得结果的总体符合率为97.16%（377/388），差异有统计学意义（χ2=35.538 9，P＜0.05），见表2。

表1 2种方法检测抗CCP抗体的灵敏度和特异度比较（n）

表2 2种方法检测抗CCP抗体的一致性

3 讨 论

RA是一种具有对称性、侵蚀性的多关节炎症性疾病，常可累及手足小关节，可出现关节疼痛、肿胀和功能障碍等症状，其病情往往迁延不愈，严重危害人们身体健康，其患病率在自身免疫性结缔组织病中居首位，患者如果不能及时得到诊治，可能发展为关节僵直、畸形，甚至致残，严重影响患者活动能力[6]。长期以来，在诊断RA方面以类风湿因子（rheumatoid factor，RF）作为其血清学指标，但据文献报道，在很多其他结缔组织病、某些内分泌疾病及慢性感染疾病患者中均可检测到RF，因此，其特异性较低。抗CCP抗体于2000年被首次报道，其是由RA患者滑膜产生的一种免疫球蛋白G类抗体，国内外学者对其检测方法和临床应用进行了大量研究，结果证实，抗CCP抗体对RA的早期诊断具有较高的灵敏度和特异度。

临床研究显示，应用抗CCP抗体诊断RA的灵敏度能达到50.00%～70.00%，特异度可达到88.00%～98.00%。本研究结果显示，ECLIA法检测抗CCP抗体的敏感度为71.43%，特异度为98.31%，与上述研究结果基本一致。因此，抗CCP抗体可作为诊断RA的特异性指标，尤其对RF检测结果阴性及临床症状不典型的RA患者，具有较高的诊断价值[7]。

本研究采用被广泛应用于临床检测的ELISA法欧蒙试剂盒作为参比试剂，与罗氏诊断公司提供的ECLIA法试剂进行一致性分析，2种检测方法所得结果总体符合率为97.16%，显示出ECLIA法与ELISA法具有高度一致性的临床诊断价值，与国内相关文献报道基本一致[8]。本研究采用2种检测方法检测血清样本时有11例不一致的结果，经对比临床资料分别分析该11例检测结果，ECLIA法检测结果与临床诊断相符。因此，推断ECLIA法检测抗CCP抗体与ELISA法比较，具有更高的灵敏度。为此，本研究又进一步对2种方法的灵敏度和特异度进行了对比，ECLIA法检测抗CCP抗体的灵敏度为71.43%，高于ELISA法（69.52%），ECLIA法检测抗CCP抗体的特异度为98.31%，也高于ELISA法（96.63%）。

虽然ELISA法检测抗CCP抗体技术已非常成熟，据悉在我国已有10余年的应用时间，但其缺点为手工操作步骤繁琐、耗用时间长，检测1例标本可能需2～3h。而罗氏诊断公司提供的ECLIA法自动化程度高、灵敏度高、特异度强、质量易于控制，而且该法操作简便，标本离心后即可直接进行检测，可减少人为因素的干扰，也可节约人力成本，提高工作效率，且同一批次不必每天定标，因此，结果稳定、可靠。有研究发现，检测抗CCP抗体耗时较短，检验采用ELISA法检测的同样1份标本，只需20～30 min即可得到检测结果，而且该法可随到随做，方便患者及时进行临床检测并得到结果，适应了临床检验的即时之需，为RA的早期诊断提供了良好的技术平台[9-10]。

综上所述，抗CCP抗体在RA的新诊断标准中体现出越来越重要的作用，本研究初步探讨了ECLIA法和ELISA法检测抗CCP抗体的一致性，同时发现，ECLIA法具有灵活性高、检测快速、试剂稳定、便于质量控制、操作简便等优点，为RA的早期免疫学诊断提供了有效方法，具有较高的临床应用价值，值得推广应用。

[1]康霞，李欣，杨春莉，等.ECLIA、CMIA、ELISA3种方法测定血清抗CCP抗体在RA诊断中的应用[J].重庆医学，2014，43（11）：1290-1292.

[2]陶蕾，薛建峰，翟乾勋，等.抗CCP抗体检测在诊断类风湿关节炎方面的价值分析[J].当代医药论丛，2014，12（20）：7-8.

[3]白伊娜，宋宁，李萍，等.电化学发光免疫测定与酶联免疫吸附试验检测抗环瓜氨酸多肽抗体比较[J].中华临床免疫和变态反应杂志，2012，6（4）：241-246.

[4]王艳娇，李琳芸，董莉，等.不同方法检测类风湿关节炎患者血清中抗环瓜氨酸肽IgG抗体的比较研究[J].现代检验医学杂志，2011，26（5）：84-86.

[5]阳幼荣，吴雪琼，张俊仙，等.化学发光法与酶联免疫吸附法检测血清抗结核抗体的比较研究[J].中国医药导报，2012，9（13）：88.

[6]戚润鹏，孔春玲，刘旭华.抗环瓜氨酸肽抗体在类风湿关节炎诊断中的临床应用探讨[J].中国当代医药，2014，21（34）：99-101.

[7]吴意，张艳如.抗CCP抗体和RF对类风湿性关节炎诊断价值的比较[J].中国现代医学杂志，2010，20（17）：2680-2684.

[8]徐雪亮，缪怡，张琦.电化学发光免疫测定法检测抗环瓜氨酸肽抗体的方法比较[J].诊断学理论与实践，2011，10（3）：260-262.

[9]李珍萍，郭庆昕，林宜昭.电化学发光法检测抗环瓜氨酸肽抗体的临床应用评价[J].国际检验医学杂志，2013，34（21）：2882-2883.

[10]梁鹏，张劲丰，苏荣，等.电化学发光法检测抗环瓜氨酸肽抗体的诊断效能评价[J].国际检验医学杂志，2014，35（18）：2535-2536.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.17.031

B

1009-5519（2015）17-2646-02

2015-03-31）

阳海红（1976-），男，湖南邵阳人，副主任检验师，主要从事免疫学及分子生物学检验工作；E-mail：yanghaihongsy@163.com。