烟草白绢病病原鉴定及生物学特性

过赋文，张绍升

(1.福建出入境检验检疫局武夷山办事处，福建武夷山 354300；2.福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福建福州 350008)



烟草白绢病病原鉴定及生物学特性

过赋文1，张绍升2*

(1.福建出入境检验检疫局武夷山办事处，福建武夷山 354300；2.福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福建福州 350008)

[目的]明确烟草白绢病病原并了解其生物学特性。[方法]在实验室条件下研究烟草白绢病菌的形态特征和生物学特性。[结果]引起烟草白绢病的病原菌为齐整小核菌(SclerotiumrolfsiiSacc.)；该菌的生长温度范围为10～38 ℃，最适温度为34 ℃；生长的pH范围为4～11，最适pH为8；该菌在NaNO2培养基上不能生长；紫外光照对白绢菌丝生长有一定的抑制作用，随着紫外光照时间的延长，白绢菌形成的菌核数量减少。[结论]试验结果为烟草白绢病的防治提供了参考。

烟草白绢病；齐整小核菌；生物学特性

烟草白绢病又称白腐病、南方疫病[1-2]，Rolfs在1892年首次报道了番茄上的白绢病，属于烟草次要病害，但高温高湿条件下会造成该病害的暴发。因此，了解并防治白绢病十分必要。为此，笔者在实验室条件下研究了烟草白绢病菌的形态特征和生物学特性，以期为烟草白绢病的防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌。供试菌株是从福建松溪采集的病株上分离得到。

1.1.2

供试培养基。PSA培养基：马铃薯50 g，蔗糖30 g，琼脂17 g，蒸馏水1 000 ml；烟草叶片汁：烟草叶片50 g，蔗糖50 g，琼脂17 g，蒸馏水1 000 ml；蔗糖培养基：蔗糖30 g，琼脂17 g，蒸馏水1 000 ml；葡萄糖培养基：葡萄糖30 g，琼脂17 g，蒸馏水1 000 ml；酒石酸钠培养基：酒石酸钠30 g，琼脂17 g，蒸馏水1 000 ml；NaNO3培养基：NaNO32 g，琼脂17 g，蒸馏水1 000 ml；NaNO2培养基：NaNO22 g，琼脂17 g，蒸馏水1 000 ml；NH3H2PO4培养基：NH3H2PO42 g，琼脂17 g，蒸馏水1 000 ml。上述培养基在灭菌前调至pH 7.0，121 ℃灭菌20 min。

1.2 方法

1.2.1 病原菌形态及培养性状。 将分离的菌株用直径为5 mm的灭菌打孔器在菌落边缘打取菌饼，接于直径为9 cm的含15 ml PSA的培养皿中央，放入24 ℃恒温箱中培养，每天观察记录其培养性状。

1.2.2 致病性测定。在PSA平板上打取直径为5 mm的菌丝块，选取20株长势一致的健康烟草植株，用75%乙醇对茎部表面消毒后，用无菌水冲洗干净，然后将菌碟接种在茎部，用不接菌的菌碟接种另外20株作为对照。将上述处理置于光照培养室25 ℃下培养，每天适当浇水，保证其发病条件。接种后第3天开始观察发病情况。

1.2.3 烟草白绢病菌的生物学特性测定。

1.2.3.1 温度对烟草白绢病菌生长的影响。处理温度为8～40 ℃，梯度为2 ℃。烟草白绢病菌在PSA 平板上培养3 d，用直径为5 mm的灭菌打孔器在菌落边缘打取菌饼，接于直径为9 cm含15 ml PSA的培养皿中央，放入恒温箱中培养3 d，测量菌落直径，每处理3次重复。

1.2.3.2 pH对烟草白绢病菌生长的影响。用1 mol/L NaOH和1 mol/L HCl 将灭菌的PSA培养基分别调配成以下8个不同的pH：3、4、5、6、7、8、9、10，取15 ml倒入培养皿中，用直径为5 mm的灭菌打孔器在菌落边缘打取菌饼，将菌饼移植到不同pH的PSA平板上，置于24 ℃恒温培养箱中培养3 d，测量菌落直径，每处理3次重复。

