黄藤素对高脂血症模型小鼠降血脂作用研究*

王维丽，王 磊，柳丽松，颜汉文，曾文彦，段小花

(云南中医学院，云南 昆明 650500)

黄藤素对高脂血症模型小鼠降血脂作用研究*

王维丽，王 磊，柳丽松，颜汉文，曾文彦，段小花△

(云南中医学院，云南 昆明 650500)

目的 研究黄藤素对实验性高脂血症小鼠血脂的影响。方法 复制小鼠高脂血症模型，观察辛伐他丁(20mg/kg)，黄藤素高剂量组(0.4g/kg)、黄藤素低剂量组(0.1g/kg)对小鼠高脂血症的影响。观察小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平变化。结果 与高脂血症模型组小鼠比较，黄藤素高、低剂量组小鼠血清TG水平显著降低(P<0.05)。结论 黄藤素具有一定降低实验性高脂血症模型小鼠甘油三酯(TG)的作用。

黄藤素；高脂血症；降血脂

黄藤素是防己科植物黄藤(Fibraurea recisa pierre)干燥藤茎中提取得到的黄色结晶性生物碱[1-3]。也称为巴马汀(Berbericinine)，其在黄藤根和茎中含量较高[4，5]。经过现代药理学研究证明，黄藤主要成分为异喹啉类生物碱：黄藤素、药根碱等[6]。《本草纲目》记载：“黄藤生岭南，状若防己，俚人常服此藤，纵饮食有毒，亦自然不发，气味甘苦平无毒”。现代药理研究证实：黄藤素具有增强白细胞吞噬能力的作用，对多种革兰阳性和阴性菌有抑制作用，尤其抗真菌作用佳[7]。此外实验表明：黄藤素腹腔注射能增强大鼠非特异性免疫、细胞免疫及体液免疫功能[8，9]。临床主要用于治疗妇科炎症、菌痢、肠炎、 呼吸道及泌尿道感染、外科感染、眼结膜炎等症[9，10]。黄藤又称大黄藤、黄连藤等，分布于滇南的红河州、普洱市、西双版纳州等地，生长于海拔 180 ～ 1000m的热带、亚热带山野沟谷，植物资源以屏边县、绿春县、金平县及河口县较多[11]。黄藤也是云南瑶、苗、壮等少数民族应用的植物药，苗族称“满格朗”，瑶族称“汪当”，壮族称“格嘎亨”，具有清热解毒的功效[12]。黄藤秋、冬二季采收，切段，晒干，具有清热解毒，利尿通便、消炎功效，临床上用于治饮食中毒，痢疾，传染性肝炎，疮痈，赤眼，咽喉肿痛等症[13，14]。通过搜索文献发现，未见黄藤素降血脂的报道研究，本实验通过建立实验性高脂血症小鼠模型，研究黄藤素对高脂血症小鼠血脂的影响，为其进一步临床应用、扩大临床应用范围提供实验依据。

1 材料与仪器

1.1 动物 健康ICR小鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g，购买自北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证：SCXK(京)2014-0004，合格证号：11401300025448；每日给予小鼠标准食物和饮用水各两次，保持光照和避光循环饲养(12/12h)；实验开始前保持室内饲养1周。

1.2 药品 实验样品为黄藤素片，使用时用0.5%CMC-Na溶液配制成相应的混悬液；辛伐他丁片(20130703)。

1.3 试剂 羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，化学纯；总胆固醇测定试盒TC(南京建成生物工程研究所，批号：141731)；甘油三酯测定试剂盒TG(南京建成生物工程研究所，批号：146761)；高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒 HDL-C(南京建成生物工程研究所，批号：140551)；低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒 LDL-C(南京建成生物工程研究所，批号：140571)；蛋黄乳液(75%)。

1.4 仪器 酶标仪(Infinite M200 PRO)：瑞士Tecan公司；分析天平(型号：AL104METTLER TOLEDO，Switzerland，0.0001g；CF16 RXⅡseries高速低温离心机，HITACHI公司；DY89-Ⅱ型电动玻璃匀浆机，宁波新芝生物科技股份有限公司。

2 方法

2.1 试剂剂量设置与配制 蛋黄乳液的配制：取1～2d的新鲜鸡蛋，除去蛋清，用消毒生理盐水搅拌混匀，配成75%的蛋黄乳液备用，4 ℃ 贮藏备用[15]。

黄藤素配置：黄藤素片的用量为1次2～4片，3次/ d，每片0.1g，则人每天最大用量为1.2 g，人体重以60kg计，则人用最大剂量为0.02 g/ kg；小鼠等效剂量以10倍计算(按体表面积换算)，则小鼠剂量为 0.2 g/kg，以此剂量作为中剂量，则高、低剂量分别为0.4 g /kg、0.1 g/ kg。使用时用0.5% CMC-Na溶液配制成相应的混悬液。

动物注射蛋黄乳后最佳取血点的确认：取体重(20±2)g的ICR小鼠30只，按体重与性别随机分到5组，每组6只，正常对照组腹腔注射生理盐水(0.5mL/只)，其余4组腹腔注射75%蛋黄乳(0.5mL/只)，每组分别于注射后0，6，12，18，24，48h后小鼠剪尾尖取血，离心后测定血清胆固醇，找寻小鼠注射蛋黄乳液后胆固醇升高到极值所对应的时间点[16]。

