牛大力多糖在小鼠模型抗肝炎作用的试验观察

曹志方，郝赫宣，杨雨辉，陈 涛，姜亚磊，王金花

（1.海南大学农学院，海南海口570228；2.海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海南海口570228）

牛大力多糖在小鼠模型抗肝炎作用的试验观察

曹志方1，郝赫宣1，杨雨辉2，陈 涛1，姜亚磊1，王金花1

（1.海南大学农学院，海南海口570228；2.海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海南海口570228）

为了确定牛大力中多糖成分是否具有保肝、抗炎的作用。本试验采用小鼠急性肝损伤模型对牛大力多糖的保肝、抗炎作用进行研究。结果显示，牛大力多糖对肝损伤引起的肝脏肿大有明显地抑制效果，抑制率高达72.18%；肝组织切片也显示其对肝脏细胞和结构的完整性具有保护作用。牛大力多糖还能降低小鼠血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶（P＜0.01）的活性，明显抑制丙二醛（P＜0.05）的生成，同时降低炎性介质关键酶环氧化酶-2（P＜0.05）的表达，从而抑制炎性介质的合成。因此认为牛大力多糖具有保肝、抗炎的作用，具有较好的开发应用前景。

牛大力多糖；保肝；抗炎

牛大力，别名山莲藕、大力薯等。为豆科崖豆藤属植物，美丽崖豆藤的干燥根茎。牛大力入药历史悠久，临床上己证实其对诸多慢性疾病有治疗作用，主治腰痛、肾虚带下、风湿性关节炎、腰肌劳损、慢性肝炎、病后体虚等，表明牛大力在治疗肝炎、抗血管性炎症、抗氧化等方面具有很大的潜力［1-2］。

近年来关于牛大力多糖的研究多集中在抗炎和提高免疫力等方面，如郑元升等［3］利用小鼠急性炎症模型证明牛大力多糖能够明显减轻二甲苯对小鼠耳廓造成的局部炎症，具有较好的抗炎作用。石焱等［4］通过实验证明，牛大力多糖可增强吞噬细胞的吞噬功能，增加抗体形成细胞的数量，并能促进淋巴细胞转化。但是关于牛大力多糖对肝脏保护与肝损伤后炎症介质的产生，及相关的酶表达情况的研究却未见报道。为了确定牛大力多糖的抗肝炎作用，特进行了如下内容的研究，旨在为开发该药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 受试动物昆明系小鼠，SPF级，体重（20±2 g），购自长沙市天勤生物技术有限公司，许可证号SCXK（湘）2014-0011。

1.2 受试药物牛大力多糖冻干粉［5］，由海南大学药理学研究室提供，生药材，购自海南隆安源大药堂，经海南大学农学院王金花副教授鉴定为豆科崖豆藤属美丽崖豆藤的干燥根茎。

1.3 药品与试剂联苯双酯滴丸，广州白云山星群药业股份有限公司，批号：KF40034；四氯化碳（CCl4），国产分析纯；丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙二醛（MDA）、小鼠环氧化酶（COX-2）试剂盒，均为国产ELISA试剂盒。

1.4 牛大力多糖对小鼠药物性肝损伤的保护作用

1.4.1 动物分组及给药取SPF级KM小鼠60只，体重在20～22 g范围内，适应性喂养3 d后，随机分为6组，雌雄各半。分别为空白对照组，模型对照组，西药对照组，牛大力多糖高剂量（0.2 g/kg体重）、中剂量（0.1 g/kg体重）、低剂量（0.05 g/kg体重）给药组。西药对照组给予联苯双酯，给药剂量为45mg/kg体重，空白对照组和模型对照组给予等容积蒸馏水，连续给药8 d。

1.4.2 CCl4诱导小鼠急性肝损伤动物模型的建立各组小鼠于第4天、第8天给药1 h后，除空白对照组腹腔注射等量生理盐水外，其余各组小鼠均腹腔注射1%CCl4的油溶液10 mL/kg体重。禁食不禁水6 h后，称量小鼠体重，摘眼球取血，3 000 r/min离心10 min分离血清。同时断颈处死小鼠，取肝脏蒸馏水冲洗血迹、称重，并用10%甲醛溶液保存。

