褥疮冰蜜湿敷剂中单味药的抗菌实验研究

饶军英，金必成，周燕，马凯，韩志

(1.贵阳中医学院第二附属医院 骨一科，贵州 贵阳 550003；2.贵州电力医院 外科，贵州 贵阳 550002)



褥疮冰蜜湿敷剂中单味药的抗菌实验研究

饶军英1，金必成2，周燕1，马凯1，韩志1

(1.贵阳中医学院第二附属医院 骨一科，贵州 贵阳 550003；2.贵州电力医院 外科，贵州 贵阳 550002)

目的 研究褥疮冰蜜湿敷剂中冰片、蜂蜜、庆大霉素单味药间的抗菌作用。方法 用金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli ，E.coli)、铜绿假单孢杆菌(Pseudomonasaeruginosa，P.aeruginosa)分别制作三期感染褥疮动物模型，以凡士林为对照组，分为12组，即凡士林-S.aureus组，凡士林-E.coli组，凡士林-P.aeruginosa组；蜂蜜-S.aureus组，蜂蜜-E.coli组，蜂蜜-P.aeruginosa组；冰片-S.aureus组，冰片-E.coli组，冰片-P.aeruginosa组；庆大霉素-S.aureus组，庆大霉素-E.coli组，庆大霉素-P.aeruginosa组；每组6只大白兔，分别用蜂蜜、冰片、庆大霉素制作成换药纱布治疗褥疮，取治疗前后组织做菌落计数观察。结果 冰片组(F= 11.059，P<0.01)，表明冰片培养的各组计数有差别；时间×菌种 (F=11.281，P=0.009)，2组之间相互作用不明显；庆大霉素组(F= 7.99，P=0.000)，表明庆大霉素培养的各组计数有差别；时间×菌种(F=12.531，P<0.07)，表明2组之间相互作用明显。冰片对P.aeruginosa无抗菌作用，对S.aureus和E.coli有一定的抗菌作用；庆大霉素对上述3种细菌的抗菌作用良好，对P.aeruginosa的抗菌作用尤为显著。结论 湿敷剂中单味药庆大霉素的抑菌作用优于冰片，蜂蜜无抗菌作用。

褥疮冰蜜湿敷剂；三期褥疮；抗菌效果；冰片；蜂蜜；庆大霉素

“褥疮冰蜜湿敷剂”(简称“湿敷剂”)亦称冰蜜膏、冰蜜生肌膏，由冰片、蜂蜜、庆大霉素组成，有较好的去腐生肌作用，贵阳中医学院第二附属医院骨一科将其广泛应用于开放性损伤、感染的换药治疗，疗效显著；骨一科曾报道过其生肌作用[1-2]，也考察过褥疮冰蜜湿敷剂中庆大霉素的抗菌、生肌疗效[3]，但未曾对其抗菌作用做进一步的实验研究，因方中蜂蜜不耐高温，无法将制剂高温灭菌，本科在无菌条件下配置，未予高温灭菌，放置40 d仍无细菌生长[4]，临床应用中未发生一例感染加重的情况。本研究分别对冰片、蜂蜜、庆大霉素单味药冰片+蜂蜜、冰片+庆大霉素、蜂蜜+庆大霉素、冰片+蜂蜜+庆大霉素组方药对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli，E.coli)、铜绿假单孢杆菌(Pseudomonasaeruginosa，P.aeruginosa)的的抗菌效果研究，为临床应用此湿敷剂不灭菌、常温保存提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 大白兔72只，雄性，体质量2.8～3.0 kg(购自贵阳医学院试验动物中心，动物合格证号：SCXK(黔)2012-0001)。

1.2 药物 蜂蜜300 g、冰片50 g、庆大霉素40 mL(160万U)，生理盐水160 mL(用于湿润纱布，帮助冰片粘附，稀释庆大霉素)；研为细粉的冰片，凡士林纱布(本院药剂科提供)；硫酸庆大霉素注射液(购自光正制药有限公司)；“紫云英”蜂蜜(购自湖北省定州市北方科技养蜂厂)。

1.3 主要菌种S.aureus(ATCC25923)、P.aeruginosa (ATCC27853)、E.coli(ATCC25922)标准菌株(购自上海坤肯生物化工有限公司)。

1.4 仪器 Olympus BX51光学显微镜(苏州易微光学有限公司)；JB5374-19电子天平(美国双杰集团有限公司，常熟市双杰测试仪器厂)；法国梅里埃细菌鉴定仪(上海净信实业发展有限公司)。

