RP-HPLC同时测定复方氯倍他索乳膏中甲硝唑、丙酸氯倍他索及酮康唑含量

贾燕花 高磊 王晓青 刘皈阳

·药物研究·

RP-HPLC同时测定复方氯倍他索乳膏中甲硝唑、丙酸氯倍他索及酮康唑含量

贾燕花 高磊 王晓青 刘皈阳

目的建立同时测定复方氯倍他索乳膏中甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索含量的反相高效液相色谱方法(RP-HPLc)。方法采用高效液相色谱法，Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇-水(20∶80)为流动相A，甲醇-乙腈(2∶1)为流动相B，采用梯度洗脱方法;检测波长为240 nm。结果甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的含量分别在641.1～2 243.8 μg/ml、323.1～1 130.9 μg/ml、16.4～57.5 μg/ml的范围内线性关系良好，平均回收率分别为98.5%、99.4%和99.2%(n=6)。结论该方法操作简便，结果可靠，可以用于同时测定复方氯倍他索乳膏中甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的含量，以控制该制剂的质量。

甲硝唑;丙酸氯倍他索;酮康唑;高效液相色谱

复方氯倍他索乳膏临床上用于各类皮炎、湿疹、手足癣、体癣、股癣等症，其主要成分为甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索。在以往的文献中，未报道同时测定复方氯倍他索乳膏中甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的高效液相色谱法［1-9］。因此，在保证测定结果的准确度和良好的检测效率的前提下，笔者通过摸索实验条件，建立了同时定量检测复方氯倍他索乳膏中甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的反相高效液相色谱法(RPHPLc)，为提供安全、有效的药品提供了依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器高效液相色谱仪(1100，Agilent)，色谱柱(C18，Kromasil)，pH值计(pHS-3E，上海雷磁)，紫外分光光度计(2102C，上海UNICO仪器有限公司)，电子天平(BT25S，赛多利斯)。

1.2 试药甲硝唑(100191-200606，中国食品药品检定研究院)，酮康唑(100294-200602，中国食品药品检定研究院)，丙酸氯倍他索(100302-201103，中国食品药品检定研究院)，复方氯倍他索乳膏(130521A，130806A，第三军医大学第三附属医院)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(20∶80)为流动相A，甲醇-乙腈(2∶1)为流动相B，流速为每分钟1 ml，照下表进行梯度洗脱;检测波长240 nm;进样量为5 μl。见表1。

表1 色谱条件

2.2 对照品溶液的配制酮康唑对照品溶液的配制:精密称取酮康唑对照品80 mg，置于50 ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为酮康唑对照品贮备溶液，精密量取5 ml置于10 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得酮康唑对照品溶液;丙酸氯倍他索对照品溶液的配制:精密称取丙酸氯倍他索对照品10 mg，置于25 ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为丙酸氯倍他索对照品贮备溶液，精密量取1 ml置于10 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得丙酸氯倍他索对照品溶液;甲硝唑对照品溶液:取甲硝唑对照品适量(约相当于甲硝唑16 mg)，精密称定，置10 ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为甲硝唑对照品溶液;混合对照品溶液配制:精密称取甲硝唑对照品适量(约相当于甲硝唑16 mg)，加5 ml酮康唑对照品贮备溶液，1 ml丙酸氯倍他索对照品贮备溶液，置于10 ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的配制取复方氯倍他索乳膏2 g，精密称定，加无水乙醇适量，置于80℃水浴中溶解，转至25 ml量瓶中，放冷至室温，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，冰浴2 h，滤过，即得。

2.4 阴性样品溶液的配制按处方比例称取混合辅料10 mg，加无水乙醇适量，置于80℃水浴中溶解，转移至50 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液0.25 ml置10 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为阴性样品溶液。

2.5 系统适用性实验按“2.1”项下的色谱条件，取甲硝唑对照品溶液、酮康唑对照品溶液、丙酸氯倍他索溶液、混合对照品溶液、阴性样品溶液各5 μl进样。主成分甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的色谱峰分离度良好。见图1。

