子宫内膜异位症合并代谢综合征患者血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES及组织中 kiss-1 的表达

李萍 董军杰 牛海玲 赵金荣 王海波 李秀娟

子宫内膜异位症多发于生育年龄女性，多表现为痛经、持续性下腹痛、经量增多、经期延长及卵巢功能减退和丧失、性交痛和不孕。临床研究表明，子宫内膜异位症生物标志物对患者的早期诊断、病情预测、疗效评估有重要作用［1］。代谢综合征患者由于胰岛素抵抗、糖调节受损，可导致患者卵巢颗粒细胞瘤中IRS-2、PPAR-γ mRNA功能障碍，从而发生子宫内膜病变、生殖能力下降。Kiss-1表达减弱可能与子宫内膜异位症的侵袭过程有关［2］。研究表明，子宫内膜异位症的发生可能与血管内皮生长因子(VEGF)-VEGFR-sVEGFR系统有关，而血管内皮生长因子可溶性受体(sflt-1)与子宫内膜异位症的发生呈负相关［3］。单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)能够参与机体的免疫炎症调节，而子宫内膜异位症的发生与患者全身免疫功能异常有关，研究表明，患者内膜MCP-1水平明显高于正常患者，且MCP-1水平在分泌期和增生期水平也不同［4］。T细胞表达和分泌的调节性激活因子(RANTES)，能够参与炎性反应并调控细胞的生长分化。国内对子宫内膜异位症合并代谢综合征研究较少。本研究对子宫内膜异位症合并代谢综合征患者测定其组织kiss-1及血清和腹腔液中 sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达的意义，以期为临床提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取260医院2009年11月至2014年10月收治的子宫内膜异位症行腹腔镜手术患者256例，患者均符合“子宫内膜异位症的诊断与治疗规范”［5］，且经病理证实，年龄 15 ～46 岁，平均年龄(36±9)岁;月经初潮年龄10～16岁，平均年龄(13±3)岁;月经周期24～30 d，平均(27±4)d;月经天数4～8 d，平均(7±3)d;孕次0～2次，平均(1.0±0.4)次;体重指数(BMI)(29±6)kg/m2;CA125阳性173例(67.6%);合并子宫肌瘤68例(26.6%);痛经142例(55.5%)，非经期下腹痛 46 例(18.0%)，性交痛8例(3.1%)。子宫内膜异位症患者根据病变部位、大小、粘连程度分为Ⅰ～Ⅳ期，其中Ⅰ～Ⅱ期76例(Ⅰ～Ⅱ期组)，Ⅲ～Ⅳ期180例(Ⅲ～Ⅳ期组)。Ⅰ～Ⅱ期组年龄16～45岁，平均年龄(35±10)岁;月经初潮年龄10～15岁，平均(12±3)岁;月经周期25～29 d，平均(26±5)d;月经天数5～8 d，平均(7±3)d;孕次0～2次，平均(0.9±0.5)次;BMI(27±8)kg/m2;CA125阳性 40例(52.6%);合并子宫肌瘤 20例(26.3%);痛经 39 例(51.3%)，非经期下腹痛 14 例(18.4%)，性交痛 2 例(2.6%)。Ⅲ ～ Ⅳ期组年龄15～46岁，平均年龄(37±9)岁;月经初潮年龄10～16岁，平均(13±4)岁;月经周期26～30 d，平均(27±5)d;月经天数4～8 d，平均(7±3)d;孕次0～2次，平均(1.1±0.4)次;BMI(28±4)kg/m2;CA125阳性133例(73.9%);合并子宫肌瘤48例(26.7%);痛经103例(57.2%)，非经期下腹痛 32 例(17.8%)，性交痛 8例(3.3%)。选取同期因卵巢良性肿瘤、输卵巢系膜囊肿、宫颈病变等入院治疗的患者114例为对照组，年龄14～50岁，平均年龄(37±10)岁;月经初潮年龄9～16岁，平均(12±3)岁;月经周期 23～31 d，平均(28±4)d;月经天数4～7 d，平均(5±2)d;孕次0～2次，平均(2.5±1.0)次;BMI(22±3)kg/m2;CA125 阳性20例(17.5%)。2组年龄、月经初潮年龄、月经周期、月经天数、孕次、体重指数比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。本研究通过我院临床试验伦理委员会批准。

