参麦与黄芪注射液联用治疗卡氏肺孢子虫肺炎

董文杰，于 竟，苗承澍，尹 涵，莎日娜

（包头医学院病原生物学教研室，内蒙古包头 014060）

卡氏肺孢子虫（Pneumocystiscarinii，Pc）是一种常见的机会致病性寄生虫，它引起的卡氏肺孢子虫肺炎（Pneumocystiscariniipneumonia，PCP）好发于免疫功能低下或缺陷人群［1］，其病理损害主要表现为肺组织间质性病变［2］。国内外防治PCP的主要药物为戊烷脒和复方磺胺甲基异恶唑等［3］，但毒副作用明显，耐药性的发生率也明显增加［4］。因此，寻找新的高效低毒药物很有必要。

黄芪具有明显的抗缺氧、抗炎、镇痛和调节免疫的功能［5］，参麦注射液主要具有增强心血管系统功能、抗氧化、抗衰老、增强免疫力等功能［6］。两药联用具有协同作用，显示其益气扶正功能，对人体各脏器、系统具有良好的保护作用，并可提高疗效［7］。本研究通过动物试验，观察参麦与黄芪注射液联用治疗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的疗效，为临床治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 纯系Wistar大鼠45只，健康雌性，体重170g～210g，由包头医学院实验动物中心提供。

1.1.2 药品及试剂 地塞米松磷酸钠注射液为郑州卓峰制药有限公司产品（批号：14022838）；盐酸多西环素片为江苏联欢药业股份有限公司产品（批号：20130701）；复方磺胺甲恶唑（TMP-SMZ）为山西同达药业有限公司产品（批号：H14022839）；黄芪注射液为神威药业有限公司产品（批号：130907）；参麦注射液为吉林省集安益盛股份有限公司产品（批号：131100404）。

1.1.3 卡氏肺孢子虫的来源 利用糖皮质激素（地塞米松磷酸钠注射液）抑制大鼠免疫系统诱发PCP模型，取肺组织染色油镜观察见卡氏肺孢子虫包囊及滋养体。

1.2 方法

1.2.1 PCP大鼠模型的建立 大鼠置敞式鼠笼中用普通颗粒饲料喂养，观察1周后，健康动物列入试验，45只大鼠随机选取5只作为健康组（A组）、其余均为试验组。试验组大鼠无菌状态下大鼠腹股沟皮下注射地塞米松磷酸钠2mL／只，2次／周，并在饮水中加1g／L盐酸多西环素预防继发性细菌感染。定期更换垫料及消毒，连续注射地塞米松磷酸钠6周后，随机选取2只大鼠处死，取肺组织制作印片，采用姬姆萨染色［8］，油镜观察见卡氏肺孢子虫包囊及滋养体，作为证实PCP大鼠模型建立。健康组不给药，自由饮食饮水。

1.2.2 试验组分组与治疗 40只试验组大鼠随机均分为4组，分别为阳性对照组10只（B组）、SMZTMP治疗组10只（C组）、参麦与黄芪高剂量治疗组10只（D组）、参麦与黄芪低剂量治疗组10只（E组）。在注射地塞米松磷酸钠6周后，其中C组灌胃SMZ 250mg／（kg·d）和 TMP 50mg／（kg·d），连续2周；D、E组腹股沟皮下注射黄芪注射液与参麦注射液，剂量分别为 1mL／（kg· d）、2mL／（kg·d），连续2组，B组不给药。

1.2.3 观察指标及方法

1.2.3.1 基本情况观察 观察各组大鼠的毛色、摄食、呼吸、活动、存活数等情况。详细记录大鼠治疗前后的体重变化，包括试验开始、造模结束、治疗结束时体重，并计算各组大鼠的体重回升率。体重回升率计算公式：（治疗结束时体重-造模结束时体重）／造模结束时体重×100%。

1.2.3.2 肺脏病原学观察 治疗前随机选取PCP大鼠2只处理，取肺组织，切开肺叶，制作直径1cm的印片，采用Giemsa染色，油镜下查找Pc包囊。治疗组停药1周后，各组大鼠全部杀后，油镜下记录Pc包囊数，Pc包囊记数方法［9］：每鼠肺印片计数100个油镜视野Pc包囊总数，最后计算出每组鼠肺印片中Pc包囊的平均数。

1.2.3.3 肺脏病理学观察 取各组大鼠相同部位的肺脏，40mL／L甲醛固定，酒精逆行梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋后行连续切片（切片厚度6μm），制成病理切片苏木素-伊红（HE）染色后，光镜观察肺组织病理学变化［10］。

