育阴软肝中药对实验性肝损伤的保护作用*

王志旺， 刘雪枫， 妥海燕， 程小丽， 郭 玫

(甘肃中医学院， 兰州 730000)



育阴软肝中药对实验性肝损伤的保护作用*

王志旺△， 刘雪枫， 妥海燕， 程小丽， 郭 玫

(甘肃中医学院， 兰州 730000)

目的：研究育阴软肝方对小鼠化学性急性肝损伤的保护作用。方法：将55只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、育阴软肝方低、中、高剂量组(n=11)，连续给药7 d后，采用腹腔分别注射D-半乳糖胺(D-GalN)、四氯化碳(CCl4)或硫代乙酰胺(TAA)复制三种肝损伤模型，通过测定血液生化指标、肝组织抗氧化酶及氧化产物的水平，研究育阴软肝方对实验性肝损伤的保护作用。结果：育阴软肝方能降低D-GalN、CCl4或TAA诱发急性肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平，提高急性肝损伤小鼠肝组织超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性，降低丙二醛(MDA)的含量。其降酶保肝、抗氧化作用显示出一定的量效关系。结论：育阴软肝方对实验性急性肝损伤具有一定的保护作用。

育阴软肝方；肝损伤；抗氧化系统；小鼠

在养阴派朱丹溪“阳常有余，阴常不足”理论[1]的指导下，拟定的育阴软肝方由山茱萸、黄芩、柴胡、丹参、黄芪、醋鳖甲等中药组成，具有育阴养肝、活血化瘀、理气疏肝、补益气血的功效，临床上对肝病、特别是肝病过程中的肝纤维化有明显的疗效。为了进一步探讨育阴软肝方的药理作用，本次研究复制了急性化学性肝损伤模型，并从降酶保肝、抗氧化方向探讨育阴软肝方治疗肝病及肝纤维化的药理作用及作用机制，为临床通过育阴软肝治法来治疗肝纤维化提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

育阴软肝方由山茱萸、黄芩、柴胡、丹参、黄芪、醋鳖甲等药物组成，中药购自甘肃至仁同济大药房，加水浸泡30 min后，煎煮2次，用水量分别为药物的10与8倍，每次煎煮1 h，混合2次煎液，浓缩至所需浓度，冷藏备用。D-半乳糖胺(D-GalN)，CAS：157297-00-6，Sigma试剂公司；四氯化碳(CCl4)，批号：20100912，广东汕头市西陇化工厂生产；硫代乙酰胺(thioacetamide, TAA)，批号：20090415，天津市大茂化学试剂厂生产；天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)与丙二醛(malonaldehyde, MDA)试剂盒，为南京建成生物工程研究所产品；其余试剂为分析纯。

1.2 动物

SPF级KM小鼠，体重(20±2)g，雌雄兼用，由甘肃中医学院动物实验中心提供，实验动物质量合格证号SCXK(甘)2011-0001。实验室为SPF级，许可证号为SCXK(甘)2011-0001。

1.3 仪器

HH-S型恒温水浴锅(金坛市正基仪器有限公司)，722型分光光度计(上海第三分析仪器厂产品)，TGL-16G高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)，BS1103型Sartorius电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)。

1.4 对D-GalN引起的小鼠急性肝损伤的影响

取合格KM小鼠55只，按性别、体重分层随机分为5组(n=11)：即正常对照组、模型对照组、育阴软肝方高、中、低剂量组(36 g/kg、18 g/kg、9 g/kg)。各组按上述剂量灌胃给药，正常对照组和模型对照组蒸馏水灌胃20 ml/kg，每天1次，连续7 d。末次给药1 h后，育阴软肝方高、中、低剂量组与模型对照组按0.6 g/kg腹腔注射D-GalN[2，3]，正常对照组腹腔注射生理盐水10 ml/kg。小鼠禁食12 h、禁食禁水6 h后，眼眶采血，分取血清测定AST与ALT；断颈椎处死小鼠，于肝脏固定位置取肝组织适量，制成10%肝匀浆，离心，取上清液按试剂盒说明书测定肝组织SOD的活性及MDA的含量。