1.2.3.3 培养基对烟草白绢病菌生长的影响。采用“1.1.2”8种培养基，用直径为5 mm的灭菌打孔器在菌落边缘打取菌饼，将菌饼移植到不同培养基平板上，置于24 ℃恒温培养箱中培养 3 d，十字交叉法测量菌落直径，每处理3次重复。

1.2.3.4 紫外光照对白绢菌丝生长的影响。挑取大小一致的菌核接种在PSA平板上，每个平板接种1粒菌核，用紫外灯光对菌核分别照射5、10、15 min，距离50 cm，将其和未经紫外灯照的对照组置于28 ℃恒温下培养，每处理3次重复。

1.2.3.5 不同碳氮比对白绢菌丝生长的影响。分别以葡萄糖和NaNO3作为碳、氮源，设C/N为1∶1、5∶1、10∶1、20∶1、30∶1、60∶1，再加入不含碳氮源基础培养基(Czapek培养基)；以单纯的基础培养基作为对照，每培养皿放入15 ml上述培养基，中央接直径为5 mm的白绢菌饼，28 ℃下培养3 d，每处理3次重复。

1.2.3.6 紫外光照对病原菌生长的影响。将菌碟接种在PSA平板上，在距离紫外灯(20 W)30 cm处分别照射5、10、15 min，以不经紫外照射的菌碟作为对照，置于25 ℃恒温培养，观察紫外线对菌丝的杀伤作用。

1.3 数据处理

数据采用DPS2000软件进行处理，用Microsoft Excel 进行统计分析，利用Duncan’s新复极差法进行差异显著性分析。

2 结果与分析

2.1 白绢病病原菌形态及培养性状

菌落初期为白色，圆形或近圆形；菌丝无色透明，有隔膜，呈放射状生长，较稀疏，有分枝，在分枝的基部有明显缢缩，菌丝为双核菌丝，并且有锁状联合现象，直径；菌核开始为小白点，后逐渐变大，颜色先变为淡黄色，最后逐渐转为茶褐色，如油菜籽状，菌核间偶尔会聚合，多为2个连接，菌核球形、近球形或不规则形，直径为0.75～2.00 mm，平均为0.98 mm(图1)。

2.2 白绢病菌致病性

病部初现褐色病斑，接着在病部长出大量白色绢丝状菌丝体包裹茎基部，后病部产生许多油菜籽状小菌核，初为白色，后逐渐变为茶褐色。病株随后萎蔫，严重的迅速黄化枯死(图2)。取病组织分离培养，镜检病原菌，其形态特征和田间病株上的病原菌一致。对照烟株均未发病。结果表明，引起烟草白绢病的病原菌为齐整小核菌(SclerotiunmrolfsiiSacc.)[3]。

2.3 白绢病菌的生物学特性2.3.1

温度对白绢病菌丝生长的影响。结果表明(图3)，白绢菌菌丝生长温度范围为8～38 ℃，最适宜温度为34 ℃，40 ℃以上菌丝停止生长。

2.3.2 pH对烟草白绢病菌生长的影响。结果表明(图4)，烟草白绢菌在pH 4.0～11.0时均能生长，pH 7.0时生长最快，说明其菌丝生长对环境的酸碱度要求不高，对碱性环境有较强的适应性。

2.3.3 不同培养基对烟草白绢病菌生长的影响。由表1可知，PSA培养基培养的菌落直径最大，产生的菌核数量最多，而在NaNO2培养基上不能生长。

2.3.4 紫外光照对白绢菌核生长的影响。由表2可知，紫外光照对白绢菌核抑制作用不明显，但是随着紫外光照时间

表1 培养基对白绢病菌菌丝生长的影响

注：菌落直径为平均值±标准偏差；菌丝疏密中“+++”表示密，“++”表示较密，“+”表示稀疏；菌核数中“+++”表示产生20个菌核以上，“++”表示产生10～20个菌核，“+”表示产生1～10个菌核，“0”表示没有产生菌核；同列数据后不同小写字母表示不同处理间在0.05水平差异显著。

