参龙散结丸（浓缩丸）的质量标准研究

赖杰仁 杨毅生

（1九江市中医医院，江西 九江 332000；2江西省食品药品检验所，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，南昌 330029）

参龙散结丸（浓缩丸）系九江市中医医院自主研发的国家中医药管理局重点专科肿瘤科的特色医院制剂，处方源于《太平惠民和剂局方》之四君子汤，依临床实践精心加减而成。全方由太子参、白术、陈皮、天龙、菝葜、夏枯草、灵芝等10余味中药组成，具有益气健脾，软坚散结，清热解毒等功效，临床应用于证属脾虚湿困型消化系统肿瘤10余年，使用安全，疗效显著。本文采用薄层色谱法（TLC）鉴别方中白术、菝葜和夏枯草3味药材组分，建立处方中陈皮药材有效成分橙皮苷的含量测定方法，为参龙散结丸的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

HS-2060A超声清洗器（天津恒高技术发展公司），2F-Ⅰ型三用紫外分析仪（上海顾村电子仪器厂），SHIMADZULC-2010AHT高效液相色谱仪，紫外可变波长检测器UV-2550，METTLER TOLEDO十万分之一天平。

1.2 试药

白术对照药材、菝葜对照药材、夏枯草对照药材、橙皮苷对照品（含量测定用，批号：110721-200512，含量为95.3%），均购自中国食品药品检定研究院；参龙散结丸（批号：20121001，20121002，20121003，20121004，20121005，20121101，20121102，20121103，20121104，20121105，九江市中医医院），甲醇（流动相）为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 定性鉴别

2.1 白术的薄层色谱鉴别

取本品10 g，研细，乙醚30 mL，浸渍过夜，超声处理30 min，滤过，滤渣备用，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药材1 g同法制成对照药材溶液。按处方配比，取除白术外各药材，按制法工艺制备缺白术阴性样品，按上述供试品溶液同法制成缺白术阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部（附录ⅣB）“薄层色谱法”试验，吸取上述供试品溶液、缺白术阴性样品溶液和对照药材溶液各5～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（7∶3）为展开剂，预饱和 15 min 后展开，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。色谱斑点分离清晰，层析效果好。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。阴性对照样品对鉴别无干扰。

2.2 菝葜的薄层色谱鉴别

取白术鉴别备用滤渣，挥干乙醚，加乙醇50 mL，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，加2 mol/L盐酸溶液 30 mL，加热回流 1 h，迅速冷却，用乙醚振摇提取 2次，每次 20 mL，合并乙醚液，用水20 mL洗涤，乙醚液用铺有适量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液挥干乙醚，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取菝葜对照药材5 g，同法制成对照药材溶液。按处方配比，取除菝葜外各药材，按制法工艺制备缺菝葜阴性样品，按上述供试品溶液同法制成缺菝葜阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部（附录ⅣB）“薄层色谱法”试验，吸取上述供试品溶液、缺菝葜阴性样品溶液和对照品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。色谱斑点分离清晰，层析效果好。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。阴性对照样品对鉴别无干扰。

2.3 夏枯草的薄层色谱鉴别

取白术鉴别备用滤渣，挥干乙醚，加正丁醇40 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取夏枯草对照药材，同法制成对照药材溶液。按处方配比，取除夏枯草外各药材，按制法工艺制备缺夏枯草阴性样品，按上述供试品溶液同法制成缺夏枯草阴性样品溶液。照《中国药典》2010年版一部（附录ⅣB）“薄层色谱法”试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照样品溶液和对照药材溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸（4∶4∶0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 2%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。阴性对照样品对鉴别无干扰。

3 橙皮苷的含量测定

3.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙酸-水（35∶4∶61）为流动相；柱温为 30 ℃，流速为1.0 mL/min，检测波长为283 nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000。

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液 精密称取橙皮苷对照品11.63 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品母液。精密量取对照品母液5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

3.2.2 供试品溶液 本品适量，研细，取约2 g，精密称定，置索式提取器中，加石油醚（60～ 90℃）85 mL，加热回流 2～ 3 h，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇85 mL，再加热回流至提取液无色，放冷，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3.2.3 阴性样品溶液 按处方配比，取除陈皮外各药材，按制法工艺制备缺陈皮阴性样品，同供试品溶液制备方法，制得缺陈皮阴性样品溶液。

