HPLC法测定蛋白琥珀酸铁口服溶液中防腐剂的含量

刘存富

(江苏省建湖县人民医院药剂科，江苏 建湖 224700)

蛋白琥珀酸铁口服溶液用于治疗缺铁性贫血，由于其效疗确切，不良反应小，在小儿缺铁性贫血中有广泛的应用［1－4］。在此口服溶液的处方中添加有一定量的防腐剂如对羟基苯甲酸甲酯钠和对羟基苯甲酸丙酯钠以抑制微生物的生长繁殖。大量的临床观察和实验表明，防腐剂对人体存在一定的毒副作用［5－6］，因此本制剂需对防腐剂的含量进行测定控制，以确保临床用药的安全。本文建立测定快速测定羟基苯甲酸甲酯钠和对羟基苯甲酸丙酯钠的含量HPLC方法，并对多批次的蛋白琥珀酸铁口服液中防腐剂进行了测定和评价。

1 仪器与试药

仪器:Waters 2695型高效液相色谱仪(美国)，PDA检测器，EMPOWER 3色谱工作站。

试剂:乙腈为色谱纯(德国Merck公司);超纯水;蛋白琥珀酸铁口服液(意大泛马克大药厂);对羟基苯甲酸甲酯钠和对羟基苯甲酸丙酯钠购自于中国食品药品检定所。

2 方法与结果

2．1 溶液的配制 对照品储备液:分别取对羟苯甲酸甲酯钠和对羟苯苯甲酸丙酯钠对照品21 mg和7 mg，精密称定，置250 mL量瓶中，加40%乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，混匀，即得。

供试品溶液:精密量取蛋白琥珀酸铁口服溶液1 mL置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，即得。

2．2 色谱条件 色谱条件:用AichromBond-AQ C18色谱柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm)，乙腈∶水(40∶60)为流动相;检测波长为 254 nm，流速 1．0 mL·min－1，柱温40℃;进样量:20μL。在上述色谱条件下，两种防腐剂分离度和峰形均良好。

2．3 线性关系 精密量取适量的对照品储备液于不同体积的量瓶中，依次精密量取 1、1、3、2、5、3、1 mL 分别置于 100、50、100、50、100、50、10 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，作为线性样品溶液。在上述色谱条件下，分别进样，记录色谱图。以对羟基苯甲酸甲酯钠的浓度为纵坐标(C)，以峰面积为横坐标(A)，求得回归方程为:C=0．007 5A+0．031 4(r=0．999 8)。以对羟基苯甲酸丙酯钠的浓度为纵坐标(C)，以峰面积为横坐标(A)，求得回归方程为:C=0．009 2A －0．007 4(r=0．999 9)。表明浓度在0．873 ～8．732 mg·L－1范围内，对羟基苯甲酸甲酯钠的浓度与峰面积呈良好线性关系;浓度在0．296 ～2．964 mg·L－1范围内，对羟基苯甲酸丙酯钠的浓度与峰面积呈良好线性关系。

2．4 精密度 取线性关系项下第4点的溶液，依法操作，连续进样5次，记录峰面积。对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸丙酯钠峰面积的RSD分别为0．04%和0．22%。说明本法精密度良好。

2．5 溶液稳定性 取线性关系项下的第4点溶液，每隔1 h进样，考察峰面积的变化，考察至7 h。对羟基苯甲酸甲酯钠和对羟基苯甲酸丙酯钠峰面积的RSD分别为0．34%和0．43%。表明样品溶液在7 h内稳定性良好。

2．6 回收率 精密移取 1．0、1．5、2 mL 对照品储备液置100 mL量瓶中，再精密加不含防腐剂空白溶液1 mL，加水稀释至刻度，摇匀。平行3份，进液相进行检测。结果表明本法对羟基苯甲酸甲酯钠和对羟基苯甲酸丙酯钠的回收率均良好，结果见表1。

2．7 样品分析 按测定项下的方法测定6批市售蛋白琥珀酸铁口服液制剂防腐剂，按标准曲线法计算各组份的含量。结果见表2，典型的样品色谱图见图1。

表1 回收率试验结果(n=9)

表2 样品测定结果

3 讨论

在本方法研究中，为了使杂质及降解产物与主成分的分离度满足含量测定的要求，选择适合的流动相组成是十分必要。我们对流动相进行了筛选，流动相筛选试验结果见表3。

当流动相的比例为乙腈∶水=30∶70，但对羟基苯甲酸丙酯钠的保留时间达36 min，考虑到蛋白琥珀酸铁在乙腈中溶解性较差，所以在不改变比例的情形下，将柱温设为40℃，流速增大为1．2mL·min－1，但对羟基苯甲酸丙酯钠的保留时间仍较长，为28 min。当乙腈比例为40%，保留时间适中，峰形较好，分离度合格，并且制剂供试品溶液与此流动相是互溶的。综合考虑，我们选定乙腈∶水=40∶60，柱温 40℃，流速 1．0 mL·min－1的条件作为测定的色谱条件。

表3 流动相筛选试验结果

本文对多批市售的蛋白琥珀酸铁口服溶液的防腐剂进行监测，确定对羟苯甲酸甲酯钠和对羟苯苯甲酸丙酯钠在3 g·L－1和1 g·L－1左右，对该制剂的仿制有较强的借鉴意义。蛋白琥珀酸铁口服溶液在缺铁性贫血的儿童中有广泛的应用［7－8］，因此对其中的防腐剂的质量控制应当更加严格［9－10］。本方法有较好的分离度、精密度和重现性，可用于抗贫血新药蛋白琥珀酸铁口服溶液的防腐剂的定量分析，结果准确可靠。

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