图1 辅料(A)、丙酸氯倍他索(B)、甲硝唑(C)、酮康唑(D)、样品(E)色谱图

2.6 线性关系考察精密称取10 mg丙酸氯倍他索对照品，置于10 ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为丙酸氯倍他索对照品线性贮备溶液;精密称取甲硝唑对照品160 mg、酮康唑对照品80 mg置于同一50 ml容量瓶中，加丙酸氯倍他索对照品线性贮备溶液4ml，用无水乙醇溶液并稀释至刻度，摇匀，即得线性贮备溶液;分别精密量取线性贮备溶液2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml、7 ml置10 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为线性供试液。按照“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图，以峰面积的积分值为纵坐标(Y)，分别以甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的浓度(μg/ml)为横坐标(X)作标准曲线，计算其回归方程。甲硝唑:Y=0.207X-0.405，r= 0.9995;酮康唑:Y=0.136X+10.71，r=0.9995;丙酸氯倍他索:Y=0.112X+0.088，r=0.9995。结果表明，甲硝唑、酮康唑、丙酸氯倍他索分别在641.1～2 243.8 μg/ml、323.1～1 130.9 μg/ml、16.4～57.5 μg/ml的范围内线性关系良好，符合规定。

2.7 精密度实验精密量取混合对照品溶液5 μl，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，计算甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的吸收峰面积RSD值，分别为0.19%、0.19%和0.23%，表明仪器精密度良好。

2.8 稳定性实验精密量取供试品溶液，在相同色谱条件下分别于0 h、12 h、24 h、48 h精密量取5 μl，记录峰面积，计算甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的吸收峰面积RSD值，分别为0.51%、0.42%和0.28%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.9 重复性实验取批号为130521A的复方氯倍他索乳膏，按照“2.3”项下的方法制备6份供试品溶液，并按照“2.1”项下的色谱方法平行测定，甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索含量的RSD值分别为0.58%、0.99%和0.63%(n=6)，结果表明该方法重复性良好。

2.10 准确度实验分别精密称取甲硝唑对照品适量(相当于甲硝唑13 mg、16 mg、19 mg)、精密量取酮康唑对照品贮备溶液(4 ml、5 ml、6 ml)、以及精密量取丙酸氯倍他索对照品贮备溶液(0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml)，置10 ml容量瓶中，按照处方比例加入辅料，用无水甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为80%、100%、120%的供试品溶液，每种浓度制备3份，按“2.1”项下的色谱条件进样，测定峰面积，按照外标法计算各水平的回收率。甲硝唑的平均回收率为98.5%，RSD值为0.84%;酮康唑的平均回收率为99.4%，RSD值为1.53%;丙酸氯倍他索的平均回收率为99.2%，RSD值为1.03%。

2.11 样品测定按照上述色谱条件，分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各5 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按照外标法以峰面积计算样品的含量。见表2。

表2 样品含量测定结果%

3 讨论

甲硝唑在311 nm处有较强吸收;酮康唑在220 nm处有较强吸收;丙酸氯倍他索在238 nm处有最大吸收;空白辅料在211 nm处有最大吸收，在274 nm处吸收较弱。根据复方氯倍他索乳膏处方，丙酸氯倍他索含量相对较少，为提高丙酸氯倍他索响应值，故选择274 nm作为本品的检测波长。

乳膏基质可污染色谱仪，造成柱压升高，色谱柱寿命缩短，因此采用冰浴冷却2 h后迅速滤过的方法以尽可能的出去基质，减少乳膏基质对色谱系统的影响。

《中华人民共和国药典》2010年版二部中的丙酸氯倍他索原料药采用HPLC方法进行含量测定［10］，甲硝唑原料药［10］和酮康唑原料药［10］采用容量分析方法，笔者尝试建立了同时测定甲硝唑、酮康唑、丙酸氯倍他索的高效液相色谱方法，该方法具有良好的专属性、精密性和准确性，以及良好的分离效能，为复方氯倍他索乳膏的质量控制提供了可靠的依据。

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R 917.4

A

1002-7386(2015)02-0285-03

2014-08-21)

10．3969/j．issn．1002－7386．2015．02．049

100048北京市，中国人民解放军总医院第一附属医院药剂药理科

刘皈阳，100048中国人民解放军总医院第一附属医院药剂药理科; E-mail:liuguiy@live.cn