气相色谱法测定2－二乙氨基乙硫醇的含量

张金霞，郭强功，包洁华，张 萍，马小莉

（宁夏泰瑞制药股份有限公司，银川750101）

气相色谱法测定2－二乙氨基乙硫醇的含量

张金霞，郭强功，包洁华∗，张 萍，马小莉

（宁夏泰瑞制药股份有限公司，银川750101）

为建立2－二乙氨基乙硫醇含量检测的气相色谱法，采用氢火焰离子检测器，分流进样，分流比25∶1，设定程序升温，用面积归一化法进行计算。2－二乙氨基乙硫醇在浓度0.1～0.6 g／mL范围内与峰面积具有良好的线性关系，线性方程为Y＝2.0×107X－3.1×105，相关系数R2为0.9981，精密度测试中重复性的RSD为0.03%，中间精密度的RSD为0.30%。本方法简便、准确，重现性好，可用于2－二乙氨基乙硫醇的含量测定。

2－二乙氨基乙硫醇；毛细管柱；气相色谱法；程序升温

延胡索酸泰妙菌素是一种动物专用的新型半合成抗生素，是由伞菌科北凤菌（Pleurotus mutilis）的培养液中提取的伯鲁罗母林（pleuromuLin）的氢化延胡索酸盐。临床主要用于防治鸡的慢性呼吸道病，用于猪的支原体肺炎（气喘病）、支原体关节炎、放线菌性胸膜肺炎、密螺旋体性痢疾、回肠炎、结肠炎、水肿病等。延胡索酸泰妙菌素是一种安全有效的新型兽药，具有广阔的应用前景。2－二乙氨基乙硫醇作为延胡索酸泰妙菌素生产的关键中间体在生产中有很大的需求量，但其含量的检测方法在国家标准中利用2－二乙氨基乙硫醇在盐酸溶液中被碘氧化成相应的二硫化物［1］，进行滴定分析，该方法检测受操作、试剂等因素影响，重现性较差。其它检测方法未见报道，本文旨在建立气相色谱测定2－二乙氨基乙硫醇含量的方法。

1 仪器与试剂

岛津GC－2014气相色谱仪，日本岛津；2－二乙氨基乙硫醇（保定加合精细化工有限公司）；微量进样器、滤纸、烧杯等。

2 方法

2.1 色谱条件 毛细管色谱柱（型号：DB－624，规格：30 m×0.53 mm×30 μm）；氢火焰离子检测器；载气高纯氮气；分流进样，分流比25∶1；进样口温度260℃；检测器温度：260℃；设置柱温箱温度为80℃保留4.00 min，以8.00℃／min的速度将温度升高至160℃保留2.00 min，再以30.00℃／min的速度将温度升高至250℃保留12.00 min。柱流量：20.00 mL／min；吹扫流量：3.0 mL／min；附加流量控制：30.00 mL／min。进样量0.2 μL，按面积归一化法进行计算。

2.2 系统适用性试验 取供试品2－二乙氨基乙硫醇0.2 μL注入气相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图。控制标准：连读6次进样所得图谱中2－二乙氨基乙硫醇含量RSD≤10.0%，理论塔板数（N）≥2000，与相邻的峰分离度（R）≥2.0，拖尾因子（T）≤2.0。

2.3 线性关系考察 参考文献方法［3］，分别精密称取2－二乙氨基乙硫醇10、20、30、40、50、60 g置于100 mL容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，制成浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 g／mL的溶液，分别吸取上述溶液0.2 μL注入气相色谱仪，记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。相关系数R2应大于0.99。

2.4 精密度

2.4.1 重复性 参考文献方法［4］，取供试品2－二乙氨基乙硫醇0.2 μL注入气相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，然后计算6次测试的2－二乙氨基乙硫醇含量的相对标准偏差应不大于2.0%。

2.4.2 中间精密度 取供试品2－二乙氨基乙硫醇0.2 μL注入气相色谱仪，记录色谱图。由不同分析人员不同测定日期依法测定。不同人员不同分析日期2－二乙氨基乙硫醇含量结果的相对标准偏差应不大于2.0%。

2.5 检测限与定量限

2.5.1 空白 不进样品，仅记录图谱。

2.5.2 对照品溶液的制备 取2－二乙氨基乙硫醇和纯化水按照1∶1比例混匀，作为对照品溶液。

2.5.3 供试品溶液的制备 将上述对照品溶液依次吸取2.0 mL、0.4 mL、80 μL、20 μL、10 μL、5 μL至10 mL容量瓶中，用纯化水定容，分别标记为Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6。

2.5.4 检测限与定量限测定 取供试品溶液0.2 μL注入气相色谱仪，记录空白、供试品溶液色谱图。计算供试品溶液中2－二乙氨基乙硫醇信号响应值与空白溶液信号响应值的比值。以信噪比为10∶1时的供试品溶液浓度即为定量限；以信噪比为3∶1时的供试品溶液浓度即为检测限［2］。

2.6 耐用性 调整检测器、进样口、色谱柱的温度分别上下浮动5℃，稳定后取供试品2－二乙氨基乙硫醇注入气相色谱仪，记录色谱图，计算2－二乙氨基乙硫醇含量。相对标准偏差应不大于2.0%。