1.2.4 统计学分析 使用SPSS13.0软件处理，采用方差分析方法进行统计学比较。

2 结果

2.1 基本情况观察

观察期间健康组大鼠饮食进水如常，体重略有增加，体重回升率为4.40%。试验组大鼠于第3周开始，活动能力减弱，毛色变暗，饮水和进食量开始减少；第6周，体毛直立缺少光泽，有少量脱毛，呼吸急促，精神萎靡，平均体重明显降低，造模结束时各组体重与健康组比较均差异显著（P＜0.05）。停用地塞米松磷酸钠注射并进行治疗后，治疗组大鼠毛色逐渐恢复光泽、食欲增加、活跃程度恢复。治疗结束时，药物治疗各组大鼠有不同程度的体重增加，与阳性对照组比较均差异显著（P＜0.05）。大鼠治疗前后的体重变化见表1，各组大鼠均没有死亡。

2.2 肺组织印片检查

治疗前随机处死PCP大鼠肺组织印片上可见Pc包囊，包囊呈圆形或椭圆形，大小略小于红细胞，Giemsa染色囊壁不着色，内含圆形或新月形的囊内小体，多数为8个，散在一圈排列或成团排列。滋养体形态多变，大小不一，虫体数量较多常成簇分布（图1F），大鼠感染严重。各组大鼠全部处死后，肺印片Pc包囊记数统计（表2）。经统计学处理，与阳性对照组比较，治疗组C组、D组、E组Pc包囊数均明显减少，差异有显著性（P＜0.05）；与SMZ-TMP治疗组（C组）比较，D组无统计学意义（P＞0.05），E组差异显著（P＜0.05）；参麦与黄芪治疗后D组与E组之间比较，差异显著（P＜0.05）。说明参麦与黄芪高剂量治疗和SMZ-TMP治疗相近；参麦与黄芪低剂量治疗效果虽然不如SMZ-TMP组，但是与对照组比较有统计学意义，说明参麦与黄芪注射液对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎有治疗作用。

表1 大鼠治疗前后的体重变化Table 1 Rat weight changes before and after treatment

表2 药物对大鼠肺组织印片Pc包囊数量的影响Table 2 Effects of drugs on rat lung tissue printing Pc cyst number

2.3 肺组织病理学检查

阳性对照组（B组）：中—重度间质性肺炎，肺泡间隔变宽，肺泡腔变小，间质内有以淋巴细胞、单核细胞为主的细胞浸润，部分肺泡腔内充满淡红色泡沫样渗出物（图1B）。参麦与黄芪高剂量组 （D组）：肺间质组织形态及结构开始回复，炎症反应明显减轻，肺泡中浆液性渗出物显著减少 （图1D）；SMZTMP治疗组炎症反应明显减轻，大多数肺泡及其间质修复完整（图1C）。参麦与黄芪低剂量治疗（E组）：中度间质性肺炎，肺间质充血及水肿，肺泡内可见嗜酸性物及泡沫细胞 （图1E）。健康组（A组）：肺组织无炎症，未见异常（图1A）。

图1 肺组织病理学观察及PCP大鼠肺印片Pc包囊Fig.1 Histopathological lesions and lung imprint Pc cyst in PCP rat

3 讨论

目前，国内外建立PCP动物模型方法最常用的是利用糖皮质激素抑制大鼠免疫系统诱发PCP模型［8］。本试验采用此方法造模成功，在肺组织印片中发现形态较好的Pc包囊，并且发现大量的滋养体。进一步证明此法的可行性。

黄芪注射液、参麦注射液对特异性免疫、体液免疫、细胞免疫均有明显增强作用，可明显提高T细胞增殖能力，促使巨噬细胞活化［6-11］。参麦注射液主要含有人参皂苷、人参多糖、甾苷、有机酸等成分，这些有效成分能加强机体器官抗应激能力，调节和促进机体免疫功能［7］。本试验将参麦与黄芪注射液联用治疗卡氏肺孢子虫肺炎，应用参麦与黄芪注射治疗后，PCP大鼠毛色逐渐恢复光泽、食欲增加、活跃程度恢复，体重明显增加；与阳性对照组比较，肺组织印片中Pc包囊的数量明显减少，低、高剂量组均差异显著，肺组织病理检查炎症轻于阳性对照组；和已经明确具有治疗作用的复方磺胺甲恶唑治疗组比较，经检验高剂量组大鼠肺印片中Pc包囊数无明显差异。

试验结果表明，黄芪和参麦可以减轻PCP大鼠的肺部炎症反应，并可以减少肺组织内包囊的数量，高剂量组接近复方磺胺甲恶唑治疗效果，参麦与黄芪注射液联用有望用于临床肺孢子虫肺炎的治疗，然而其作用机制，还需要进一步深入研究。

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