3.3 专属性考察

分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液和阴性样品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“3.1”项下色谱条件测定。结果显示橙皮苷峰形良好，供试品溶液在与对照品溶液相应位置上色谱峰一致，且阴性样品对测定无干扰，见图1。

3.4 线性关系考察

分别精密吸取上述对照品溶液 2，5，10 μL，对照品母液 3，5 μL，注入液相色谱仪中，按“3.1”项下色谱条件测定对照品峰面积，以进样量与峰面积进行回归处理，回归方程为：

r=0.999 9，橙皮苷对照品进样量在0.044 34～1.108 5 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

3.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液 10 μL，按“3.1”项下色谱条件，重复进样6次，测定橙皮苷峰面积，橙皮苷峰面积的RSD为0.48%。

3.6 重复性试验

重量差异项下本品（批号：20121102）适量，研细，取约 2 g，共 6份，精密称定，照“3.2.2”项下制备供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件测定，橙皮苷的平均含量为1.320 8 mg/g，RSD为1.21%，方法重现性良好。

3.7 稳定性试验

分别在 0，1，3，5，7，9，12，24 h，精密吸取照“3.2.2”项下制备的供试品（批号：20121102）溶液10 μL，按“3.1”项下色谱条件测定，橙皮苷峰面积值的RSD为0.61%，供试品溶液在24 h内稳定性良好。

3.8 加样回收率试验

重量差异项下本品（批号：20121102，橙皮苷含量为1.320 8 mg/g）适量，研细，取6份，每份约1 g，精密称定，置于索式提取器中，分别精密加入含橙皮苷对照品的甲醇混合溶液（浓度：0.233 1 mg/mL）5 mL，照“3.2.2”项下制备供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率（表1）。样品中橙皮苷平均回收率为96.88%，RSD值为1.49%。

3.9 耐用性试验

图1 HPLC图

重量差异项下本品（批号：20121102，20121103），研细，取约 2 g，精密称定，照“3.2.2”项下制备供试品溶液，分别用 A：YMC-Pack ODS-A C18（150 mm ×4.6 mm，5 μm）、B：Phenomenex C18（250 mm ×4.6 mm，5 μm）、C：Agilent C18（150 mm × 4.6 mm，5 μm）3 种品牌的色谱柱，按“3.1”项下色谱条件测定橙皮苷含量，RSD值低于1.0%（表2）。

表1 加样回收率试验

3.10 样品测定

重量差异项下本品10批次，研细，各取约2 g，精密称定，照“3.2.2”项下制备供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件测定，计算橙皮苷含量（表3），橙皮苷含量在1.246 0～ 1.300 3 mg/g。根据表3结果，考虑药材来源、配制操作等因素的差异影响，设以平均含量（1.266 2 mg/g）的 80%为参龙散结丸橙皮苷含量的指标。即规定：本品每1 g含陈皮以橙皮苷（C28H34O15）计，不得少于1.0 mg。

表2 不同色谱柱测定橙皮苷的含量

表3 参龙散结丸中橙皮苷含量

4 讨论

4.1 薄层色谱定性鉴别实验研究中，分别优化了供试品与对照品的点样量，比较了不同厂家的预制薄层板与自制薄层板展开情况，考察了不同温度、不同湿度条件下的展开情况，充分验证了薄层色谱鉴别方法的耐用性。

4.2 橙皮苷含量测定方法学研究中，分别比较了以甲醇-乙酸-水（35∶4∶61）、甲醇-0.1%磷酸为流动相，对橙皮苷的分离情况及峰形影响，结果以甲醇-乙酸-水（35∶4∶61）为流动相的分离情况及峰形最佳，故采用其作为测定方法的流动相。

4.3 在含量测定供试品溶液的制备方法实验中，分别考察了加热回流、超声提取和索氏回流提取等3种提取方式，结果显示，样品中橙皮苷以索氏提取最充分，故采用索氏提取；分别选用50%甲醇、95%乙醇、甲醇为提取溶剂，考察提取溶剂对测定结果的影响，结果表明，用甲醇作为提取溶剂最满意，所以选择甲醇为提取溶剂；分别选择索氏回流提取2，3，5 h，考察提取时间对测定结果的影响，结果显示，索氏提取回流3 h索氏管中提取液已近无色，故选定加热回流至提取液无色。

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