空心莲子草醇提物对小鼠急性酒精性肝损伤的防护作用＊

阎纳新，武谦虎

(1.河北省石家庄市第五医院，河北 石家庄 050021;2.江苏省镇江市第三人民医院，江苏 镇江 212000)

空心莲子草曾收载于1997年版《中国药典(一部)》，具有清热解毒、凉血利尿的功效，临床可用于病毒性肝炎的治疗[1－5]。笔者采用空心莲子草醇提物对小鼠酒精性肝损伤的防护作用进行了试验研究，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

药物与试剂:空心莲子草醇提物(自制)，空心莲子草原药材采自江苏镇江，经中国药科大学中药鉴定教研室鉴定为苋科植物空心莲子草 Alternanthera philoxeroides(Mart.)Griseb的全草;北京红星二锅头白酒(简称白酒，乙醇体积分数为56%，北京红星股份有限公司，批号为1435342);注射用还原型谷胱甘肽钠(商品名古拉定，积华药业有限公司，批号为5038);血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒均由南京建成生物研究所提供。动物:60只KM小鼠，雌雄各半，体重(25.0±2.0)g，饲养温度为18～20℃，自由摄食及饮水，动物合格证号为Syxk(苏)2013－0036，江苏大学医学院实验动物中心提供。仪器:Synchon CX9 PRO型全自动生化分析仪(美国贝克曼公司)。

1.2 方法

空心莲子草提取物的制备:取空心莲子草干品500 g，粉碎成粗粉，加70%乙醇适量浸泡12 h，渗漉，收集渗漉液，回收乙醇后，加蒸馏水至 500 mL(1.0 g∶1.0 mL)，装入 100 mL 瓶中高压灭菌，备用。

酒精性肝损伤模型的制备:采用白酒(含乙醇56%)经口一次性给予小鼠(灌胃量相当于每10 g体重0.14 mL)，连续7 d。

动物分组与给药:将60只KM小鼠随机分为正常对照组(A组)，模型组(B组)，阳性对照组(C组)，空心莲子草醇提物高、中、低剂量组(D1，D2，D3组)6组，各 10只，雌雄各半，按鼠体重给药。A组与 B组给予 0.09 g/(g·d)的氯化钠溶液(9.0 g/L)0.01 mL灌胃;D1，D2，D3组分别给予相当于空心莲子草生药4.00 ×10－3，2.00 ×10－3，1.00 ×10－3g/(g·d)的空心莲子草醇提物灌胃;C组给予注射用还原型谷胱甘肽钠0.30×10－3g/(g·d)灌胃。除A组外，其余各组给药1 h后再给予每只小鼠(0.014 mL/g)白酒灌胃，共连续灌胃7 d，最后1次给药后只进水。末次给药12 h后，行小鼠眼球摘取取血，将血标本离心，取血清测定ALT及AST值;同时，尽快解剖小鼠以获取新鲜肝脏，并放置10%中性福尔马林液固定，石蜡包埋切片，HE染色，在光学显微镜(×200)下观察病理组织学变化。

1.3 统计学处理

采用SPSS 10.0统计软件，数据以X±s表示，行 t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察指标

结果见表1。

X ± s，n=10)

表1 6组小鼠观察指标比较(

2.2 肝脏组织病理学变化

A组肝组织基本结构正常，细胞排列整齐，细胞呈球形。胞核圆，染色较浅，核仁明显，核膜清晰，核周间隙及核质均匀;胞质富含较多细胞器及内含物，无脂滴空泡，线粒体结构正常，其中粗面内质网常在核周及线粒体周围成群分布，平行排列，见图1 A。B组肝组织基本结构严重受损，细胞排列紊乱，肝细胞肿胀，片状坏死多见，肝中央静脉可见;胞核不规则，胞质可见数目较多脂滴空泡，见图1 B。C组肝组织基本结构可见，细胞大小尚均一，排列整齐，部分肝细胞水肿，伴少许变性，坏死病灶不多见，肝中央静脉明显，胞质可见少量脂滴空泡和溶酶体，同B组比较，明显减轻，见图1 C。D3组肝组织基本结构可见，细胞排列尚整齐，一部分细胞可见轻度水肿与脂肪变性，小胆管周围有淋巴细胞浸润，肝细胞可有点片状坏死，胞质病变可见少数线粒体存在肿胀变形，脂滴空泡和溶酶体较B组少，见图1 D。D1及D2组肝组织基本结构可见，细胞大小尚均一，排列整齐，肝中央静脉清楚可见，部分肝细胞水肿，几乎无坏死病灶，偶可见少许变性。胞质可见少量脂滴空泡及溶酶体，与B组比较，明显减轻，见图1 E和图1 F。

