颠倒散拆方对兔耳痤疮模型皮脂腺分泌及粉刺的影响*

唐 挺 贾 敏 文昌晖 胡文韬

贵阳中医学院第一附属医院皮肤科(贵阳 550002)

·实验研究·

颠倒散拆方对兔耳痤疮模型皮脂腺分泌及粉刺的影响*

唐 挺∆贾 敏 文昌晖 胡文韬

贵阳中医学院第一附属医院皮肤科(贵阳 550002)

目的：探寻一个治疗痤疮的不良反应少且疗效好的颠倒散的最佳组方比例。 方法：兔耳痤疮造模成功后，将32只白兔分为A、B、C、D 组，每组8只。其中A组给予颠倒散原方(大黄与硫磺比例为=1∶1)外搽；B组予改良颠倒散(大黄与硫磺比例为=1∶2)，C组予大黄与硫磺比例为=2∶1的颠倒散外搽。1d1次，连续2周。模型对照D组不接受任何处理。观察指标：治疗期间及治疗后观察粉刺数量、皮脂腺分泌量以及不良反应。结果：实验结束时，A、B、C三组的粉刺数量较治疗前均显著减少，且与模型对照D组比较，差异具有显著性。治疗1周和2周后，三组24h皮脂腺分泌量均较D组下降，而同时B组皮脂腺分泌总量最少，但发生红斑及表皮剥蚀的几率最高。结论：增加硫磺在颠倒散方中的比例(或降低大黄的比例)更能抑制皮脂的分泌，但不良反应相应增加；但降低硫磺的比例(或增加大黄的比例)可减少不良反应的发生，但不会降低其抗粉刺作用。

痤疮为皮肤科最常见的慢性炎症性毛囊皮脂腺疾病，80%～90%的青少年患过该病。由于好发于面部，易遗留色素沉着、囊肿或瘢痕，具有一定的损容性,可影响青少年的身心健康，应予重视。

颠倒散出自于《医宗金鉴·外科心法要诀》,是祖国医学治疗肺风粉刺(痤疮)、面油风(脂溢性皮炎)、酒渣鼻等皮肤病的经典外用制剂。验之临床[1-3]，疗效显著。但易出现接触性皮炎等不良反应。本研究拟将颠倒散的拆方后对兔痤疮模型进行在体实验，以探索一个疗效较好，同时不良反应最小的组方比例。现报道如下。

1 材 料 1.1 实验动物 实验用新西兰白兔，普通级，雌雄各半，每只体重2.0±0.2kg。由贵阳中医学院动物实验研究所提供。饲养环境：室温20～24℃，相对湿度50%～55%，通风，自由活动，自由摄水进食。

1.2 药品与试剂 2%煤焦油的配制：使用95%酒精将50%煤焦油加热搅拌、缓慢溶解，配制成2%煤焦油酒精溶液。 颠倒散的制备：我院药剂科负责加工。将制备的大黄粉与硫磺粉按比例(大黄∶硫磺1∶1与 1∶2以及 2∶1)提前配制成相应实验样品，每份500g。制作两枚圆形的印章，中央雕空，外缘留取一直径为2cm的规则连续性凸起外环。由美蓝注射液制作的印泥盒2个。吸脂膜：Mentholatum Acnes痤疮专用吸脂膜(8.1cm×5.3cm)。

1.3 仪 器 天津中医药大学药物研究所实验室提供：电子分析天平(METTLER TOLEDO)，精确度(1/100000g)；SONY(DSC-H20)Camera及Adobe Photo-shop CS4。

2 方 法 2.1 动物造模与分组 动物造模：适应性喂养一周后，参考Kligman痤疮造模方法[4]并改良如下：于每只白兔右耳内侧耳管开口处的中央区域选为造模区域，先用酒精棉球清除兔耳内侧皮脂，待完全干燥后将环形印章蘸取美蓝印泥后盖上印章，此直径为2cm的深蓝色环(如颜色淡化时应在相同部位补盖印章)内即为造模区域。待干燥后在环内均匀涂搽2%煤焦油，0.2mL/次，1d1次，连续14d，第15日观察评估造模是否成功：如果观察到造模区域角质较周边增厚，并有粉刺形成，则提示造模成功。

分组：将32只模型兔分为A、B、C、D组，每组8只，编号并用75%酒精清除兔耳内侧煤焦油残渣。

2.2 颠倒散干预方法 每日新鲜配制相应比例的颠倒散：取100g颠倒散样品置于配药皿中，缓慢滴入常温矿泉水，搅拌均匀致糊状，以挂在药皿外侧壁上(或涂抹在手臂上)不滴落为度。然后将调制好的大黄∶硫磺比例为1∶1的颠倒散用药匙均匀涂抹于A组兔耳粉刺区域；B组颠倒散比例为大黄∶硫磺=1∶2；C组为2∶1；D组不用药。1h后去除药物并用清水清除药物残渣。1d1次，连续2周。