1.2 入选与排除标准

1.2.1 入选标准:①符合相关诊断标准;②年龄≤50岁;③BMI＞25 kg/m2;④空腹血糖 ＞6.1 mmol/L;⑤三酰甘油 ＞1.7 mmol/L;⑥患者或家属知情同意。

1.2.2 排除标准:①恶性肿瘤;②服用性激素、免疫抑制剂或非甾体类抗炎药;③半年内无妊娠或哺乳史;④风湿、类风湿或其他免疫系统疾病。

1.3 观察指标

1.3.1 Kiss-1检测:取子宫内膜组织标本，包埋、切片备用。采用羊抗人kiss-1 metastin多克隆抗体(英国ABCAM提供)，免疫组化试剂盒(北京瑞达医药科技有限公司)。严格按照说明进行操作。Kiss染色呈棕黄或棕褐色颗粒，定位于细胞质。根据染色强度分为4级:0分:无染色;1分:淡黄色;2分:中度黄色;3分:棕褐色。根据阳性细胞所占比例分为3级:1级:≤10%，2级:10% ～50%，3级＞50%。根据阳性细胞的百分比和染色强度分为4个等级:(－):0～1分;(+):2～3分;(++):4～5分;(+++):＞5分。

1.3.2 血清及腹腔液指标检测:①血清:抽取患者空腹肘静脉血5 ml，2 500 r/min离心15 min，取上清液置于－70℃冰箱保存待测。②腹腔液:术中采用负压吸引，取无血液污染的患者腹腔液5 ml，置于无菌离心管中，2 500 r/min离心15 min，取上清置于 －70℃冰箱保存待测。③操作:sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES检测均采用ELISA进行测定(试剂盒均购自上海信然生物技术有限公司)，使用前将所有试剂充分混匀。加入稀释好后的标准品、加入待测样品50 μl于反应孔内。立即加入50 μl的生物素标记的抗体。盖上膜板，振荡混匀，37℃温育1 h。洗板3次。加入亲和链酶素-HRP 37℃温育30 min。洗板3次。每孔加入底物 A、B 各50 μl，轻轻振荡混匀，37℃温育 10 min。加入终止液后应立即测定结果。在450 nm波长处测定各孔的OD值，根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。

1.4 统计学分析 应用SPSS 17.0统计软件，计数资料采用χ2检验，计量资料以表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组kiss-1在子宫内膜组织中的阳性表达 子宫内膜异位症组、Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期kiss-1在子宫内膜组织的阳性表达明显低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。Ⅰ～Ⅱ期kiss-1在子宫内膜组织的阳性表达明显高于子宫内膜异位症组和Ⅲ～Ⅳ期，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 kiss-1在子宫内膜组织中阳性表达 例

2.2 2 组血清和腹腔液中 sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达比较 子宫内膜异位症组、Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期血清和腹腔液中 sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ ～Ⅳ期血清和腹腔液中 sflt-1、VEGF、和RANTES表达与子宫内膜异位症组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。Ⅰ～Ⅱ期血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、和RANTES表达与Ⅲ～Ⅳ期比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。宫内膜异位症组、Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期血清和腹腔液中MCP-1水平比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

3 讨论

子宫内膜异位症多发于育龄期女性，虽然本病属于良性疾患，但其具有远处转移和种植的恶性特征，给患者造成不孕、慢性疼痛等症状，严重影响其正常生活工作状态。目前其发病机制不明，有多种学说阐述其发病病因，病理改变为异位内膜组织随激素变化发生周期性出血，同时伴有周围组织增生和粘连，在病变区可见紫褐色斑点或小泡，最好可发展为紫蓝色实质性结节或包块。子宫内膜异位症合并代谢综合征患者，因为体内血脂紊乱并合并胰岛素抵抗，影响卵巢的分泌功能，造成体内激素失调，患者的临床症状更为明显。研究表明，子宫内膜异位症的发病与基因、炎性介质、血供有关［6－8］。本研究对子宫内膜异位症合并代谢综合征患者测定其组织kiss-1及血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES 表达的意义，探讨相关因子在发病中的作用。