1.4.3 组织观察切片制作及生化指标检测按肝脏重量/体重（g/100 g）测定肝脏指数。取各组小鼠肝脏制作组织切片，并观察结果。利用小鼠ELISA试剂盒检测血清中相关生化指标。

1.5 数据分析采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。用单因素方差分析进行显著性检验。组间差异显著性采用单因素方差分析中的LSD方法进行多重比较检验。

2 结果

2.1 牛大力总多糖对CCl4所致急性肝损伤小鼠肝脏指数的影响模型组肝脏指数极明显高于空白对照组（P＜0.01），肝脏明显肿大，增长比例达到13.17%，说明急性肝损伤模型制作成功，肝损伤效果明显；而灌胃牛大力多糖的小鼠肝脏指数较低，多糖对肝损伤引起的肝脏肿大有明显地抑制效果（P＜0.05），抑制率高达72.18%。

2.2 肝损伤小鼠肝脏的组织切片观察观察结果发现（见中插彩版图1），空白对照组小鼠的肝脏细胞正常，血管及周围结构紧密；而模型组肝组织结构絮乱，毛细血管壁凹凸不平、断裂，血管周围结构松散，肝细胞出现明显肿大，甚至出现大量细胞破裂的情况。而给予一定剂量牛大力多糖的小鼠，可以看出毛细血管壁呈光滑，血管周围结构完整，肝细胞肿大较少，大部分细胞结构完整。说明牛大力多糖对肝脏细胞和组织结构的完整性具有保护作用。

2.3 牛大力总多糖对CCl4所致急性肝损伤小鼠血清ALT/AST表达的影响与空白对照组比较，模型对照组小鼠血清中ALT/AST表达量极明显升高（P＜0.01）；阳性对照组ALT/AST的水平极显著降低（P＜0.01），牛大力各剂量组均能降低血清中ALT/ AST的水平；与模型对照组比较，牛大力高、中剂量能明显降低ALT/AST水平（P＜0.05）（表2）。

表1 牛大力总多糖对CCl4所致急性肝损伤小鼠肝脏指数的影（-X±SD，n=10）

表2 牛大力总多糖对CCl4所致急性肝损伤ALT/AST表达的影响（-X±SD，n=10）

2.4 牛大力总多糖对小鼠血清中MDA及COX-2表达的影响与空白对照组相比较，模型对照组小鼠血清的MDA和COX-2表达量极明显升高（P＜0.01）；而西药联苯双酯能极显著降低小鼠的MDA和COX-2表达水平（P＜0.01）；牛大力高、中剂量组均能明显降低MDA水平（P＜0.05）和抑制COX-2的表达（P＜0.01）。结果表明，牛大力多糖能对抗CCl4所致的急性肝损伤（表3）。

表3 牛大力总多糖对CCl4所致急性肝损伤小鼠血清中MDA生成和COX-2表达的影响（-X±SD，n=10）

3 小结与讨论

根据目前的研究显示，一般认为药物性肝炎引起的肝损伤与病毒性肝炎引起的肝损伤症状相似［6-7］。肝损伤早起症状以肝细胞变性坏死、炎性细胞浸润、纤维胶原大量合成堆积为主［8］。肝毒性物质能产生不同类型的中介物质，从而诱导肝细胞发生炎性反应，受损的肝细胞释放炎症细胞因子，细胞因子又进而刺激炎性介质合成的关键酶COX-2的表达增加，生成大量的PGs［9］，因而抗炎药的作用往往是通过抑制COX-2实现的。关于诱导物质CCl4导致肝损伤的机制，认为肝细胞膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，从而造成细胞器损伤［10］。MDA是脂质过氧化的代谢产物，过氧化损伤肝细胞膜的结构和功能，使膜通透性升高，导致细胞肿胀坏死，MDA释放到体液中，继而使体液中MDA大量增加［11］，进一步加剧膜的损伤。因此，通过保护肝细胞及细胞膜的完整性，防止氧化应激的发生，是抑制毒性物质对肝脏损伤的前提和关键。

