CGA与COX-2在直肠癌中的表达及临床意义

孙玉成 金恩鸿

作者单位：133000 吉林延吉 延边大学附属医院普外科

临床经验

CGA与COX-2在直肠癌中的表达及临床意义

孙玉成 金恩鸿

作者单位：133000 吉林延吉 延边大学附属医院普外科

目的 探讨嗜铬粒蛋白A（chromogranin A，CGA）、环氧合酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）在直肠癌组织中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化ABC法检测106例直肠癌及癌旁组织CGA、COX-2的表达水平，并分析其临床意义。结果 CGA及COX-2在直肠癌组织中的阳性表达率分别为43.4%和50.0%，明显高于在癌旁组织中的阳性表达率13.2%和15.1%，二者比较差异均有统计学意义（P均＜0.05）。CGA及COX-2的阳性表达与患者性别、年龄、肿瘤大小均无关（P均＞0.05）；而与肿瘤分化程度、有无淋巴结转移及Duke′s分期有关（P均＜0.05）。CGA和COX-2的表达呈正相关（r=0.42，P＜0.05）。结论 CGA及COX-2在直肠癌组织中高表达并在直肠癌的发生、发展中起一定作用，检测CGA、COX-2对直肠癌预后评估及治疗均有重要临床意义。

直肠肿瘤；嗜铬粒蛋白A；环氧合酶2；表达；临床意义

直肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年上升趋势。直肠癌恶性程度较高、侵袭力较强、易发生转移，预后差，但其发生机制尚不完全清楚。研究表明，一些肿瘤相关基因及其蛋白质因子可能参与直肠癌发生、发展并起重要作用。

嗜铬粒蛋白A（chromogranin A，CGA）是目前公认最具代表性的神经内分泌标志物之一，直肠癌组织中出现阳性表达意味着该直肠癌组织具有神经内分泌分化。研究表明具有神经内分泌分化的肿瘤恶性程度高，预后不良［1］。环氧合酶 2（cyclooxygenase-2，COX-2）是前列腺素合成过程中的一个限速酶，有研究证实COX-2参与多种恶性肿瘤的发生、发展过程，COX-2阳性表达的肿瘤更容易发生转移和术后复发。本实验检测CGA和COX-2在直肠癌组织中的表达并分析其临床意义，探讨两种因子在直肠癌发病机制中的作用，为直肠癌的预后评估和个体化治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 组织标本

直肠癌组织标本取自延边大学附属医院2008年5月至2013年5月手术切除治疗的106例患者存档蜡块，同时切取距癌旁至少2 cm且经病理检查证实无癌细胞的癌旁组织作对照。其中男75例，女31例，年龄29～81岁，中位年龄55岁；其中低分化43例，中高分化63例；有淋巴结转移33例，无淋巴结转移73例；Duke′s分期中A期+B期67例，C期+D期39例；全组临床资料完整，所有患者术前均未经放化疗治疗。

1.2 主要试剂与检测方法

全组组织标本均经10%福尔马林固定，石蜡常规包埋，标准5μm切片。兔A430抗人CGA多抗为丹麦Dako公司产品，COX-2兔抗人单抗购自日本IBL公司，DAB和ABC底物试剂盒为美国Vector公司产品。采用免疫组化ABC法检测，严格按照各试剂盒要求进行操作。用PBS液代替一抗作阴性对照，用已知的阳性切片作阳性对照。

1.3 检测结果判定标准

CGA实验中凡细胞质显示棕黄色染色颗粒者为阳性。COX-2实验中，细胞质或核膜出现棕黄色颗粒为阳性，每张切片取5个高倍镜视野，根据细胞阳性率（阳性细胞数/计数细胞总数×100%）计分，0分：≤10%；1分：11%～25%；2分：26%～50%；3分：＞50%。根据细胞染色程度记分，0分：无色；1分：浅黄色；2分：棕黄色；3分：深褐色。以上述2项记分乘积值作为判断标准，阴性（-）：0分；弱阳性（+）：1～3分；阳性（++）：4～6分；强阳性（+++）：7～9分；所有（+）以上者均视为阳性表达。全部结果由2位高年资病理科医生共同阅片判定。

1.4 统计学方法

所有实验数据均用SPSS 10.0统计学软件处理和分析。两组计数资料的比较用χ2检验；两者相关关系用Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CGA、COX-2在直肠癌组织中的表达水平

CGA在106例直肠癌组织中的阳性表达率为43.4%（46/106），在癌旁组织中的阳性表达率为13.2%（14/106），两者比较差异有统计学意义（χ2=9.302，P＜0.05）；COX-2在直肠癌组织中的阳性表达率为50.0%（53/106），明显高于其在癌旁组织中的阳性表达率15.1%（16/106），两者比较差异有统计学意义（χ2=7.529，P＜0.05）。CGA与COX-2在直肠癌组织中的表达见图1。