表2 2组血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达比较 ±s

表2 2组血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达比较 ±s

注:与子宫内膜组比较，*P ＜0.05;与Ⅰ ～ Ⅱ期比较，#P ＜0.05;与Ⅲ ～Ⅳ期比较，△P ＜0.05

组别 sflt-1(pg/ml)血清 腹腔液VEGF(pg/ml)血清 腹腔液MCP-1(ng/ml)血清 腹腔液RANTES(ng/L)血清 腹腔液子宫内膜异位症组(n=256) 241±91 472±55 542±87 867±69 37±8 84±25 109±58732±244Ⅰ～Ⅱ期(n=76) 229±88* 443±36* 396±77* 727±58* 39±6 80±27 75±31* 482±183*Ⅲ～Ⅳ期(n=180) 266±92*# 492±64*# 611±101*# 998±120*# 36±4 89±26 151±100*# 912±253*#对照组(n=114) 97±21*#△ 280±59*#△ 119±44*#△ 405±62*#△ 20±4*#△ 65±30*#△ 32±18*#△ 115±79*#△

3.1 Kiss-1 王伟等［9，10］研究表明，kiss-1 及其表达产物可以影响机体的神经内分泌系统，其可以促进下丘脑下丘脑兴县激素释放激素分泌，并可以抑制肿瘤细胞的转移，而子宫内膜异位症患者多有远处种植现象。kiss-1在子宫内膜异位症的表达降低，可能与内异症侵袭有关，同时发现不同临床分期中kiss-1表达不同，但差异无统计学意义(P＞0.05)。但本研究发现子宫内膜异位症组、Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期kiss-1在子宫内膜组织的阳性表达明显低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。Ⅰ～Ⅱ期kiss-1在子宫内膜组织的阳性表达明显高于子宫内膜异位症组和Ⅲ～Ⅳ期，差异有统计学意义(P＜0.05)。而这一结论与金海鸿等［11］的研究结果一致，可能与患者入选的标准或调查样本大小有关。

3.2 sflt-1和VEGF 目前，血管形成是子宫内膜异位症的研究热点，而VEGF和sflt-1可以促进子宫内膜间质细胞的增殖。王春红等［12］对34例子宫内膜异位症患者进行研究发现，VEGF表达在分泌期和增生期失去了正常的周期性变化，均呈现高水平表达。同时，子宫内膜异位症患异位组织中微血管密度明显升高［13］。本研究证实，子宫内膜异位症组sflt-1和VEGF水平均较对照组高(P＜0.05)，且Ⅲ～Ⅳ期水平高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)。说明sflt-1和VEGF可能参与了子宫内膜异位症的发病过程。

3.3 MCP-1和RANTES MCP-1的研究较为广泛，其参与机体多种生理或病理性活动，主要参与机体免疫炎症调控，同时可以上调VEGF的表达水平，通过诱导内皮细胞迁移，参与到血管生成中［14］。RANTES主要作用是激活T细胞，趋化、激活多种白细胞。研究表明，RANTES与子宫内膜异位症患者组织炎症、痛经评分呈正相关(P＜0.05)，说明RANTES可能与子宫内膜碎片逆流进入腹腔后导致的炎性反应有关［14，15］。本研究表明，子宫内膜异位症组MCP-1和RANTES水平均较对照组高(P＜0.05)，Ⅲ～Ⅳ期RANTES水平高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，而MCP-1间差异无统计学意义(P＞0.05)。

综上所述，kiss-1、sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES 水平与子宫内膜异位症合并代谢综合征发展密切相关，可能参与了其发病过程，可以作为子宫内膜异位症合并代谢综合征的辅助检测指标。

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