1.5 方法

1.5.1 菌液制备：分别将S.aureus、E.coli、P.aeruginosa标准菌株加入1 mL肉汤中，混匀，接种血平板，37 ℃恒温孵育箱培养24 h，观察菌落生长情况，菌落用生理盐水调成0.5麦氏单位，配制菌液，放置4 ℃～7 ℃保温桶中2 h内接种。

1.5.2 湿敷剂纱布制备：高温将4个搪瓷容器消毒，分别装蜂蜜300 g，冰片50 g+生理盐水100 mL，庆大霉素40 mL+生理盐水60 mL；凡士林纱布(对照组)，前3组加入相同重量的消毒纱布，充分混匀，制成单味药纱布，冰片组加生理盐水为了润湿纱布，以增加冰片的粘附性，庆大霉素组加生理盐水，为了与冰片组计量相等，配制完毕置常温备用。

1.5.3 动物分组与造模：适应性饲养7 d后，随机分为12组，即凡士林-S.aureus组，凡士林-E.coli组，凡士林-P.aeruginosa组；蜂蜜-S.aureus组，蜂蜜-E.coli组，蜂蜜-P.aeruginosa组；冰片-S.aureus组，冰片-E.coli组，冰片-P.aeruginosa组；庆大霉素-S.aureus组，庆大霉素-E.coli组，庆大霉素-P.aeruginosa组；每组6只大白兔，分别用于抗菌实验。

称取2～3 g的12枚无菌棉球，分别植于6只大白兔两侧臀部皮下，3副5 mL消毒空针分别抽吸以上配制的菌液4 mL，从伤口处浸湿棉球，缝合皮肤，种植前常规脱毛，消毒，观察5～8 d，待局部红肿全层皮肤破溃，溃疡形成后取出棉球，若皮下脂肪组织外露，可见脓性分泌物，三期感染褥疮即可形成。相同方法在其余组中进行。

1.5.4 炎性标本制作：第一次标本：在三期感染褥疮生成但未治疗前的伤口内取3个标本，每个标本重精密称定1 g，隔天换药1次，用生理盐水冲洗伤口(未用消毒药水)，单层上述制备的湿敷剂纱布及6层消毒干纱布覆盖创面，换药3次后的第2天，分别为每个创面取3个1 g检测标本。

1.5.5 指标检测：

① 细菌鉴定：将所取标本1 g放入盛有5 mL生理盐水的无菌器皿中，旋涡混合器将标本和生理盐水充分混匀，取1 mL加肉汤2 mL增菌，接种血平板，37 ℃恒温孵育箱培养24 h，肉眼观察菌落形态，挑起菌落涂片，行革兰氏染色，100倍油镜下观察细菌形态，用法国梅里埃细菌鉴定仪确定是否为已种植的标准菌株，确定细菌是否种植成功；

② 菌落计数：同时取上述混匀后的含菌溶液用定量接种环取10 μL溶液接种血平板，37 ℃恒温孵育箱培养24 h后计数，读取血平板上菌落数，若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则将所取标本1 g放入盛有10 mL或15 mL生理盐水的无菌器皿中增加稀释倍数，旋涡混合器充分混匀，若连续2个稀释度的平板菌落数在30～300 CFU时，确定此2个菌落数的平均值，用公式N=∑C/(n1+0.1n2)d计算出每毫升标本的菌落总数，N：样品中菌落数 ，ΣC：平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和 ，n1：第一稀释度(低稀释倍数)平板个数 ，n2：第二稀释度(高稀释倍数)平板个数 ，d：稀释因子(第一稀释度)若细菌种植不成功，则此例标本不纳入统计。

2 结果

各组间菌落计数结果见表1，方差分析结果见表2、表3。冰片组(F=11.059，P<0.01)，表明冰片培养的各组计数有差别；时间×菌种(F=11.281，P=0.009)，2组之间交互作用不明显；庆大霉素组(F= 7.99，P=0.000)，表明庆大霉素培养的各组计数有差别；时间×菌种 (F=12.531，P<0.07)，表明2组之间交互作用明显。

表1 各组间的菌落计数(n=2)Tab.1 Colony count among the groups(n=2)

表2 各组间效果比较

Tab.2 Comparision of effect among groups

因变数:培养计数

a.R2=0.997(调整的R2=0.994)

