HPLC法测定三白灌肠液中升麻素苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷含量

李庆杰，王莲萍 ，李国峰

1.长春中医药大学附属医院，吉林长春 130021；2.吉林农业大学，吉林长春 130118

“三白灌肠液”是该院肛肠科开发的用于治疗肠炎的院内制剂，临床应用多年，疗效显著，为进一步造福广大病患，该院决定对该院内制剂进行新药临床前研究，在新药研制过程中，我们对质量标准进行建立，制定了防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量测定方法，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津20AT型液相（日本岛津），超声波清洗机（昆山市超声波仪器有限公司）。

1.2 试药

乙腈为色谱纯（美国Fisher公司），升麻素苷对照品（111522-201209）、5-O-甲 基 维 斯 阿 米 醇 苷 对 照 品（111523-201208），均购于中国药品生物制品检定所。三白灌肠液由长春中医药大学附属医院实验研究中心提供。

2 方法与结果

2.1 升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定[1-10]

2.1.1 色谱条件 迪马C18色谱柱，规格4.6×250 mm；波长270 nm；流动相：乙腈 -0.1%磷酸溶液（22:78)为流动相；检测波长为 254 nm；流速：1 mL/min；柱温：室温。

表1 回收率试验

2.1 .2溶液的制备

2.1.2.1 对照品溶液的制备 精称升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷，用甲醇制成每1 mL分别含升麻苷15μg，含5-O-甲基维斯阿米醇苷30μg的溶液。

2.1.2.2 供试品溶液的制备 精密吸取2 mL本品到10 mL量瓶，甲醇定溶，摇匀，滤过后作为供试品溶液。

2.1.2.3 阴性样品溶液的制备 依据已确定的制剂成型工艺操作，得到防风阴性样，并取防风阴性样，按供试品溶液制备方法制备得到防风阴性样品溶液。

2.1.3 专属性实验 取上述样品各10μL分别进行分析，结果阴性无干扰，表明分离条件良好。见图1、2、3。

图1 对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 阴性对照色谱图

2.1.4 线性关系的考察 精密吸取供试品混合液3μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，分别注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，升麻素苷回归方程为y=2000000x-25526，r=0.999；5-O-甲基维斯阿米醇苷回归方程为y=3000000x-53934，r=0.999。 结果表明升麻素苷在 0.045～0.375μg范围内线性关系良好，5-O-甲基维斯阿米醇苷在0.09～0.75μg范围内线性关系良好。

取对照品液 3 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，进样分析，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，制作标准曲线，升麻素苷回归方程为y=2000000x-25526，r=0.999；5-O-甲基维斯阿米醇苷回归方程为 y=3000000x-53934，r=0.999。升麻素苷在0.045～0.375 μg、5-O-甲基维斯阿米醇苷在 0.09～0.75 μg范围内线性关系良好。

2.1.5 精密度试验 取制得供试品溶液，连续进行6次，用峰面积计算，升麻素苷RSD为0.67%，5-O-甲基维斯阿米醇苷RSD为0.88%，表明该方法具有良好的精密度。

2.1.6 稳定性试验 取制得供试品溶液，分别在第0、2、4、8、12、24 h 进样分析，用峰面积计算，升麻素苷 RSD为2.23%，5-O-甲基维斯阿米醇苷RSD为2.27%，供试品溶液在24 h内较稳定。

2.1.7 重现性试验 取一批样品，平行制备6份样品溶液，进样分析测定，分别以升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量计算，RSD分别为1.63%和1.68%，表明该方法具有良好的重现性。

2.1.8 回收率试验 精密吸取本品6份，每份1 mL(其中升麻素苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷含量按6次测定平均值计算，分别为 0.0741 mg/mL和0.114 mg/mL），置10 mL容量瓶中，精密加入浓度为0.15 mg/mL的升麻素苷0.5 mL，浓度为0.3 mg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷0.5 mL，按2.1、2.2项下方法操作，得供试品溶液，测定，经计算，升麻素苷回收率为99.87%，RSD为1.38%；5-O-甲基维斯阿米醇苷回收率为99.01%，RSD为0.96%，回收率良好。结果见表1。

2.2 样品含量测定

取3批中试样品，按2.1、2.2项下方法操作,测定。结果见表2。

表2 样品含量测定(mg/mL)

3 讨论

在建立升麻素苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷含量测定时，起初我们采用药典方法，但样品分离条件不够理想，阴性有干扰，将色谱条件优化至现有条件后，达到满意的分离效果。

[1]中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社.2015：149.

[2]李悦悦，王慧，陈俊.HPLC法测定防风中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量[J].药学实践杂志，2010，28（6）:445-447.

[3]赵博，杨鑫宝，杨秀伟.HPLC法同时测定防风中6个主要成分的含量[J].药物分析杂志，2013，33（3）:382-387.

[4]姬雪礼，李文烈，张永锋.辛防通窍片中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定[J].中国药业，2013，22（11）:38-39.