人与家畜戊型肝炎病毒感染的流行病学关联性调查

张 军，肖越胜，范前东，王月萍，董玉颖，徐 勤＊

（1.扬州市疾病预防控制中心，江苏扬州 225001；2.邗江区疾病预防控制中心，江苏邗江 225100；3.江都区疾病预防控制中心，江苏江都 225200）

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）感染引发的一种急性病毒性肝炎，主要通过消化道传播。近年来，戊型肝炎发病呈明显上升趋势，扬州市2004年-2012年疫情资料统计显示，全市累计报告报告戊型肝炎2 580例，年均发病率6.23／10万。年均增长速度达24.22%；2012年戊型肝炎占肝炎发病人数的30%。越来越多的证据表明，自然界中戊型肝炎病毒在多种动物中广泛分布与传播，但目前仍缺乏动物HEV与人群HEV感染之间有关联的有说服力的流行病学证据。本研究旨在通过对近年来扬州市戊型肝炎病例调查及家畜感染状况、家畜排泄物、环境病毒污染状况调查，探讨动物戊型肝炎在人感染HEV中的流行病学地位和在进化上的相关性，完善对该病传播过程的认识，为戊型肝炎的防控工作提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验品来源 统计分析来源于扬州市地区邗江、江都两地2012年6月1日～2013年5月31日首次报告的全部戊型肝炎患者，合计134名病例；血清样品来源于当地6例住院病例，动物和环境标本来源于同期研究现场。

1.1.2 主要试剂和仪器 病毒采样管为友康基业生物科技（北京）有限公司产品；戊型肝炎病毒RNA检测试剂盒（FQ-PCR法）为北京金豪制药股份有限公司产品；High Pure Viral RNA Kit为Roche公司产品；QIAGEN One Step RT-PCR Kit为QIAGEN公司产品；TaKaRa ExTaq（Hot Start Version）为宝生物工程（大连）有限公司产品；LightCycler 2.0荧光定量PCR仪为Roche公司产品；普通PCR仪和电泳仪为美国BIO-RAD公司产品；GelDoc-It Imaging System为UVP公司产品。

1.2 方法

1.2.1 病例对照研究 病例为扬州市地区邗江、江都两地2012年6月1日～2013年5月31日医疗机构报告的全部戊型肝炎患者，对照选择原则为性别相同、年龄相近、职业、文化、经济、居住条件相似的健康人，按1∶2配对，调查表采用自制《戊型肝炎人群相关行为调查表》。调查内容包括个人卫生行为、饮食习惯、动物饲养情况等。

1.2.2 动物感染情况调查 采集研究现场的家养猪、鸡粪便进行HEV感染状况调查，采集当地屠宰场养殖的猪、鸡等肝脏、胆囊进行HEV感染阳性率的调查；采用有SFDA批准文号的戊型肝炎实时荧光PCR检测试剂盒，对上述采集标本进行核酸检测。

1.2.3 环境污染状况检测 采集病例居住地附近、动物屠宰场及养殖户周边的水源开展HEV污染状况调查，采用实时荧光PCR法进行核酸检测。

1.2.4 基因特征分析 采用Real-time法筛选人抗HEV抗体IgM阳性血清和猪肝组织样品，套式PCR扩增HEV RNA ORF2片段基因并测序。

1.2.5 统计分析 流行病学调查资料使用Epidata 3.1录入戊型肝炎病例问卷调查表和健康人群问卷调查表建立数据库。采用SPSS 13.0进行统计分析。根据数据的性质进行统计分析，对于配对变量，计量资料采用t检验进行分析，计数资料采用卡方检验进行分析；感染的影响因素分析采用多因素COX回归进行分析，计算P值、OR值及其95%可信区间，检验水准α＝0.05。

2 结果

2.1 危险因素分析

2.1.1 病例组与对照组基本情况 病例组134人，对照组268人。病例和对照组在年龄、性别、职业、文化程度、婚姻状况及生活卫生状况差异均无统计学意义。

2.1.2 多因素COX回归分析 采用多因素COX回归分析，既往肝炎史、生猪接触史、生食瓜果蔬菜史、医疗史可能是戊型肝炎的危险因素，详见表1。肝炎病人接触史、家禽接触史、猪肉食用史、食用凉拌菜史及外出旅游就餐史无统计学意义。

