中药复方灌注液对奶牛急性子宫内膜炎临床疗效观察

冯 伟，张烜明，麻武仁，高媛媛，陈 颖，任美美，宋晓平＊

（1.西北农林科技大学动物医学院中兽医药研究所，陕西杨凌 712100；2.天津嘉立荷牧业有限公司，天津宁河 301508）

奶牛子宫内膜炎是奶牛产后多发的生殖系统疾病，是导致奶牛不孕症的最常见原因，危害也最为严重［1－2］。研究表明，我国奶牛子宫内膜炎的发病率在16.7%～68.3%之间，而60%～90%的不孕症由子宫内膜炎引起［3－4］。近年来，国内外科研人员一直致力于奶牛子宫内膜炎的预防控制和无抗治疗研究，中药制剂在子宫内膜炎防治方面以其安全性高 、低残、低毒和不易产生耐药性等突出优点倍受国内外专家关注［5］。本试验在前期中药复方筛选及药效研究基础上，对优化的中药复方灌注液进行奶牛子宫内膜炎自然病例进行试验性临床观察，旨在为治疗奶牛子宫内膜炎新中兽药的进一步研发和应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用药物 连翘、黄连、丹参、红花等药材为西安万寿路药材批发市场产品。双黄连注射液，主要成分为黄芩、金银花、连翘、栀子等，批号220486120，规格10mL／支，由某药业有限公司生产。

1.1.2 试验用动物 2014年3月～4月从宝鸡某良种奶牛场挑选年龄3岁～5岁，胎次1胎～2胎的产后荷斯坦奶牛48头，其中确诊为急性奶牛子宫内膜炎病牛40头和临床健康奶牛8头。

1.1.3 主要仪器设备 CA－500血细胞分析仪为上海泰益医疗设备有限公司产品；SHB－B95A型循环水式多用真空泵为郑州长城科工贸有限公司产品；SXKW数显电热套为北京中兴伟业仪器有限公司产品；GG－9030A型电热恒温鼓风干燥箱为上海森信实验仪器有限公司产品；HH－2型电热恒温水浴锅为北京科伟永兴仪器有限公司产品；XSP－8C生物显微镜为青岛富堡精密仪器有限公司产品；TDL－40B低速台式大容量离心机为上海安亭科学仪器厂产品。

1.2 方法

1.2.1 中药复方灌注液的制备 称取连翘、黄连、丹参、红花等原料药各100g，加6 000mL蒸馏水煎煮1h，过滤，重复3次，合并煎煮液浓缩至小体积，冰箱静置沉淀12h，离心，过滤，收集药液，减压浓缩至每毫升含原生药材1g，灌装每瓶100mL，流通蒸汽灭菌30min即可。

1.2.2 中药复方灌注液的治疗试验

1.2.2.1 急性子宫内膜炎诊断标准 ①临床诊断标准：产后奶牛，连续3d体温高于39.5℃，精神沉郁。阴道检查，可见阴道充血肿胀。直肠触诊子宫角增粗，子宫颈口附着浓稠脓性分泌物，子宫收缩反应消失，疼痛感明［6］；②实验室诊断标准：采集子宫颈口黏液进行涂片、固定、染色，在油镜下对100个视野进行白细胞计数。白细胞平均数少于10个判为（－），白细胞平均数11个～30个判为（＋），白细胞平均数31个～80个判为（＋＋），白细胞平均数81个～150个判为（＋＋＋），白细胞平均数150个以上判为（＋＋＋＋）［7］。用血细胞分析仪测定试验牛血液中的白细胞数量，健康奶牛正常血液白细胞数为6×109个／L～12×109个／L，奶牛在发生感染时，白细胞数明显增加可达15×109个／L～25×109个／L，极度增加可超过25×109个／L［8］。

1.2.2.2 试验动物分组及处理 将确诊患有急性子宫内膜炎的病牛40头，随机分为5组（A组～E组），每组8头，其中E组为疾病对照组，不给药；A、B、C组分别为中药复方灌注液高、中、低剂量组，分别子宫内灌注中药复方灌注液150、100、50mL／次，隔天1次，连用3次；D组为阳性药物对照组，子宫内灌注双黄连注射液100mL／次，隔天1次，连用3次，另选健康奶牛8头作为健康对照组（F组）。试验期共计8d，在试验前1d和试验第7天时，对试验牛进行一般临床检查、痊愈率和有效率分析、子宫颈口黏液白细胞计数、血液白细胞计数。

