微柱凝胶法在O型血孕妇产前IgG抗体效价检测中的应用

王萍

(太原市第八人民医院，山西太原 030012)

·临床医学·

微柱凝胶法在O型血孕妇产前IgG抗体效价检测中的应用

王萍

(太原市第八人民医院，山西太原 030012)

目的:总结微柱凝胶法在O型血孕妇产前IgG抗体效价检测中的临床应用。方法:从太原市第八人民医院接诊的O型血孕妇中选取139例作为本次调查研究对象，使用微柱凝胶法检测IgG抗体效价;后对该批患者使用传统抗人球蛋白法检测，对比不同检测方法的检测结果。结果:139例O型血孕妇采用微柱凝胶法检测IgG抗体效价，异常总人数为54例，占该组总人数的38.84%，均经病理证实，诊断准确率100%;而采用传统抗人球蛋白法检测IgG抗体效价，异常总人数为40例，占该组总人数的28.77%。O型血孕妇抗体效果不断升高的同时，发生新生儿溶血的几率更大。结论:微柱凝胶技术用于O型血孕妇产前IgG抗体效价检测，操作方便简单，可为新生儿溶血疾病的提早预防提供更多理论依据。

微柱凝胶法;O型血;孕妇;IgG抗体效价检测

新生儿溶血属于临床常见疾病，主因为母婴血型不合，即母亲体内与新生儿红细胞抗原不合的IgG性质的血型抗体进入到新生儿体内最终出现的同种被动免疫性疾病［1］，会造成胎儿早期流产，新生儿水肿、贫血、肝脾肿大等，威胁到婴儿生命。近几年，随着临床医疗技术的发展，微柱凝胶法在血型血清的检测中得到了广泛应用［2］，其能较准确的检测出新生儿溶血疾病，更利于早知道、早预防、早治疗。本文随机选取了139例O型血孕妇使用微柱凝胶法进行产前IgG抗体效价检测，最终结果汇报如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选择2014年2月～2015年9月太原市第八人民医院接诊的O型血孕妇139例作为本次产前IgG抗体效价检测对象，年龄21～40岁，平均(31.5±1.7)岁，孕周为17～37周，平均(30.1±1.3)周，夫妻血型为O-A组合50例、O-B组合48例、ABO组合41例;所有孕妇均无输血史，无其他严重并发症，无精神异常，均符合本次临床研究调查相关要求。

1.2 使用材料

微柱凝胶试剂为长春博迅生物技术有限公司生产的不完全抗体检测卡。抗人体球蛋白试剂由上海血液生物医药公司提供。0.2 mol/L巯基乙醇(2-Me)由长春博迅生物技术有限责任公司提供，微柱凝胶卡专用孵育器则由长春博德生物技术有限公司提供。

1.3 方法

传统抗人球蛋白法检测:按照《全国临床检验操作规程》第3版完成整个操作。

微柱凝胶法检测:先取200 μL待检血清与等量2-Me混合，再取6支10 mm×75 mm试管，分别编号为①-⑥，向第①管中添加适量PBS缓冲液150 μL，余下的5支试管则分别加入600 μL PBS缓冲液，并将已孵育好的血清与2-Me混合液从37℃水浴箱内取出，后取40 μL加入到第②管中，要从第②管内取600 μL加至第③管内，依次按照1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024的比例稀释，后将已稀释号的浓度不同的样品置于在Diana处理系统内，并向其中不断加入A/B标准红细胞，后打开电脑将微注凝胶Coombs卡编号，使其扫描记录到计算机处理系统中。机器自动加样，加样结束后，37℃孵育15 min左右，并按照4 000 r/min的转速离心约10 min，电脑自动判读并打印结果。

1.4 判定标准

经典抗人球蛋白法根据《全国临床检验操作规程》中的相关标准进行结果判定。而微柱凝胶抗人球蛋白法则根据公司提供的说明书完成结果判读。结果以显微镜观察到“1+”凝集的最高稀释度为抗体效价，并以1∶64效价作临床参考界值，IgG抗A(B)效价≥64判定为阳性。

1.5 统计学方法

本次检测结果采用SPSS 16.0统计学软件进行处理，计数资料以百分率表示，采用χ2检验进行比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 139例采用不同检测方法检测结果比较