3 结果与分析

3.1 系统适用性试验 按2.2项下测定的理论塔板、分离度、拖尾因子均在控制范围内，供试品连续6次测定含量的RSD值为0.26%（表1）。

表1 系统适用性试验数据统计

3.2 线性关系考察 按照2.3绘制标准曲线（图1），线性回归方程为Y＝2.0×107X－3.1×105，相关系数R2＝0.9981，即在0.1～0.6 g／mL范围内的线性关系良好。

图1 线性曲线

3.3 精密度

3.3.1 重复性 连续6次测试的2－二乙氨基乙硫醇含量的相对标准偏差为0.30%，不大于2.0%。结果如表2，方法精密度良好。

3.3.2 中间精密度 由不同分析人员不同分析时间测定的2－二乙氨基乙硫醇含量的相对标准偏差为0.29%，结果如表3。

表2 重复性测试结果

表3 中间精密度测试结果

3.4 检测限与定量限 依据2.5.1～2.5.4测定结果信噪比为3∶1时2－二乙氨基乙硫醇供试品溶液的浓度为0.05%，即为检测限；信噪比为10∶1时2－二乙氨基乙硫醇供试品溶液的浓度为0.1%，即为定量限（图2）。

图2 气相色谱图

3.5 耐用性考察 调整色谱条件中的柱温，分别设置为75、80、85℃；调整检测器的温度分别设置为255、260、265℃；进样口温度分别设置为255、260、265℃。计算不同温度条件下的相对标准偏差均不大于2.0%，结果见表4。

表4 耐用性考察结果

调整条件 温度设置／℃ 1 2 3 平均值／% RSD／%检测器温度255 97.24 97.39 97.13 97.3 260 97.73 97.70 97.76 97.7 265 97.41 98.00 97.01 97.5 0.21

4 讨论与小结

硫醇因具有极不愉快的恶臭而著称，空气中含有极微量的乙硫醇就可以嗅出其气味［5］。本文用气相色谱法测定2－二乙氨基乙硫醇含量，能有效避免供试品对检测环境的影响。试验中采用程序升温［6］有效的减少了供试品的拖尾和扩展，起始温度80℃保留4.00 min，以8.00℃／min的速度将温度升高至160℃保留2.00 min，再以30.00℃／min的速度将温度升高至250℃保留12.00 min，这种多阶线性升温，同时分流进样减少各杂质峰和主峰的拖尾及其相互间的重叠。采用分流进样，当样品注入分流进样口以后，仅有极少部分样品进入毛细管柱，其余绝大部分样品随载气由分流气体出口逸出放空。分析时分流比为25∶1（参照文献［7］分流比范围为10∶1～100∶1），可避免毛细管柱的超载，保持高柱效。

目前为止，采用气相法测定2－二乙氨基乙硫醇含量未见相关文献报道。本文采用毛细管程序升温气相色谱法测定2－二乙氨基乙硫醇含量分离效果良好；定量准确，检测限为0.05%；线性考察回归方程为为Y＝2.0×107X－3.1×105，相关系数R2＝0.9981，即在0.1～0.6 g／mL范围内的线性关系良好；重复性和中间精密度均不大于2.0%；耐用性考察结果均符合要求。得到了满意的分析结果，可用于2－二乙氨基乙硫醇的含量测定。

［1］GJB 1747－93.2－二乙氨基乙硫醇规范［S］.

［2］中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典二○一○年版（一部）［S］.

［3］药品GMP指南／国家食品药品监督管理局药品认证管理中心.质量控制实验室与物料系统［M］.北京：中国医药科技出版社，2011，8.

［4］韩 立，班付国，周红霞，等.高效液相色谱法测定穿心莲注射液的含量［J］.中国兽药杂志，2014，48（5）：43－46.

［5］王春玉，段新峰，陈 娜.二乙氨基乙硫醇的合成［J］.河北化工，2009，32（9）：48－49，67.

［6］刘 珍.化验员读本：下册［M］.北京：化学工业出版社，2010.

［7］夏玉宇.化验员实用手册：第二版［M］.北京：化学工业出版社，2010.

（编 辑：陈 希）

Gas Chromatography for Determining the Content of 2－diethylaminoethanethiol

ZHANG Jin－xia，GUO Qiang－gong，BAO Jie－hua∗，ZHANG ping，MA Xiao－li
（WuHan Chopper Biological Co.，Ltd.，Wuhan430070，China）

Establish a method for determining the content of 2－diethylaminoethanethiol by gas chromatography.Hydrogen flame ion detector，shunt sample，diversion ratio was 25∶1，set temperature programmed，calculated by area normalization method.The Linesr range of 2－diethylaminoethanethiol was 0.1～0.6 g／mL，the concentration has a good linear relationship within the scope，the equation wasY＝2.0×107X－3.1×105，the correlation coefficientR2＝0.9981，precision test repeatabilityRSDwas 0.03%，intermediate precisionRSDwas 0.30%.This method is simple，accurate，with good reproducibility，it can be used for 2－diethylaminoethanethiol content determination.

2－diethylaminoethanethiol；capillary column；gas chromatography；temperature programmed

2014－10－24

A

1002－1280（2015）01－0037－04

S859.796

张金霞，从事抗生素生产原料检验工作。

包洁华。E－mail：qcbjh＠tairuiworld.com