表3 组别与个因素之间的关系Tab.3 The relationship among groups with factors

3 讨论

中药透皮给药治疗是中药传统给药方式之一，在临床上发挥着重要的作用。而透皮促进剂对于药物的透过吸收效率起着至关重要的作用。近年, 开发寻找天然成分作为透皮促进剂已成为研究热点之一[4-7]。牟家琬等[8]用冰片进行体外抗菌实验，结果表明冰片在较低浓度时有抑菌作用，在高浓度时有杀菌作用；而且与冰片的接触时间越长，抗菌效果也随之增强。本处方中冰片经皮促透作用的机制可能与其影响细胞内Ca2+浓度，改变活性表皮角质，形成细胞膜电位和膜电流性有关[9]，能使皮肤角质细胞疏松、细胞间隙增大、毛囊口孔径加宽等，有促进药物吸收的功效[10]。因蜂蜜具有吸湿性,从空气中吸取水分后向容器深部扩散，使浓度下降,易引起蜂蜜发酵。故存放时一定要将容器口盖紧, 严防水分进入，若贮存温度在10 ℃以下一般不会引起发酵, 这是因为酵田菌在这种温度下不会生长。在13 ℃～14 ℃ 时蜂蜜容易结晶[11]。庆大霉素主要用于大肠杆菌、痢疾杆菌、克雷伯肺炎杆菌、变形杆菌，铜绿杆菌等革兰阴性菌引起的系统或局部感染(对中枢感染无效)[12]。

本课题通过对湿敷剂中冰片、蜂蜜、庆大霉素单味药的抗菌实验研究证实，蜂蜜与对照组中的凡士林对本实验的3种细菌无抗菌作用，冰片对P.aeruginosa无抗菌作用，对S.aureus和E.coli有一定的抗菌作用；庆大霉素对上述3种细菌的抗菌作用良好，对P.aeruginosa的抗菌作用尤为显著。

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(编校：王冬梅)

Study on antimicrobial effects of single herbs in wet Ruchuang Bingmi hydropathic compress agent

RAO Jun-ying1, JIN Bi-cheng2, ZHOU Yan1, MA Kai1, HAN Zhi1

(1.Department of First Orthopedics, The Second Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine Guiyang, 550003, China; 2.Department of Surgery, Guizhou Dianli Hospital, Guizhou 550002, China)

ObjectiveTo study the antibacterial effect of borneol, honey, gentamicin in Ruchuang Bingmi hydropathic compress agent.MethodStaphylococcusaureus(S.aureus),Escherichiacoli(E.coli),Pseudomonasaeruginosa(P.aeruginosa) were used to produce the third phase of infection decubitus animal models,respectively.Vaseline as the control group, divided into 12 groups:Vaseline-S.aureus,Vaseline-E.coli,Vaseline-P.aeruginosa;Honey-S.aureus,Honey-E.coli,Honey-P.aeruginosa;Borneol -S.aureus;Borneol -E.coli;Borneol-P.aeruginosa;Gentamicin-S.aureus;Gentamicin-E.coli;Gentamicin-P.aeruginosa;6 rabbits in each group.Honey,borneol,gentamicin was made into a gauze in treatment for decubitus .Organizations do strain identification and colony counts was observed before and after taking the treatment.ResultsBorneol group(F= 11.059,P<0.01).,there was differences of each groups count cultured by borneol;Time×Strains(F=11.281,P=0.009),there was no significant interaction between the two groups;gentamicin(F= 7.99,P=0.000),gentamicin culture showed a difference in each group count;Time×Strains(F=12.531,P<0.07),interaction between the two groups showed significant.Borneol has no antibacterial effects onP.aeruginosa , had a certain antibacterial activityonS.aureus andEcoli;gentamicin had good antibacterial effect on the three kinds of bacteria, and againstP.aeruginosa was particularly significant.ConclusionThe antibacterial activity of gentamicin is better than single herbs borneol in Ruchuang Bingmi hydropathic compress agent, honey has no antibacterial effect.

Ruchuang Bingmi hydropathic compress agent; the third phase of infection decubitus; antimicrobial effects;borneol;honey; gentamicin

贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术科研项目(QZYY2012-19)

饶军英，女，本科，副主任医师，硕士研究生导师，研究方向：创伤骨科，E-mail:1049613459@qq.com。

R969.4

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1005-1678(2015)07-0050-03