1.5 对CCl4引起的小鼠急性肝损伤的影响

取合格KM小鼠55只，依1.4项下所述方法分组、给药。末次给药1 h后，育阴软肝方高、中、低剂量组与模型对照组按15 mg/kg腹腔注射0.15%的CCl4花生油溶液[4-6]，正常对照组腹腔注射花生油10 ml/kg。小鼠禁食12 h、禁食禁水6 h后，眼眶采血，取血清测定ALT与AST；脱颈椎处死小鼠，打开腹腔，在相同位置取肝组织适量，制成10%匀浆，离心，取上清液按试剂盒说明书测定肝组织MDA的含量与GSH-Px的活性。

1.6 对TAA引起的小鼠急性肝损伤的影响

取合格KM小鼠55只，按1.4项下所述方法分组与给药。末次给药1 h后，育阴软肝方高、中、低剂量组与模型对照组按0.5 g/kg腹腔注射5%的TAA[7]，正常对照组腹腔注射蒸馏水10 ml/kg。小鼠禁食12 h、禁食禁水6 h后，眼眶采血，测定血清ALT，AST的活性；脱颈椎处死小鼠，在相同位置取肝组织制成10%匀浆液，离心，取上清液测定肝组织MDA的含量。

1.7 统计分析

2 结果

2.1 育阴软肝方对D-GalN引起的小鼠急性肝损伤的影响

与正常对照组比较，模型对照组小鼠血清ALT与AST以及肝组织MDA的含量显著升高，肝组织SOD的活性显著降低(P<0.01，表1)，表明D-GalN致小鼠急性肝损伤模型复制成功。与模型对照组比较，育阴软肝方对上述各项指标有不同程度的改善作用，即育阴软肝方可降低ALT、AST水平及肝组织MDA的含量，提高肝组织SOD的活性；同时，9～36 g/kg的育阴软肝方抗肝损伤作用显示出一定的量效关系(P<0.05,P<0.01，表1)。

Tab. 1 Effect of YRD on hepatic injury in mice induced by D-GalN (±s, n=11)

YRD: Yuyin Ruangan Decoction; ALT: Alanine aminotransferase; AST: Aspartate aminotransferase; SOD: Superoxide dismutase; MDA: Malondialdehyde

**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05,△△P<0.01vslow dose of YRD

2.2 育阴软肝方对CCl4引起的小鼠急性肝损伤的影响

小鼠腹腔注射CCl412 h后，血清ALT与AST显著升高，肝组织GSH-Px明显降低，而MDA显著升高，与正常对照组比较有统计学意义(P<0.01)。经9～36 g/kg育阴软肝方防治后，上述变化得到明显改善，与模型对照组比较有统计学意义；与育阴软肝低剂量组比较，育阴软肝高剂量组对上述指标的改善作用更加明显，显示出一定的量效关系(P<0.05,P<0.01，表2)。

2.3 育阴软肝方对TAA引起的小鼠急性肝损伤的影响

腹腔注射TAA后，小鼠血清ALT与AST、肝组织MDA的含量显著升高，与模型对照组比较有统计学意义(P<0.01)。经育阴软肝方干预后，血清ALT、AST、肝组织MDA的含量明显下降，与模型对照组比较有统计学意义(P<0.01)；与育阴软肝方低剂量组比较，育阴软肝方高剂量组的作用有统计学意义(P<0.01，表3)，显示出一定的量效关系。

Tab. 2 Effect of YRD on hepatic injury in mice induced by CCl4(±s, n=11)

YRD: Yuyin Ruangan Decoction; ALT: Alanine aminotransferase; AST: Aspartate aminotransferase; GSH-Px: Glutathione peroxidase; MDA: Malondialdehyde

**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05,△△P<0.01vslow dose of YRD

Tab. 3 Effect of YRD on hepatic injury in mice induced by TAA(±s, n=11)

YRD: Yuyin Ruangan Decoction; ALT: Alanine aminotransferase; AST: Aspartate aminotransferase; MDA: Malondialdehyde; TAA: Thioacetamide