3 讨论

酒精中毒引起的肝损伤主要由酒精代谢产物乙醛所致[6]。本试验中采用一次性灌胃给予小鼠每10 g体重0.14 mL乙醇体积分数为56%的白酒制作肝损伤模型，该方法简单、快速、经济、易于操作且小鼠的死亡率较低。

图1 小鼠肝脏组织病理学变化(HE，×200)

ALT和AST为监测肝细胞损害临床常用的敏感指标，当肝组织出现损伤时，肝细胞能量障碍，血清中ALT和AST升高，一定程度上可由其水平推测肝细胞坏死和损伤程度[7]。当人体摄入过量乙醇后，肝脏为主要代谢脏器，但乙醇在损伤肝脏细胞同时会损伤肝脏毛细胆管，因此会同时出现肝细胞和毛细胆管炎症，此时血中另一种γ－谷氨酰转肽酶会明显升高[1，8－9]。本研究结果显示，空心莲子草醇提物各剂量药及阳性对照药均可有效降低酒精性肝损伤小鼠血清ALT和AST水平(P＜0.05);病理组织学检查显示，空心莲子草醇提物对小叶中心性纤维化、小叶中心性小灶性坏死及点状坏死均有改善作用。因此，空心莲子草醇提物在血清酶学和组织学方面均显示出对酒精诱导肝损伤的防护作用，进一步为现代工艺提取传统方药中有效物质指明了方向。

Lieber等[10]的研究显示，乙醇可增加肝细胞内自由基的生成，包括氧自由基、羟自由基等。自由基则会激活磷脂酶，引起脂质过氧化反应，增加过氧化终产物丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的生成，但抑制肝脏内抗氧化剂的产生，如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)等，联合检测 SOD和MDA可评估自由基攻击肝细胞的严重度，也进一步反映机体对氧自由基的清除能力[11]。本研究中，白酒造模的小鼠肝组织MDA含量显著增加，而SOD含量明显降低，病理学检查示肝细胞存在明显损伤，同相关报道一致，即肝损伤上述变化同脂质过氧化密切相关。对模型小鼠灌注空心莲子草醇提物后，肝组织MDA含量有效降低，而SOD含量有效提升，病理学检查示肝脏损伤明显改善，呈现出剂量依赖态势，表明空心莲子草醇提物能有效抑制脂质过氧化反应，保持细胞质膜正常，进一步表明其可清除自由基，减少其对细胞的损害作用。因此，空心莲子草抗酒精性肝损害作用机制可能与其抗脂质过氧化作用有关，为空心莲子草用于治疗酒精性肝病提供了部分理论依据。

[1]李庆德，郑锦坤，赖水招，等.醒酒护肝口服液对小鼠酒精性肝损伤的保护作用[J].中国药业，2014，23(3):14－15.

[2]景金柱，崔 哲，张秀梅，等.河蚬提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用[J].中国药业，2009，18(1):6－7.

[3]方进波，刘焱文，张彦文，等.空心莲子草抗病毒活性成分研究[J].中草药，2007，8(7):976 －979.

[4]范文乾.空心莲子草抗病毒活性成分及指纹图谱研[D].武汉:湖北中医学院，2007.

[5]武谦虎，窦志华，樊一桥，等.常用治疗肝病中药 [M].第2版.北京:中国医药科技出版社，2014:62－66.

[6]关光玉，曾家慧，张术斌，等.酒精性脂肪肝小鼠模型的建立[J].宁夏医学杂志，2007，29(11):971－972.

[7]宋成军，陈光晖，佟继铭.杞具饮乙醇提取物对小鼠酒精性肝损伤的保护作用[J].辽宁中医杂志，2006，33(5):898 －899.

[8]景明勇.苦瓜提取物对非酒精性脂肪肝大鼠血脂的影响[J].中国药业，2011，20(21):12 －13.

[9]汪海慧，成 扬，胡义扬，等.健脾活血方对大鼠急性酒精性肝损伤的干预作用[J].中西医结合肝病杂志，2009，19(4):221－223.

[10]Lieber CS.New concepts of the pathogenesis of alcoholic liver disease lead tonoveltreatments[J].CurrentGastrocnierolRep，2004，6(1):60 －65.

[11]汪 涛，姜 华，陆国才.四氯化碳肝脏毒性研究新进展[J].毒理学杂志，2008，22(4):324.