表2 紫外光照对白绢病菌菌丝生长的影响

注：同列数据后不同小写字母表示不同处理间在0.05水平差异显著。

的增加，形成的菌核数量减少。

2.3.5 不同碳氮比对白绢菌丝生长的影响。由表3可知，不同C/N对白绢病菌菌丝生长影响差异显著。在C/N为20∶1时白绢菌生长最快，并且菌丝较粗，产生的菌核数也更多，其次为10∶1、5∶1、60∶1、1∶1和基础培养基上生长较差，并且5∶1、1∶1和基础培养基上未形成菌核。

表3 不同碳氮比(C/N)对白绢菌菌丝生长的影响

注：菌落直径为平均值±标准偏差；菌丝疏密中“+++”表示密，“++”表示较密，“+”表示稀疏；菌核数中“+++”表示产生20个菌核以上，“++”表示产生10～20个菌核，“+”表示产生1～10个菌核，“0”表示没有产生菌核；同列数据后不同小写字母表示不同处理间在0.05水平差异显著。

2.3.6 光照对病原菌生长的影响。由表4可知，黑暗条件下有利于白绢菌菌丝的生长，但是不利于白绢菌核的形成，而光照对其菌丝生长的影响不明显，但是有利于菌核的形成。

表4 光照对白绢病菌菌丝生长的影响

注：菌落直径为平均值±标准偏差；“+++”表示产生20个菌核以上，“++”表示产生10～20个菌核，“+”表示产生1～10个菌核；同列数据后不同小写字母表示不同处理间在0.05水平差异显著。

3 结论与讨论

该研究表明，烟草白绢病最适宜的发病温度为30～36 ℃，随着温度的降低其发生的强度也降低，这与在田间高温时发病严重的情况相符；白绢菌在pH4.00～11.00的范围内都能生长，这与前人报道的病菌只能在pH4.05～8.97范围内生长有差异[4]，说明其菌丝生长对环境pH条件要求不高，对碱性环境有较强的适应性；烟草白绢病菌菌丝在适宜的环境条件下生长很快，并且会形成抗逆性很强的菌核，难以防治，在生产上应以预防为主，可在整地前喷施36%甲醛200倍稀释液，后期用退菌特对其进行防治[5]。

[1] 朱贤朝．中国烟草病害[M]．北京：中国农业出版社，2001．

[2] 谈文，吴元华．烟草病理学[M]．北京：中国农业出版社，2003．

[3] 魏景超．真菌鉴定手册[M]．上海：上海科学技术出版社，1979．

[4] 史应武，陈勇，董新平，等．新疆葡萄白绢病病原菌的分离鉴定[J]．中国果树，2004(5)：32-33．

[5] 李阳，金薇，黄俊斌．草莓白绢病的病原鉴定及生物学特性[J]．华中农业大学学报，2005，24(3)：250-253．

Identification and Biological Characters of Tobacco Southern Stem

GUO Fu-wen1, ZHANG Shao-sheng2*

(1. Wuyishan Office of Fujian Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau of P.R.C, Wuyishan, Fujian 354300; 2. Education Ministry Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350008)

[Objective] The aim was to clear pathogen of tobacco southern stem and its biological characteristics. [Method] We studied morphological characteristics and biological characteristics of tobacco southern stem under laboratory conditions. [Result] The pathogen of tobacco southern stem wasSclerotiumrolfsiiSacc.. Biological characteristic results ofSclerotiumrolfsiiSacc. showed that: 10-38 ℃ was fit for the mycelia growth, but the optimum temperature was 34 ℃; pH4-11 was fit for the growth ofSclerotiumrolfsiiSacc., and the optimum pH was 8; theSclerotiumrolfsiiSacc. Couldn’t grow on NaNO2medium; the UV irradiation had certain inhibitory effect on the mycelial growth ofSclerotiumrolfsiiSacc., increasing the time of UV irradiation could reduce the formation of sclerotium ofSclerotiumrolfsiiSacc. [Conclusion] The results provide reference for the control of tobacco southern stem.

Tobacco southern stem;SclerotiumrolfsiiSacc.; Biological characters

过赋文(1986-)，男，江西铅山人，农艺师，硕士，从事植物真菌病害研究。*通讯作者，教授，博士生导师，从事植物线虫病害研究。

2015-11-11

S 432.4+4

A

0517-6611(2015)35-184-03