2.2 CGA及COX-2的阳性表达与直肠癌临床病理特征的关系

CGA及COX-2的阳性表达与患者性别、年龄、肿瘤大小均无关（P均＞0.05），而与肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、Duke′s分期均有关（P均＜0.05）。见表1。

图1 CGA和COX-2在直肠癌组织中的阳性表达（ABC×400）

表1 CGA及COX-2的阳性表达与直肠癌临床病理特征的关系［n（%）］

2.3 直肠癌组织中CGA与COX-2表达的相关性

46例CGA阳性表达的直肠癌组织中COX-2阳性42例（91.3%），阴性4例（8.7%）；60例CGA阴性表达的直肠癌组织中COX-2阳性11例（18.3%），阴性49例（81.7%）。二者的表达呈正相关关系（r=0.42，P＜0.05）。

3 讨论

CGA曾是一个备受关注的肿瘤相关因子，但由于受到技术条件的限制，自90年代末对其研究基本处于停止状态。近年随着科学技术的发展和基础医学研究的不断深入，对CGA的研究再次成为热点并取得了一些新的成果。研究表明，CGA是一种由439个氨基酸组成的酸性亲水性分泌蛋白，其基因位于人14号染色体上，是目前发现最具代表性的神经内分泌标志物，主要存在于人肾上腺髓质及神经内分泌细胞中，在嗜铬细胞瘤、类癌等内分泌肿瘤中CGA常常呈高表达。近年研究发现，CGA在内分泌肿瘤以外的多种恶性肿瘤如胆管癌、前列腺癌、子宫颈癌中呈高表达［2］。于红梅等［3］报道胃癌CGA阳性表达者1年和3年生存率均明显低于阴性者。本研究发现，CGA在直肠癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织（P＜0.05），这一结果与国内报道基本一致。本实验显示CGA的阳性表达与患者性别、年龄、肿瘤大小无关，而与肿瘤分化程度、有无淋巴结转移以及Duke′s分期有关（P均＜0.05），提示CGA阳性表达的直肠癌具有较高的恶性度，易发生淋巴结转移，预后较差。目前关于CGA在直肠癌发生、发展过程中的作用机制尚不十分清楚。有研究发现CGA首先在细胞内合成，而后由其N末端信号肽引导，通过高尔基体介导的旁路分泌到细胞外，经多种蛋白酶分解后，形成不同的生物活性片段而发挥相应的作用［4］。闵晓红等［5］研究发现结肠癌组织内的内分泌细胞通过旁分泌产生一些生物活性物质，这些物质能增强肿瘤细胞的增殖和侵袭能力，从而促进肿瘤细胞的增长和转移。Arnold等［6］研究报道，CGA阳性表达的大肠癌常规化疗方案的效果不如腺癌，而加用易瑞肽等生长抑制素类药物后其化疗效果得到明显改善，但对一般腺癌则无影响。这一研究结果提示检测CGA可能对直肠癌的治疗具有一定的指导意义。

COX-2是前列腺素合成过程中的一种限速酶，在正常组织中几乎不表达，但在一些具有促癌作用的因子如细胞因子、生长因子和癌基因等作用下，其表达可呈不同程度上调，并参与肿瘤的发生、发展［7］。研究表明，胃癌、前列腺癌、肝癌等多种恶性肿瘤的发生、发展过程均有COX-2参与［8］，综合国内外报道，COX-2在结直肠癌中的表达率为59%～71%。本实验显示COX-2在直肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织（P＜0.05），较国内外报道略低，这可能与入组病例数差异较大以及本实验组在病例选择上未包括结肠癌有一定关系。此外，COX-2的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小无关，而与肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、Duke′s分期有关（P＜0.05），表明COX-2阳性表达的直肠癌恶性程度高，容易发生转移。

本实验结果表明，CGA的表达与COX-2的表达呈正相关（r=0.42，P＜0.05）。目前，有关CGA与COX-2表达的相关性报道较少。有研究［9］显示，CGA能通过其自身的钙离子结合位点及多聚谷氨酸和碱性氨基酸与一些功能蛋白结合，在翻译或翻译后阶段影响p53蛋白的表达，使其不能与TATA-结合蛋白竞争COX-2启动子上的结合位点，从而促进COX-2的表达。另有报道，CGA可通过上调表皮生长因子受体的表达促进COX-2蛋白、COX-2 mRNA的表达［10］。然而，要确定CGA与COX-2在直肠癌中表达的相关性仍需进行大量的基础和临床实验研究。

综上，本实验结果表明CGA和COX-2在直肠癌组织中高表达，两者表达呈正相关且与直肠癌的生物学行为有一定关系。检测CGA和COX-2对直肠癌预后的评估和个体化治疗方案的制订均有重要临床意义。

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［2015-02-05收稿］［2015-03-20修回］［编辑 阮萃才］

R735.3+7

A

1674-5671（2015）04-03

10.3969/j.issn.1674-5671.2015.04.11

孙玉成。E-mail：ybyysyc@163.com