**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vsmodel group;△△P<0.01vslow dose of YRD

3 讨论

朱丹溪谓“人之一身，阴不足而阳有余”，“阴不足”主要指阴精难成易亏，而“阳有余”主要是指肝肾相火容易妄动。阴精的难于生长、相火的易于妄动，震亨认为是人一生中容易患病的关键因素之一。而要想保持阴精的充沛，首先就要尽量避免相火妄动；在生活中使相火不致妄动的方法是暂远“温柔、声音、颜色、馨香”诸物欲，尤其是“节饮食、戒色欲”。而在现代社会中，随着体力劳动的锐减、脑力劳动的剧增、互联网的普及、娱乐活动的充斥，满口嚼香、满目露色已成常态，相火亦有不妄动之理，故“阴常不足”在现代社会中更具有普遍意义。“肝肾之阴，悉具相火”，而“相火妄动，煎熬真阴，阴虚则病”，即相火为肝肾二脏专司，相火妄动，易致肝肾阴虚，故补益肝肾之阴是治疗肝肾之病的基础。在多种肝病及其发病过程中出现的肝纤维化，肝阴虚是疾病的基本证型，气滞血瘀是引起临床症状的主要原因，而脾虚湿阻是肝郁气滞的继发证候。因此，阴虚血瘀是肝病及肝纤维化的基本证型，而育阴化瘀法是治疗肝病的基本治则。在育阴化瘀法的指导下形成的育阴软肝方由山茱萸、黄芩、柴胡、丹参、黄芪、醋鳖甲等中药组成，具有育阴养肝、活血化瘀、理气疏肝、补益气血之功，临床上对多种肝病、特别是肝纤维化及早期肝硬化有明显的疗效。

由于肝脏是机体进行物质代谢的重要基地，进入机体的物质、特别是对机体有一定毒性的物质必须经过肝脏代谢，降低毒性后才能从肾脏排出。在肝脏代谢、解毒的过程中，肝组织常常被有毒物质所破坏，引起炎症、纤维组织增生。近年来的研究表明，肝脏纤维组织增生、甚至轻度肝硬化可以逆转[8]，这为炎症引起的肝脏纤维化治疗带来了希望。本次实验采用化学法复制肝损伤模型，即利用D-GalN、CCl4或TAA等化学物质的肝组织损伤作用来复制小鼠急性肝损伤模型。D-GalN可损害肝脏细胞的细胞器，引起肝细胞代谢紊乱，同时D-GalN进入体内还可产生自由基，启动脂质过氧化反应，加重肝细胞及线粒体的损伤；CCl4及其活化自由基·CCl3可与蛋白质与脂质结合，引起细胞膜结构的破坏而导致肝组织损伤；TAA代谢生成的亲电子活性物质可干扰RNA的转录，影响蛋白质的合成及酶的活性[9]。实验结果显示，育阴软肝方对不同化学性急性肝损伤动物模型均能降低血清ALT、AST的水平，显示出一定的降酶保肝作用；在抗氧化实验中，育阴软肝方可提高SOD、GSH-Px的活性，降低MDA的含量，提示育阴软肝方通过提高抗氧化酶的活性而减轻肝组织的氧化损伤。

综上所述，根据育阴化瘀治则的中医理论组成的育阴软肝方对急性肝损伤具有一定的降酶保肝活性，从而提高肝组织抗氧化能力是其作用机制之一。

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The protective effect of Yuyin Ruangan Decoction on experimental hepatic injury

WANG Zhi-wang△， LIU Xue-feng， TUO Hai-yan， CHENG Xiao-li， GUO Mei

(Gansu College of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China)

Objective: To investigate the protective effects of Yuyin Ruangan Decoction(YRD，traditional Chinese medicine) on experimental hepatic injury in mice. Methods: The mice were randomly divided into control group, model group and YRD low, middle and high dose group(n=11). By ip injection of D-GalN, CCl4or thioacetamide (TAA) , three models of hepatic injury mice were established to investigate the effects of YRD through detecting the indexes of liver function in serum and, the content of antioxidant system in the hepatic tissue. Results: YRD could decrease the content of alanine aminotransferase (ALT )and aspartate aminotransferase (AST) in serum and that of malonaldehyde (MDA) in the hepatic tissue, upregulate the activity of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) in the hepatic tissue. Furthermore, the above effects were dosedependent in a certain degree. Conclusion: YRD has some protection effects on the model of experimental hepatic injury in mouse.

Yuyin Ruangan Decoction(YRD); hepatic injury; antioxidant system; rats

2014-09-11

2014-10-27

R285.5

A

1000-6834(2015)01-076-04

10.13459/j.cnki.cjap.2015.01.022

△【通讯作者】Tel: 0931-8765395； E-mail: wzw0933@126.com