139例O型血孕妇采用微柱凝胶法检测IgG抗体效价后结果表明，O-A组合的50例标本中IgG抗A异常结果为26例，占该组合总人数的52%;O-B组合的48例标本中IgG抗B异常结果为15例，占该组合总人数的31.25%;ABO组合的41例标本中IgG抗ABO异常结果为13例，占该组合总人数的31.7%，异常总人数为54例，占该组总人数的38.84%，后均经病理证实，诊断准确率100%。而采用传统抗人球蛋白法检测IgG抗体效价后结果表明，O-A组合的50例标本中IgG抗 A异常结果为 19例，占该组合总人数的30.38%，O-B组合的48例标本中IgG抗B异常结果为11例，占该组合总人数的22.91%，ABO组合的41例标本中IgG抗ABO异常结果为10例，占该组合总人数的24.39%;异常总人数为40例，占该组总人数的28.77%，诊断准确率为74.07%。可见，同样的139例患者采用不同检方法检测IgG抗体效价异常结果比较有差异(χ2=16.0，P＜0.05)，具有统计学意义。

2.2 139例O型血患者抗体效价与新生儿溶血发生率关系分析

139例采用微柱凝胶法检测的O型血孕妇中，抗A抗体效价在≤1∶32、1∶61、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024时，新生儿溶血发生率依次为 1(2%)、3 (11.53%)、4(15.38%)、5(19.23%)、6(23.07%)、7(26.92%);抗B抗体效价在≤1∶32、1∶61、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024时，新生儿溶血发生率依次为1 (2.08%)、1(2.08%)、2(4.16%)、2(4.16%)、3(6.25%)、6(12.5%);抗ABO抗体效价在≤1∶32、1∶61、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024时，新生儿溶血发生率依次为0(0%)、1(2.43%)、2(4.87%)、2(4.87%)、3 (7.31%)、5(12.19%)。从该结果可看出，在O型血孕妇抗体效果不断升高的同时，发生新生儿溶血的几率更大。由此可见，抗体效价检测在新生儿溶血的防治中意义重大。

3 讨论

随着医疗技术的发展，新生儿溶血病的诊出率逐日升高，主要因O型血孕妇血清内不仅有IgG血型抗体，还包括免疫性血型抗体，相对分子质量小，绝大部分孕妇含胎儿血量较少，仅为0.1～0.2 mL，虽然母体产生免疫性抗体，但极少引起新生儿溶血，因为母体抗体被胎儿血浆与组织内的血型物质相结合，避免了抗体对红细胞作用［3］。另外，胎儿细胞表层结合抗体数量相当少，基本不会引起明显溶血症状，仅表现出血型不合。但如果胎盘绒毛膜破损，一定量的胎儿红细胞将直接进入母体，会对母体造成极大刺激，母体会产生更多量的IgG血型抗体，透过胎盘进入胎儿循环，出现同种免疫反应，最终导致新生儿红细胞破坏所致的溶血［4］。孕妇产前做好IgG抗体效价检测能够尽早防治新生儿溶血，降低新生儿死亡率。临床O型血孕妇产前IgG抗体效价检测的方法较多，但不同检测方法最终的结果不同。

微柱凝集技术属于新兴的血型血清检测技术，主要是通过特定化学物质(如葡萄糖等)制作成微型凝胶柱，并利用凝胶分子筛本身作用来增强试验特异度与敏感度，纯度与浓度均较高，较容易捕获抗原。此外，微柱凝胶试验密度梯度液层能够洗涤红细胞，避免杂蛋白带来干扰，最终暴露出靶抗原，微小玻璃层能让凝集红细胞更容易判断，检测准确率更高［5］。该技术最早是由Lappierre博士发明［6］，通过临床应用不断改进与完善，现已是成熟的检测技术。而不少关于微柱凝胶技术用于孕妇产前ABO血型IgG抗体效价检验的文献资料［7］结果均表明，微柱凝胶技术有相当强的敏感性，更易于判读，更能保存，标准化程度更高。但在检验过程中发现，因受方法学等原因，在操作中血浆与红细胞二者的添加顺序，是使用生理盐水还是使用BPS液来完成血清稀释等试验方法学存在的差别等多种原因，反应中，血浆内有抗体成分，加入反应体系后更易分散于介质内，更易与后添加的红细胞快速结合，能够增强抗体检出率。本研究中也是先取患者血清，在添加2-Me，并以血清稀释度1∶64作临界值，若母亲血清内IgG型抗-A(抗-B)抗体效价≥1∶64，则认为该婴儿有患上新生儿溶血的可能，若抗体小家≥1∶128，则表明婴儿患上溶血病的几率相当高，若母亲血清内IgG型抗-A(抗-B)抗体效价≥1∶128，则表明极可能已患上了溶血病，以此类推，抗体效价比率越高，新生儿情况越不乐观，在此种预设下，采用微柱凝聚技术完成的O型血孕妇IgG抗体效价检测结果更准确，这也是本研究的重点所在。而本次研究将微柱凝集技术与传统抗人球蛋白法技术先后应用到相同的O型血孕妇IgG抗体效价检测中，结果表明:139例O型血孕妇采用微柱凝胶法检测IgG抗体效价，异常总人数为54例，占该组总人数的38.84%，后均经病理证实，诊断准确率100%;而采用传统抗人球蛋白法检测IgG抗体效价，异常总人数为40例，占该组总人数的28.77%。充分说明微柱凝胶法优于传统法，且已完全克服了传统试管法使用中不得不多次洗涤细胞所致的繁琐、费时等不足。研究中也发现O型血孕妇抗体效价不断升高的同时，发生新生儿溶血的几率更大。从这些数据值不难看出，微柱凝胶技术敏感性更高，结果更准确，且操作简单、方便，能够准确评估出胎儿妊娠期免疫性溶血病发生几率。不过在研究也发现，新生儿溶血发生也并非仅与母体血清内IgG抗A(B)效价相关，还会受到IgG亚类、胎儿红细胞抗原强弱以及胎盘IgG抗体等多因素的影响，若IgG抗体类别属于IgG2或IgG4，基本不会发生新生儿溶血，但如已结合IgG1或IgG3，则极容易发生新生儿溶血。因此，临床医生需高度重视夫妇血型不合的孕妇产前IgG抗A(B)效价检测工作，一旦发现IgG抗体效价偏高人群，需给予全程动态检测，并及时采取可行防治措施，将损害程度降至最低，最终实现“优生优育”目标。

