伤风感冒颗粒质量标准研究

李立纪，张风雷，邹雁宁，李秀芳

(1.云南省昆明市医学科学研究所，云南 昆明 650011 2.云南中医学院，云南 昆明 650500)

伤风感冒颗粒质量标准研究

李立纪1，张风雷1，邹雁宁1，李秀芳2

(1.云南省昆明市医学科学研究所，云南 昆明 650011 2.云南中医学院，云南 昆明 650500)

目的 建立伤风感冒颗粒的质量控制标准。方法 采用HPLC测定苦杏仁苷的含量，薄层色谱法TLC鉴别方中的白芷、浙贝母。结果 定量方法简单、准确。苦杏仁苷在0.072～5μg呈良好的线性关系，回归方程：y=0.8824X+1.0526，R2=1；苦杏仁苷平均回收率101.7%，RSD 2.85%(n=6)。TLC鉴别专属性强，无干扰。结论 本质量标准确、可有效的控制伤风感冒颗粒的质量。

风寒感冒颗粒；HPLC，TLC；质量标准

伤风感冒颗粒由白芷、桔梗、浙贝母、苦杏仁、防风、陈皮、羌活、紫苏叶、荆芥、薄荷油等10味中药组成。主要功效散风寒，发微汗。用于伤风流涕，咳嗽，鼻塞，头痛症状。本方证乃由外感风寒所致。治宜散风寒、发微汗。方中重用防风祛风解表，胜湿止痛；羌活解表散寒，祛风胜湿；还重用荆芥子祛风解表共为君药。浙贝母清热化痰，散结消痛；桔梗宣肺解毒疗咽；紫苏叶降气化痰，止咳平喘；苦杏仁止咳平喘共为臣药。陈皮理气健脾，燥湿化痰；白芷祛风胜湿；薄荷油疏散风热，舒肝行气，清理头目共为佐使药。全药合用，可共取散风寒，解表发微汗，利咽之功效。

原工艺剂型为冲剂，每块含糖量高达9 g，不利于药效的发挥，在原工艺的基础上，探索低糖颗粒工艺，共生产9个批次。工艺稳定，颗粒成型好，在此基础上，对其质量控制进行研究，伤风感冒颗粒为已有国家标准药品(国药准字Z22023527)的注册[1]，原标准项下只有冲剂通则检查项，为了保证药品质量与疗效，特制定此标准。本品为10味药的复方制剂，其中5味药材仅提取挥发油，含量测定较为困难，根据处方组成和用量、对照品的提供情况及相关研究资料，选择苦杏仁有效成分苦杏仁苷进行了测定作为含量测定指标。欧前胡素、贝母甲素为定性检测指标。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：Agilent1100系列，包括G1314A紫外检测器、G1316A柱温箱、G1313A自动进样器、G1311A四元梯度泵、G1322A真空脱气机、Agilent ChemStation工作站，色谱柱：Zorbax LiChrospher 100 RP-18(4.6×250mm，5μm)，岛津2400紫外分光光度仪。

高纯水采用蒸馏水过MILLIPORE Simplicity 185纯水机制备；甲醇(HPLC)，乙醇(AR)。苦杏仁苷、欧前胡素、贝母甲素由中国药品生物制品检定所购得。批号：110820-200511、110826-200409。

伤风感冒颗粒、伤风感冒颗粒空白阴性试样：自制。

2 化学成分的TLC鉴定

防风、陈皮、羌活、紫苏叶、荆芥仅提取挥发油，桔梗没有对照药材，苦杏仁苷做定量检测，暂不做定性鉴别。白芷、桔梗、浙贝母、苦杏仁回流提取，本标准规定了白芷、浙贝母薄层鉴别。

2.1 供试品及对照品溶液的鉴定

2.1.1 供试品溶液的制备 处方中10味药，防风、陈皮、羌活、紫苏叶、荆芥分别提取挥发油，混合，备用；白芷与桔梗用75%乙醇加热回流提取2次，合并提取液，滤过；浙贝母与苦杏仁，依次用95%乙醇、50%乙醇加热回流各1次，合并提取液，滤过；以上滤液，分别回收乙醇，并减压浓缩至干，然后混合粉碎成细粉，加薄荷油与备用的混合挥发油，再加蔗糖适量，拌匀，制粒，干燥即得。

2.1.2 供试药的阴性 按2.1.1项下分别除去白芷、浙贝母、苦杏仁制得3个阴性对照。

2.1.3 对照品溶液的制备 分别取欧前胡素、贝母甲素对照品各1mg，分别加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品。

