星形细胞上调基因-1在膀胱癌中的表达及意义

李生华，钟腾飞，张 鑫，熊天华，刘 柳，蒋一强，陈 罡

(广西医科大学第一附属医院泌尿外科1、病理科2，广西 南宁530021)

星形细胞上调基因-1在膀胱癌中的表达及意义

李生华1，钟腾飞2，张 鑫2，熊天华2，刘 柳2，蒋一强2，陈 罡2

(广西医科大学第一附属医院泌尿外科1、病理科2，广西 南宁530021)

目的探讨星形细胞上调基因-1(AEG-1)在膀胱癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测224例膀胱癌组织及56例正常膀胱组织中AEG-1表达的差异及其与相关临床病理参数间的关系。结果AEG-1在膀胱癌组织中的表达显著高于正常膀胱组织(P＜0.01)；男性膀胱癌患者AEG-1的表达明显高于女性膀胱癌患者(P＜0.05)；膀胱癌高级别组中的表达显著高于低级别组(P＜0.01)；膀胱癌Ⅲ、Ⅳ期者显著高于Ⅰ、Ⅱ期者(P＜0.01)；伴有淋巴结转移者AEG-1的表达显著高于无淋巴结转移者(P＜0.01)；肿瘤直径≥3cm组AEG-1的表达显著高于肿瘤直径＜3cm组(P＜0.01)。膀胱癌复发组AEG-1的表达显著高于无复发组(P＜0.01)。结论AEG-1的高表达与膀胱癌的发生与演变密切相关。

星形细胞上调基因-1；膀胱癌；免疫组化

星形细胞上调基因-1(Astrocyte elevated gene-1，AEG-1)位于人类染色体8q22.1，最早发现于人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染的人胚胎初级星形细胞。AEG-1又称MTDH或Lyric，该基因与肿瘤细胞的增殖、浸润、转移及血管生成相关，并能介导肿瘤细胞的自噬和化疗耐药[1]。多项研究表明，AEG-1可调控肿瘤细胞的异常增殖[2-5]，很有可能成为一个新的肿瘤分子靶向治疗的新靶点。但目前AEG-1在膀胱癌中的研究较少[6-7]，AEG-1在膀胱癌发生和演变过程中的作用尚未完全明确。故本研究在224例不同组织亚型膀胱癌组织中，检测AEG-1的表达，探讨AEG-1在膀胱癌发生、发展及预后中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集广西医科大学第一附属医院2004年1月至2006年10月膀胱癌标本224例，包括膀胱尿路上皮癌166例，膀胱腺癌42例，膀胱鳞癌16例，构建组织芯片。其中男性191例、女性33例；年龄27～96岁，平均(61.6±13.7)岁；低级别135例、高级别89例；TNMⅠ～Ⅱ期67例、Ⅲ～Ⅳ期157例；无淋巴结转移者209例、伴有淋巴结转移者15例。采用电话方式进行随访，随访时间6～40个月，106例随访至2008年9月。至随防结束，无复发者81例、复发肿瘤者25例。另选取本院2009年1月至2013年2月经尸体解剖获取的正常膀胱组织共56例作为对照研究。本研究得到本院伦理委员会批准，入选患者对该研究有知情同意权。

1.2 方法 鼠抗人AEG-1抗体购自Cell Signaling公司，使用免疫组织化学SuperVision两步法(北京中杉公司)进行染色，均照试剂盒说明书操作[7]。AEG-1主要定位于细胞胞浆中，且集中于核周[5]。由两名病理科医师采用双盲法阅片和双评分半定量积分法进行评分[8]：观察并计算10个高倍镜视野中的平均肿瘤细胞染色情况，其中靶细胞阳性率＜25%为0分，25%～＜50%为1分，51%～75%为2分，＞75%为3分；显色程度按切片中细胞显色有无及染色深浅记分，细胞无染色为0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将两者相加，＜2分记为阴性，≥2分均视为阳性表达。

1.3 统计学方法 应用SPSS20.0统计软件进行数据分析，AEG-1在癌与非癌组织中的表达及在其余临床病理参数中的表达差异均采用χ2检验，AEG-1在不同病理类型膀胱癌中表达差异采用非参数Kruskal-WallisH检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AEG-1在膀胱癌和正常膀胱中的表达差异 膀胱癌组织中AEG-1的阳性率为52.7%(118/224)，显著高于正常膀胱组织的21.4%(12/56)，差异有统计学意义(χ2=-4.187，P＜0.01)，见表1，图1。

表1 AEG-1表达与膀胱癌临床病理特征的关系

图1 AEG-1蛋白在膀胱癌组织中的表达情况

2.2 AEG-1表达与膀胱癌临床病理参数的关系 AEG-1在男性组、膀胱癌高级别组、Ⅲ期、Ⅳ期、淋巴结转移组、肿瘤直径≥3cm组、复发组的表达显著高于各自对应组(均P＜0.05)。AEG-1的表达在年龄、病理类型、远处转移、肿瘤数量、生长方式分组中差异无统计学意义(表1)。Spearman相关性分析显示，AEG-1的表达与组织、分级、病理类型、浸润、淋巴结转移、直径、复发明显相关(均P＜0.05)。