［1］ 张建平，苏良香.微柱凝胶法检测O型血孕妇血清IgG抗A(B)效价的应用评价［J］.国际检验医学杂志，2014，22(19):2694-2696.

［2］ 张 莹，王晓岚，彭群新，等.微柱凝胶法与Coombs试验检测孕妇血清IgG抗A(B)效价的比较［J］.临床检验杂志，2010，18 (6):481.

［3］ 管 政，张 军，陈 丽，等.3种微柱凝胶抗人球蛋自片在检测孕妇IgG血型抗体效价中的应用比较［J］.蚌埠医学院学报，2011，36(8):872-877.

［4］ 李凌波，王冬倩，陈云声，等.国产微柱凝胶免疫检测试剂片检测孕妇IgG血型抗体效价的实验研究［J］.中国免疫学杂志，2008，24(12):1138.

［5］ 谭晓霞，蓝海鹰，徐晓红.孕妇血清微柱凝胶法检测IgG抗体效价与新生儿溶血病关系的Meta分析［J］.中国输血杂志，2011，8 (11):1124-1125.

［6］ 胡彩虹，胡千红.723例O型血孕妇产前IgG抗－A(B)效价对新生儿红细胞致敏的研究［J］.中国优生与遗传杂志，2012，17(2): 86-87.

［7］ 郑 萍，蔡 莉，何其瑞，等.与丈夫血型不合O型和RhD阴性孕妇产前IgG抗体检测结果分析［J］.中华实用诊断与治疗杂志，2011，24(9):897-898.

本文编辑:王 霞

The Application of Micro Column Gel Method on the Detection of IgG Antibody Titer in Type O Blood

WANG Ping
(The Eighth People＇s Hospital of Taiyuan City，Taiyuan 030012，Shanxi，China)

Objective:To summarize the clinical application of micro column gel method in the detection of IgG antibody titer in type O blood.Method:139 cases of pregnant women with type O blood from the obstetrics and gynecology hospital admissions were randomly selected as the research object，who were applied by micro column gel method in detection of IgG antibody titer.Then the same group of patients using traditional anti human globulin was detected，compared with the final detection results.Results:139 patients with type O blood were detected by using micro column gel method.The total number with unusual symptom was 54，which was the total number of 38.84%.The diagnostic accuracy was 100%;the total number with unusual symptom of IgG antibody among the patients detected by traditional anti human globulin was 40，which was the total number of 28.77%.The effect of pregnant women with type O blood was increasing，while the occurrence of neonatal hemolysis is more higher.Conclusion:The micro column gel technique is convenient for the detection of IgG antibody titer in the type O blood pregnant women.It can provide more theoretical basis for early prevention of hemolytic disease of the newborn.

micro column gel method;type O blood;pregnant women;IgG antibody titer detection

R446.6

A

1671-0126(2015)06-0001-03

王 萍，女，主管检验师，从事临床检验工作