黄芪提取物抗肿瘤作用的有效部位研究*

杜虹韦 赵欣蕾 韩德强 姚 琳

（黑龙江省中医药科学院·哈尔滨 150036）

黄芪有补气升阳、益卫固表、利尿消肿、托毒生肌之功效，始载于《神农本草经》，列于上品,是常用补益药之一，植物资源极为丰富[1]。传统上应用于保肝、防治糖尿病、保护心肌、抗血小板聚集等方面。近年来，相关研究表明黄芪具有较强的抗肿瘤活性。黄芪用途广泛，多年来人们对黄芪的化学成分，药理作用及临床应用进行大量的研究，特别是近几年来对黄芪抗肿瘤作用成为研究焦点[2]。本实验选择小鼠S180实体瘤作为动物移植肿瘤模型，采用不同的提取部分，观察各部分对实验动物移植肿瘤的抑瘤率，以确定黄芪抗肿瘤活性的有效部位。

1 材料

1.1 药材来源

黄芪药材Astragalus membranaceus(Fisch.)采集于黑龙江省依兰县，经鉴定为豆科植物蒙古黄芪的干燥根。

1.2 动物与瘤株

小鼠，昆明种，SPF级，体重20g左右，雌雄各半，由黑龙江中医药大学GLP实验动物中心提供。肉瘤S180细胞株,由哈尔滨医科大学提供，以腹水型传代。环磷酰胺由上海华联制药有限公司提供。

1.3 仪器设备

AG135型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；超净工作台(苏州净化设备厂)。

2 实验方法

2.1 实验用药的制备

取干燥的黄芪药材100g，粉碎至适宜粒度，用1000mL70%乙醇渗漉提取，提取液减压浓缩至无醇味，加水分散至100mL制成水混悬液。分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分取有机层，得到4个部分:Ⅰ(石油醚层)、Ⅱ(乙酸乙酯层)、Ⅲ(正丁醇层)、Ⅳ(水层部分)。将提取的各个部分分别减压回收溶剂至干，加适量95% 乙醇溶解，再加蒸馏水稀释(乙醇终浓度≤1.5%)制成实验所需浓度的混悬液。

2.2 小鼠S180实体瘤模型的建立

在无菌条件下将S180腹水癌细胞放入到无菌容器内,冰浴中保存。另取少量腹水, 置于加有肝素的试管中,观察细胞形态及细胞计数用。癌细胞数大于97%方可使用。腹水用灭菌后的生理盐水作稀释, 使细胞数为2×107个/ml，配制成S180 瘤细胞悬浮液，吹打混匀。于小鼠右前肢腋窝下注射S180细胞悬0.2mL[3]。24h后将小鼠随机分组。

2.3 动物分组及给药方法

将接种肿瘤的昆明小鼠在成瘤后按照瘤体大小随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组、阳性对照组以及样品Ⅰ-Ⅳ给药试验组。小鼠S180模型制备成功之后，阳性对照组于ip环磷酰胺1次，给药剂量为100mg/kg，其他试验组于同一时间ig给药1次，试验组黄芪醇提物不同极性部位给药剂量为21g/kg/d(以生药量计)，空白对照组给予相同剂量的空白溶剂，连续给药10d。于最后1次给药24h后将小鼠称重后脱臼处死，剥取各组动物的肿瘤，称质量，每组计算10个鼠肿瘤的平均质量，比较治疗组与对照组的平均瘤质量，最后计算各组实验动物的抑瘤率[4、5]。

2.4 统计学方法

应用SPSS 17.0 统计处理软件进行统计分析，结果以x±s表示，采用方差分析和t检验进行比较。P＜0.05有统计学意义。

3 结果

黄芪提取物对小鼠S180实体瘤生长的影响结果见表1。结果表明黄芪提取物样品Ⅲ(正丁醇层萃取物)对小鼠移植S180 实体瘤具有明显的抑制作用，其中正丁醇萃取物组，平均抑瘤率为65.91%，结果见表1。其他提取部位对小鼠移植S180实体瘤影响不显著。以上结果表明黄芪70%乙醇提取物的正丁醇萃取物具有良好的抗肿瘤活性。

表1 黄芪提取物对小鼠S180实体瘤生长的影响(±s，n = 10).

表1 黄芪提取物对小鼠S180实体瘤生长的影响(±s，n = 10).

注:与对照组比较*P ＜ 0. 05

组别 平均瘤重 抑瘤率%对照组 1.71 ± 0.43 0阳性组 0.46 ± 0.11 83.94样品Ⅰ 1.28 ± 0.45 44.20样品Ⅱ 1.56 ± 0.69 49.18样品Ⅲ 0.77 ± 0.17* 65.91样品Ⅳ 1.19 ± 0.37 53.94

4 小结

黄芪作为一种天然抗肿瘤药物确实值得人们进一步研究和利用。本实验以S180实体瘤小鼠为动物模型，以抑瘤率为考察指标，对黄芪70%乙醇提取物的不同溶剂萃取部位:石油醚萃取部分、乙酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分以及水层部分分别进行了抗肿瘤活性筛选。将接种肿瘤的昆明小鼠在成瘤后按照瘤体大小随机分组，阳性对照组ip环磷酰胺，给药剂量为100 mg/kg，其他试验组于同一时间ig给药，每天1次，给药剂量按生药量计为20g/kg，空白对照组给予相同剂量的空白溶剂，连续给药10d。结果发现黄芪提取物能明显抑制小鼠S180实体瘤生长，其中正丁醇萃取物组，平均抑瘤率为65.91%。正丁醇萃取部分抗肿瘤活性较强，为黄芪抗肿瘤有效部位。

[1]Lu S, Chen KJ, Yang QY, Sun HR. Progress in the research of Radix Astragali in treating chronic heart failure:Effective ingredients, dose-effect relationship and adverse reaction. Chin J Integr Med. 2011;17(6):473-7.

[2]Tang D, He B, Zheng ZG, Wang RS, Gu F, Duan TT, Cheng HQ, Zhu Q. Inhibitory Effects of Two Major Isoflavonoids in Radix Astragali on High Glucose-Induced Mesangial Cells Proliferation and AGEs-Induced Endothelial Cells Apoptosis. Planta Med. 2011;77(7):729-32.

[3]杨淑文，崔乔.5种灵芝硒多糖抑制小鼠 S180肉瘤生长作用的比较研究. 辽宁师范大学学报( 自然科学版).2010,9(33).

[4]何照范, 张迪清. 保健食品化学及其检测技术[M].北京: 中国轻工业出版社, 1999: 83.

[5]郑建仙. 功能性食品[M].北京: 中国轻工业出版社,2002:188 -190.