2.2 伤风颗粒的TLC鉴定

2.2.1 白芷的薄层鉴别 取3批次样品、阴性对照各15 g，加50 mL甲醇，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加1 mL水溶解。将3批次样品、阴性对照、对照品欧前胡素点于同于薄层板上，展开剂用石油醚：乙酸乙酯(5∶1)分别试验。展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视，供试品与对照品相同位置上，显相同颜色的荧光斑点(见图1A)。斑点分离清晰，层析效果好，阴性对照无干扰，达到了薄层鉴别目的。

2.2.2 浙贝母的薄层 取白芷薄层鉴别项下的供试品溶液、阴性对照、及贝母甲素点于同一薄层板，展开剂氯仿∶甲醇∶氨水(10∶1∶饱和蒸气)，取出，晾干，喷以碘化铋钾溶液，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色斑点。经阴性对照试验及三批样品试验观察，斑点分离清晰，层析效果好，阴性对照无干扰，达到了薄层鉴别目的。(见图1B)。

图1 A.伤风颗粒中欧前胡素的TLC；B.伤风颗粒中贝母甲素的TLC

3 HPLC定量测定伤风颗粒中的苦杏仁苷

3.1 含量测定方法学考察

3.1.1 色谱条件色谱柱 Zorbax LiChrospher 100 RP-18(4.6×250 mm，5μm)，流动相甲醇∶水(20∶80)[2-3]；检测波长210 nm；流速1.0 mL/min，结果表明，在此条件下伤风颗粒中苦杏仁苷其他组分均能达到基线分离(见图2C)，根据样品的HPLC图谱，测量苦杏仁苷峰的保留时间、半峰宽等，计算色谱柱的理论板数均大于3000，苦杏仁苷峰计，理论板数应大于3000。

3.1.2 分别精密称取苦杏仁对照品1.80 mg，用1 mL甲醇溶解，置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

3.1.2 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1、2.5、5、10、15、20、25、30 μL按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值(Atm*s)为纵坐标，进样量(ng)为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，苦杏仁：y=0.8824X+1.0526，R2=1；结果表明苦杏仁进样量在0.072～5 μg范围内有良好的线性关系。

3.1.3 精密度考察 精密吸取上述2种对照品溶液，重复进样5次，苦杏仁苷5次测定值的相对标准偏差分别0.58%.

3.2 样品的测定

3.2.1 供试品溶液的制备 准确取1 g颗粒采用甲醇超声提取20 min，过滤，定容至25 mL，备用。过滤至清亮，最后用微孔滤膜(0.5 μm)滤过。用于高效液相分析，供试品中苦杏仁与杂质峰达到基线分离。

图2 对照品苦杏仁苷(A)，供试液(B)，阴性对照(C)

3.2.2 样品测定 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪进行测定，取2次测定的平均值作为结果。

3.2.3 重复性实验 精密称取顆粒1 g，共5份，按上述方法制成供试品溶液并进行测定，结果表明，苦杏仁5次测定值的RSD为0.9%。

3.2.4 加样回收率 分别精密称取已测知含量的样品1 g，6份，研细，精密称取，置具塞锥形瓶中，分别精密加入苦杏仁对照品6.6 mg(用甲醇水配制成0.66 mg/mL)，分别加入1.4、2.6、3.6 mL，再加入20 mL甲醇，以下按供试品溶液制备方法从，“超声处理……”起，同方法操作。计算回收率。

表1 苦杏仁苷回收率试验结果

3.2.5 样品含量测定 见表2。

表2 伤风颗粒样品测定结果

10批样品测定含量的平均值2.918(mg/g)，考虑不同植物来源含量的差异，及大规模生产提取率可能还会降低等因素，按10批平均值的80%计算为2.33(mg/g)，苦杏仁苷含量应不低于2.33(mg/g)。

4 结果与讨论

将伤风冲剂剂型该为颗粒剂型是在工艺、质量控制方面是可行，剂型改变后降低了患者的服糖量。有利于发挥药物的疗效。

方中重用防风、荆芥子祛风解表共为君药。但工艺只提取其挥发油，他们的指标成分无法检测。

本实验考察了不同溶剂的提取率，分别用丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇超声提取20min，丙酮、乙酸乙酯不能完全提取，乙醇提取杂质较甲醇少，但不能完全提取。甲醇提取最充分，选用甲醇为提取溶剂。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准(中药成方制剂第1册)[S].1998：45.

[2]中国药典[S].(一部)2005：144.

[3]胡爽，袁丹，刁桂芬，等.苦杏仁药材质量评研究[J].中国中药杂志，2002，27(10)：735.

李立纪(1976-)，男，云南，研究方向：中药药理

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2015-04-26)