表1 戊型肝炎危险因素COX回归多因素分析结果Table 1 The result of multivariate analysis for risk factors of hepatitis E

2.2 样本HEV核酸检测结果

猪粪49份，HEV核酸检测阳性5份，阳性率10.2%；猪肝26份，阳性8份，阳性率30.8%；猪胆囊51份，阳性12份，阳性率23.5%；鸡粪11份，环境水样55份，均为阴性。

2.3 基因特征分析结果

采用戊型肝炎病毒RNA检测试剂盒对采集的样品进行筛选，得到3份猪肝和3份人血清HEV RNA阳性样本，筛查6株均为基因4型HEV，核苷酸同源性为89.9%～99.3%，与基因4型参考株的同源性为85.8%～94.6%，与其他基因型的同源性为79.1%～89.2%，3株人源和猪源的同源性分别为94.6%～99.3%、95.3%～98.0%，人源与猪源的同源性为89.9%～98.6%。

3 讨论

扬州市的戊型肝炎发病率逐年上升，这与国内诸多地区的报道基本一致［1］。分析原因：①戊型肝炎疫苗尚未得以很好的推广，人群缺乏免疫力；②HEV感染在国内外的猪、鸡等群中普遍存在，猪、鸡等感染病毒后一般不表现临床症状，常易被忽视，但猪、鸡等又是与人生活接触较密切动物；③群众对戊型肝炎的防控知识和意识缺乏。

多因素分析证实既往肝炎史、生猪接触史、生食瓜果蔬菜史、医疗史可能是戊型肝炎的危险因素；病例有既往肝炎史可能是肝炎史对肝脏造成器质性损伤，造成HEV更易侵袭，与何义林等研究结果相同［2］，汪向红等［3］对南京市239例戊型肝炎病例分析后发现，戊型肝炎重叠乙肝感染占17.2%。生猪接触史是人群戊型肝炎致病因素，这在不少研究中都有证实，国内外都有报道，猪HEV可能是当地戊型肝炎患者感染的主要来源［4-5］，与猪相关的职业人群是戊型肝炎发病的高危人群。人类可能在饲养、加工、屠宰过程中被感染［6］。病例发病前有多次医疗史是戊型肝炎发病的危险因素，如果排除医疗过程中感染HEV的可能性，多次医疗史可能表明病例身体抵抗力差而更易感染HEV。生食瓜果蔬菜史在不少研究中有证实是HEV感染的危险因素。家禽接触史、肝炎病人接触史、猪肉食用史、食用凉拌菜史及外出旅游就餐史在分析中无统计学意义。

我国的猪戊型肝炎流行普遍，国内外文献报道有关猪等动物戊型肝炎感染状况多是通过戊型肝炎抗体检测结果表明来论述，证明猪戊型肝炎抗体检测阳性率普遍在80%左右，我市是通过核酸检测方法来进一步探讨，结果证实我市病例所在地猪肝、胆囊HEV核酸阳性检出率在20%以上，这与国内有研究结果的核酸阳性检出率相符。猪戊型肝炎在世界各地猪群中均有发现，而我国的猪HEV感染率较高，人可以通过直接食入被HEV污染的食物而感染，国内许多学者从血清学等方面对不同地区的猪HEV感染情况进行了调查［7-10］与猪密切接触的人群明显比其他对照人群HEV抗体阳性率更高，猪传播的戊型肝炎已成为一个重要的公共卫生问题。Mizuo H等［11］报道日本一些地区吃生猪肉与内脏的人戊型肝炎发病率高于其他地方。因而加强对猪HEV的关注是十分必要的。本次检测中猪粪阳性率达10.2%，这是非常值得视的问题，说明猪不但通过食用、宰杀过程感染人群，完全可通过排粪便后污染瓜果菜类甚至水源，造成HEV在环境和猪中反复循环，循环过程中感染人类，这也证实了生猪接触史、生食瓜果蔬菜史有流行病学意义的调查结果。鸡中未检出阳性有待进一步研究。污染的水源中无阳性检出可能与水中病毒含量低有关。