2.2 高脂血症模型复制 参考文献方法[17，18]，末次给药后1h，除正常对照组腹腔注射生理盐水(0.5mL/只)外，其余6组腹腔注射75%蛋黄乳(0.5mL/只)，注射后雄性小鼠20h或者雌性小鼠5h处，摘取眼球取血，取血前禁食不禁水12h。

2.3 动物分组与给药 取100只(体质量18-22 g，雌雄兼用)健康ICR鼠，适应性喂养1周后，随机分成5组。实验前1d按体重随机分为5组，分别为：正常对照组、模型对照组、阳性对照组(辛伐他汀片20mg/kg)、黄藤素高、低剂量组，每组20只。每只小鼠按0.2ml/10g体积灌胃给药，正常对照组和模型组灌胃给予等体积含0.5% CMC-Na 溶液的蒸馏水；给药组：灌胃给予黄藤素高、低剂量，给药前禁食不禁水12h，连续给药7d。

2.4 指标检测

2.4.1 一般情况 实验期间每天称体重，观察小鼠食欲行为、粪便、毛发及动物死亡情况，做好记录，实验结束时处死动物后称量体重。

2.4.2 血清生化指标 末次给药后1h，小鼠摘取眼球取血，以3600r/min离心10min分离血清，离心温度设置为4℃，样本放置于4～8℃可稳定7d，-20℃可稳定1个月。按总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒说明书，依次测定血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量，做好记录。

3 结果

黄藤素对高脂血症模型小鼠血脂的影响，见表1。由表1可见，模型组与正常组相比较，模型组小鼠血清的TC、TG、LDL-C浓度均显著高于正常组(P<0.05)，HDL-C浓度显著降低(P<0.05)，说明高脂血症小鼠模型复制成功。与模型组比较，黄藤素高、低剂量组、阳性组血清TG浓度水平显著降低(P<0.05)。

表1 黄藤素对蛋黄乳剂致小鼠高脂血症TC、TG、LDL-C、HDL-C含量的影响

注：与正常组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05；黄藤素高、低剂量组分别简称为黄高组、黄低组。

4 讨论

高脂血症是一种常见病、多发病，主要是指人体脂质代谢障碍导致的血浆胆固醇、甘油三酯等血脂水平的异常升高的一种代谢性疾病[19]。高脂血症是遗传基因与外界环境共同作用的结果，对人类身体健康危害严重，血脂包括血浆胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇，高脂血症又分为高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高脂血症和低高密度脂蛋白血症[20]。高脂血症是引发和加重动脉粥样硬化的病理基础，是导致冠心病、心绞痛、心肌梗死、脑梗死、肾损害等动脉栓塞性疾病的独立危害因素[21]。血脂过高的原因是由于进食含脂肪和胆固醇类食物过多，脂类代谢紊乱，或因脂类产生过多或因其降解或转运发生障碍都可造成高脂血症。血脂是动脉粥样硬化(AS)形成的基础，血脂代谢紊乱是AS形成的主要危险因素之一，特别是TC及LDL-C水平增高是致AS的危险指标，血中HDL-C水平与冠心病发病和AS成负相关[22]。近年来，中药降血脂研究不断深入，发现中药对高脂血症有作用，且能防治动脉粥样硬化的作用，成为当前降血脂药物研究的热点。

本实验以蛋黄乳剂建立实验性高脂血症小鼠模型，研究黄藤素对血脂的影响。结果表明，黄藤素能降低高脂血症小鼠血清中TG，这对于调节血脂异常，防止AS起到一定作用。血浆中乳糜微粒(CM)，极低密度脂蛋白(VLDL)，这两类脂蛋白统称为富含甘油三酯的脂蛋白，也就是说，血浆甘油三酯浓度升高实际上是反映CM和(或)VLDL浓度升高，凡引起血浆中CM和(或)VLDL升高的原因均可导致高甘油三酯血症[23]。近年来，大量流行病学调查研究表明，甘油三酯是冠心病、动脉粥样硬化的独立危险因素，同时还有促动脉粥样硬化斑块破裂的危险[24，25]。黄藤素高、低剂量组给药后，小鼠血清TG有显著性降低，说明黄藤素具有降低TG的作用。在中老年人群中，血清甘油三酯升高是较为常见的现象，血清甘油三酯升高是冠心病的重要危险因素，对于防止缺血性心脏病发作起到一定的作用。黄藤素降低TG的机制有待于进一步实验研究。

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国家中医药管理局十二五重点建设学科“傣药学”；云南省卫生厅民族医药文献整理及中药民族药院内制剂研发项目(NO：KY14)；云南中医学院校级大学生创新创业训练计划项目(NO：00370101708)

王维丽，在读研究生，中药药理与应用研究，E-mail：191045876@qq.com

△通信作者：段小花，医学硕士，讲师，从事中药药理与应用研究，Tel：0871-65919481，E-mail：y.zdxh@163.com

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