综上结果说明，牛大力多糖对小鼠急性肝损伤的抑制作用主要体现在对肝细胞完整性的保护，防止肝细胞膜过氧化的发生以及降低COX-2的水平起抗炎作用；而维持肝细胞的完整程度又进一步影响了细胞释放到血清中MDA的含量及降低ALT/AST的活性，进一步佐证了多糖对肝脏的保护能力。因此认为牛大力多糖具有抗肝炎作用，具有较好地开发应用前景。

［1］黄泰康，丁志遵，赵守训.现代本草纲目［M］.上册北京：中国医药科技出版社，2001：253.

［2］陈黄保.甜牛大力和苦牛大力的生药研究［J］.中草药，2001，32（9）：843-845.

［3］郑元升.牛大力多糖的提取及其药理活性研究［D］.广州：暨南大学，2009：20（10）：2585-2587.

［4］石焱，弓小雪，那婕.牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用［J］.临床军医杂志，2008，36（4）：530-532.

［5］蔡红兵，刘强，李慧，等.超声提取牛大力多糖的工艺研究［J］.中药材，2007，10：1315-1317.

［6］王建青.内质网应激在四氯化碳诱导小鼠急慢性肝损伤中的作用及部分机制［D］.合肥：安徽医科大学，2012.

［7］林胜利，卓德祥，王晓红，等.氧化损伤与内质网应激在四氯化碳致大鼠肝脂肪变性中的作用机制［J］.中国生物化学与分子生物学报，2006（05）：422-430.

［8］卢静.小鼠肝损伤动物模型的建立及在束缚应激研究中的应用［D］.北京：中国农业大学，2013.

［9］林力.基于花生四烯酸模型和T细胞模型的抗炎中药筛选研究［D］.北京：北京中医药大学，2005.

［10］汪涛，姜华，陆国才，等.四氯化碳肝脏毒性机制的研究进展［J］.毒理学杂志，2007（04）：338-339.

［11］McAdam B F，Catella-Lawson F，Mardini IA，etal.Systemic bio⁃synthesis of prostacyclin by cyclooxygenase（COX）-2：the human pharmacology of a selective inhibitor of COX-2［J］.Proc Natl Acad SciUSA，1999，96（1）：272-277.

Study on anti-inflammation of polysaccharide of M illettia speciosa Cham pin liver usingmousemodel

CAO Zhi-fang1，HAOHe-xuan1，YANG Yu-hui2，CHEN Tao1，JIANG Ya-lei1，WANG Jin-hua1
（1.Hainan University Agricultural College，Haikou 570228，China；2.Hainan Key Lab of reproduciton and Epidemic Disease Research，Haikou 570228，China）

To determine the liver protection and anti-inflammation of polysaccharide in Millettia speciosa Champ，we used the established acute liver injurymousemodel.The results showed thatsignificant inhibitory effect on liver injury were observed，and the inhibition ratewas upto 72.18%.The changes in tissue sections also indicated protective effectof liver.The results also showed a significantly reduction of ALT and AST activity（P＜0.01），and the formation of MDA and the expression of COX-2 were signifi⁃cantly suppressed.These data suggest that the polysaccharide in Millettia speciosa Champhas the potential to be used for the pro⁃tection of liver.

polysaccharide ofMillettia speciosa Champ；liver protection；anti-inflammation

YANG Yu-hui

R 284

A

0529-6005（2015）12-0057-03

2015-06-18

海南大学中西部计划学科重点领域建设项目（ZXBJH-XK002）；海南大学教育教学研究项目（hdjy1531）

曹志方（1989-），男，硕士生，从事中药开发利用的研究，E-mail：990038104@qq.com

杨雨辉，E-mail：yanguniverse@sina.com