1.2.2.3 疗效判定标准 ①痊愈：用药1个疗程，病牛阴道色泽粉红鲜亮，直肠检查子宫角粗细恢复正常，子宫分泌物清亮透明，子宫收缩反应明显，无疼痛感，子宫颈口黏液白细胞检查为（－），血液白细胞检查回归正常范围，视为临床痊愈；②显效：用药1个疗程，病牛阴道色泽粉红鲜亮、直肠检查子宫角粗细恢复正常、子宫分泌物清亮透明和子宫收缩反应明显无疼痛感等指标仅1项不合格，子宫颈口黏液白细胞检查为（＋）及以下，血液白细胞检查回归正常范围，视为临床显效，显效数为痊愈数＋显效数；③有效：用药1个疗程，病牛阴道色泽粉红鲜亮、直肠检查子宫角粗细恢复正常、子宫分泌物清亮透明和子宫收缩反应明显无疼痛感等指标有2项不合格，子宫颈口黏液白细胞检查为（＋＋）及以下，血液白细胞检查回归正常范围，视为临床有效，有效数为痊愈数＋显效数＋有效数；④无效：用药1个疗程，临床症状和阴道直肠检查阴道子宫均无明显好转，甚至恶化，子宫颈口黏液白细胞检查为（＋＋＋）或（＋＋＋＋），血液白细胞检查超出正常范围，视为无效［9］。

1.2.3 数据处理 数据用（¯x±SD表示，应用SPSS 17.0软件对数据进行邓肯氏新复极差检验法和卡方检验，分析组间差异显著性。

2 结果

2.1 临床症状

用药治疗后第7天，中药复方灌注液高、中剂量组大部分奶牛阴道黏膜粉红鲜亮，子宫角粗细恢复正常，子宫收缩反应明显无疼痛感，分泌物较清亮透明，与健康组检查结果一致。中药复方灌注液低剂量组、阳性药物对照组，部分牛阴道肿胀消退，子宫角粗细有所恢复，子宫收缩反应明显，疼痛感消失。

2.2 痊愈率和有效率

结果见表1。

表1 中药复方灌注液的痊愈率和有效率Table 1 The cure and efficiency rate of Chinese herbal compound perfusate

2.3 子宫颈口黏液白细胞数的变化

结果见表2。在治疗第7天时，中药复方灌注液高、中剂量组（A，B组）与健康对照组（F组）差异不显著（P＞0.05），且效果极显著优于低剂量组（C组）和阳性对照组（D）组（P＜0.01）（表2）。说明中药复方灌注液高、中剂量组可显著降低子宫颈口黏液白细胞数，且效果优于阳性药物对照组。

表2 治疗前后子宫颈口黏液白细胞数量和等级Table 2 The number of leukocytes and grade level in the cervix mucus before and after the treatment

2.4 血液白细胞数的变化

结果见表3。在治疗第7天时，中药复方灌注液各剂量组（A，B，C组）和阳性对照组（D组）血液白细胞数极显著低于疾病对照组（E组）（P＜0.01）且与健康对照组（F组）差异均不显著（P＞0.05）。说明中药复方灌注液在低剂量时即可极显著降低血液白细胞数量。

表3 治疗前后血液中的白细胞数量Table 3 The number of leukocytes in the blood before and after treatment 109个／L

3 讨论

奶牛急性子宫内膜炎临床检查主要包括精神状态，阴道色泽、分泌物，子宫体状态、子宫黏液白细胞数等，其中阴道色泽、分泌物及子宫状态为主要指标。本试验应用中药复方灌注液治疗第7天时，高、中剂量组大部分牛阴道和子宫临床症状改善明显，子宫分泌物清亮透明、子宫颈口黏液及血液白细胞数明显减少，说明中药复方灌注液具有显著抗炎作用，能显著改善急性子宫内膜炎主要临床症状。该中药复方灌注液主要由连翘、黄连、丹参、红花等中药组成。方中连翘具有清热解毒、散结消肿之功效［10］。连翘及其主要成分对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、无乳链球菌均有较好抑菌作用［11－12］；黄连清热解毒，其抗菌谱较广，对革兰阴性菌和阳性菌及病毒和真菌均有抑制作用［13］；丹参对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、变形杆菌、乙型链球菌有较好抑菌作用［14］，而大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型链球菌又是奶牛子宫内膜炎的常见菌；红花属于活血化淤药，具有显著扩张血管、增加血流量、改善血液循环等作用［15］。前期试验结果表明，该中药复方灌注液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、链球菌等奶牛子宫内膜炎常见致病菌具有显著的体外抑菌作用，对小鼠试验性炎症模型具有显著的抗炎作用［16］。本试验结果表明，该中药复方灌注液按剂量100mL／次子宫灌注，隔天1次，连用3次，对临床奶牛急性子宫内膜炎具有较好治疗效果，这为防治奶牛子宫内膜炎新中兽药研发提供了重要参考资料。

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