3 讨 论

AEG-1基因位于染色体8q22.1，全长3611 bp，包含11个内含子和12个外显子。已有研究证实该染色体区域与多种恶性肿瘤的发生高度相关[1]。AEG-1作为Ras/PI3K/Akt/c-Myc信号转导通路下游的分子，可通过调控PI3K/Akt、NF-κB、Wnt/β-catenin、MAPK等多条信号途径参与正常细胞的转化、肿瘤细胞的增殖、浸润、转移和血管生成等恶性生物学行为，并能介导肿瘤细胞的自噬和化疗耐药，从而促进肿瘤的发生与发展[1，4，9]。膀胱癌是泌尿系统中具有高度侵袭性和转移能力的恶性肿瘤。膀胱癌包括尿路上皮癌、腺癌和鳞癌，其中最常见的是尿路上皮癌。其发生与发展是一个多步骤、多阶段的过程，并受众多因素的影响，如遗传、基因多态性和染色体异常等[10-12]。至今为止，仅有两项研究报道了AEG-1与膀胱癌的关系。Zhou等[7]在小样本(n=60)膀胱尿路上皮癌中发现39例AEG-1为阳性，阳性率为65%(39/60)，明显高于正常膀胱组织，但膀胱腺癌、鳞癌患者未被纳入。Yang等[6]则仅在非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌中发现了AEG-1的高表达，阳性率为45%(46/102)，肌层浸润者及腺癌、鳞癌也均未被纳入。本课题使用更大的样本量(n=224)及多种膀胱癌亚型(尿路上皮癌、腺癌、鳞癌)进一步研究AEG-1的表达情况，结果发现AEG-1在总体膀胱癌中呈高表达，且AEG-1在不同病理类型膀胱癌中的表达差异无统计学意义。其中在尿路上皮癌的表达率为48.8%，略低于Zhou等[7]的结果(65%)，但仍显著高于非癌组织。同时，膀胱腺癌及鳞癌的AEG-1表达率也均高于非癌组织，提示AEG-1可能在各种亚型的膀胱癌发生中均发挥一定的作用。

既往对AEG-1与膀胱癌临床病理参数的关系研究结果也存在争议。Yang等[6]发现在非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌AEG-1的阳性率为45%。而在本研究中，AEG-1在非肌层浸润性膀胱癌中的表达仅为29.9%，而肌层浸润膀胱癌中的表达为62.4%。两项研究阳性率的差异可能与样本大小及来源有关。Zhou等[7]研究发现AEG-1的表达与膀胱癌病理分级密切相关，低级别膀胱癌中AEG-1的阳性率高于高级别膀胱癌(P＜0.001)。同样，Yang等[6]也发现在非肌层浸润性膀胱癌中AEG-1的阳性率在低级别膀胱癌中较高(P=0.0002)。本课题中，高级别膀胱癌AEG-1的阳性率为68.5%，明显高于低级别膀胱癌(42.2%，P＜0.001)，与之前的两者的报道一致。Zhou等[7]研究的研究显示AEG-1的表达与膀胱癌的临床分期、肿瘤多发性和复发相关，本课题的结果也同样验证了AEG-1的表达与临床分期、肿瘤大小和复发相关。此外，我们还发现在膀胱癌中AEG-1的表达与性别和淋巴结转移同样相关。本课题中男女样本例数差别较大，故AEG-1与患者性别的关系有待进一步大样本的研究。以上结果提示AEG-1在膀胱癌的演变的过程中扮演着重要角色，并随着膀胱癌病程的进展，AEG-1的表达呈上升趋势，且高表达AEG-1与不良预后密切相关。

综上所述，AEG-1与膀胱癌的发生与进展密切相关，有望成为膀胱癌诊断、判断预后及分子靶向治疗的新指标。

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Expression and clinical significance of AEG-1 in bladder cancer tissues.

LI Sheng-hua1,ZHONG Teng-fei2,ZHANG Xin2,XIONG Tian-hua2,LIU Liu2,JIANG Yi-qiang2,CHEN Gang2.Department of Urinary Surgery1,Department of Pathology2,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning530021,Guangxi,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of AEG-1 in bladder cancer tissues.MethodsImmunohistochemistry(IHC)was used to detect the expression of AEG-1 in224 cases of bladder cancer tissues and56 cases of normal bladder tissues.The relationships between AEG-1 expression and clinical pathological parameters were also analyzed.ResultsThe expression of AEG-1 was significantly higher in bladder cancer tissues than in normal bladder tissues(P＜0.01),in male patients than female patients(P＜0.05),in higher levels of bladder cancer than lower levels of bladder cancer(P＜0.01),in bladder cancer tissues of stageⅢandⅣthan bladder cancer tissues of stageⅠandⅡ(P＜0.01),in patients with lymphatic metastasis than those without lymphatic metastasis(P＜0.001),in patients with tumor diameter≥3cm than those with tumor diameter＜3cm(P＜0.01),as well as in patients with recurrence than those without recurrence(P＜0.001).ConclusionOverexpression ofAEG-1 is closely correlated with tumorigenesis and development of bladder cancer.

Astrocyte elevated gene-1;Bladder cancer;Immunohistochemistry

R737.14

A

1003—6350（2015）20—2973—03

2015-04-24)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.20.1083

广西大学生创新创业计划(编号：201410598004)；广西大学生未来学术之星课题(编号：WLXSZX1550)

陈 罡。E-mail：chen_gang_triones@163.com