本研究表明，扬州市猪HEV与人HEV同源性很高。赵晨燕等［12］对我国的猪与人的同源HEV研究发现，我国猪与人的同源性在89%～100%，且均为基因4型。有试验表明，将人类HEV株与猪HEV株混合后通过试验可以分别移植给猪与非人类的灵长类动物，说明这种毒株可以跨越物种传播。越来越多的证据表明戊型肝炎是一种人兽共患病，猪是人群戊型肝炎感染的宿主动物［13-14］。

戊型肝炎发病数逐年增加，且由于流行广泛、发病症状较重和死亡率高，已凸现为一个重要的公共卫生问题，这在中国及发展中国家是一个普遍存在的现象。对于我国戊型肝炎疫苗尚未大面积推广的情况下，只能采取综合防控措施进行控制，现阶段应采取控制传染源、切断传播途径为主的措施加强戊型肝炎防控，加强人群和猪的HEV监测，努力控制戊型肝炎病例的发生。针对猪是宿主动物，应推广猪戊型肝炎疫苗的研究［15］，加强接触猪的人群的防护意识，加强环境卫生和整治工作。同时应对戊型肝炎传播方式、防控措施进一步研究并广泛开展宣传。

［1］麦 浩.桂林市2003年-2011年网络直报甲、戊型病毒型肝炎的流行特征分析［J］.现代预防医学，2013，40（9）：1619-1621.

［2］何义林，张 翔，钱移华，等.戊型病毒性肝炎危险因素病例对照研究［J］.中国公共卫生，2009，25（12）：1449-1451.

［3］汪向红，詹镕娥.南京市239例戊型病毒性肝炎病例分析［J］.江苏预防医学，2006，17（1）：25.

［4］蔡衍珊，刘建华东，伍业健，等.广州市家畜从业人员戊型肝炎病毒感染状况调查［J］.医学动物防制，2013，29（5）：536-537.

［5］Poron J M，Mansuy J M，Poirson H，et al.Hepatitis E is an autochtho to nous disease in industrialized countries.Analysis of 23patients in South to West France over a 132month period and comparison with hepatitisA［J］.Hastroenterol Clin Biol，2006，30（5）：757-762.

［6］周锦萍，孙泉云，刘佩红，等.上海地区多种动物戊型肝炎血清学调查［J］.动物医学进展，2006，27（12）：85-88.

［7］严玉霖，高 洪，李文贵，等.昆明地区猪戊型肝炎病毒感染的血清学调查［J］.动物医学进展，2010，31（6）：89-91.

［8］张亮权.梁焕斌，王 衡，等.猪戊型肝炎病毒的流行病学调查［J］.中国畜牧兽医，2012（8）：215-219.

［9］Li W，Shu X，Pu Y，et al.Seroprevalence and molecular detection of hepatitis E virus in Yunnan Province，China［J］.Arch Virol，2011，156：1989-1995.

［10］时新春，张晓轩，丛 伟，等.西藏藏猪戊型肝炎病毒的血清流行病学调查［J］.动物医学进展，2013，34（6）：85-88.

［11］Mizuo H，Yazaki Y，Sugawara K，et al.Possible risk factors for the transmission of hepatitis E virus and for the severe form of hepatitis E acquired locally in Hokkaido，Japan［J］.J Med Virol，2005，76（3）：341-349.

［12］赵晨燕，刘小桂，樊金萍，等.湖北地区人源与猪源戊型肝炎病毒部分基因序列的分析［J］.中国病毒病杂志，2013（1）：27-31.

［13］陈丽萍，邓大旺，张亮权，等.人兽共患病-戊型肝炎［J］.中国畜牧兽医文摘，2012，28（5）：84-85.

［14］刘艳玲，赖莉敏，廖 凤，等.广西猪牛羊鸡戊型肝炎血清流行病学调查分析［J］.南方农业学报，2012，43（1）：103-106.

［15］李 斌，苏乾莲，赵 武，等.戊型肝炎疫苗研究进展［J］.动物医学进展，2013，34（6）：154-159.