2.3 观察指标与方法 粉刺区24h皮脂分泌量：提前准备清洁干燥安珀瓶并编号。用电子分析天平称取1张吸脂膜，记录重量后装入安珀瓶内立即盖上橡胶塞备用。造模第16日取出吸脂膜，对折后用拇指指腹适当力度按压在粉刺区域，轻柔按摩并移动吸脂膜位置吸取皮脂，持续1min后将吸脂膜装回瓶内，盖紧橡胶塞，在瓶上标记兔子编号，当日称取吸脂后的吸脂膜重量，减去吸脂膜原始重量之差值计为皮疹区每日皮脂分泌量。分别于造模成功并分组后次日、用药1周及2周各采标本一次，并于每次采集皮脂前一天使用酒精棉球清除皮疹区域表面皮脂。

皮疹区粉刺数量：分别于造模成功后、用药第15天,暴露、展平兔耳皮疹区，各拍照1次，用Adobe Photo-shop CS4辅助粉刺计数。

不良反应：每次用药后观察涂药区域是否出现红斑、肿胀、丘疹、水疱、糜烂、渗出、结痂、表皮剥蚀等皮肤损害以及其它与痤疮无关的皮疹，并记录出现、消失的时间以及皮疹数量。

3 结 果 3.1 正常兔耳外观 呈淡粉红色，质地柔软，光滑润泽,表面可见清晰的血管网,毛囊口大小均匀且排列整齐(见图1)。

3.2 造模改变 兔耳涂布煤焦油1周后皮肤粗糙且增厚，毛囊口逐渐扩张并轻度隆起，可见少量白头粉刺。2 周后,皮损区域厚度和硬度均增加，表面可见薄层淡黄褐色油腻性痂壳，酒精清洁后可见毛囊口明显扩张，其中央见白色米粒状粉刺凸出，带珍珠样光泽(见图2)。

3.3 药物对粉刺的影响 涂抹颠倒散2周后(见图3),实验组(A、B、C组)皮损变薄变软，毛囊口逐渐缩小；粉刺体积缩小，数量减少，并可见粉刺脱落后凹点状毛囊口，部分有轻微脱屑；模型组(D组)皮损区仍有不同程度增厚，表面粗糙，部分见点、片状黄褐色油腻性痂皮，质地稍变软；粉刺数量、毛囊口及粉刺体积较前稍改善(见图4)。

表1可见，治疗前各组粉刺数量差异无显著性(P>0.05)。治疗后2周总体粉刺计数均较治疗前显著减少(P<0.05)；而组间差异显著(P<0.05)，A、B、C组减少程度优于D组，但A、B、C组间无统计学差异(见表1)。

表1 干预前后粉刺数量变化情况

注：治疗前组间比较，F=0.305P=0.822；治疗2周后组间比较：F=3.189P=0.039；△与D组比较，P=0.021； ▲与D组比较，P=0.009；◇与D组比较，P=0.045；其余组间比较，P>0.05

3.4 药物干预对皮脂分泌情况的影响 兔耳外观：用药1周后,A、B、C组兔耳皮损区皮肤逐渐干燥、油腻感减轻。用药2周后,皮损区进一步干燥，油腻感减轻并同时见少量脱屑；D组皮损区皮肤稍干燥、油腻感稍减轻。

24h皮脂腺分泌量(μg)：经重复测量方差分析，Mauchly球形检验P<0.05,采用Greenhouse-Geisser检验：时间*分组(F=4.919,P=0.001),提示分组与时点间存在交互作用。时间(F=74.915,P=0.000),提示不同时点变化趋势有差异，由表2可看出：随治疗时间的延长，皮脂腺分泌量逐步减少。其中A、B、C组：用药前与治疗后1周、2周，差异均有显著性；而D组仅用药前与用药2周后有差异。分组(F=3.295，P=0.035)，提示不同组皮脂腺分泌量变化趋势有差异，而A、B、C组减少程度优于D组。用药后1、2周A、B、C组皮脂腺分泌量均低于模型组(D组)，提示试验组(即各比例颠倒散)均有显著抑制皮脂腺分泌的作用；而2周后B组显著低于A、C、D组，提示B组具有更显著的抑制皮脂腺分泌的作用。

表2 用药前、后各组24h皮脂腺分泌量

注：不同时点比较：A、B、C组：用药前VS用药后1周以及用药后1周 VS用药后2周，P均<0.05。但D组：用药前与用药后1周以及用药后1周与用药后2周比较，P均>0.05，但用药前与用药后2周比较,P<0.05。组间比较：用药后1周，D组与A、B、C组差异均有显著性(P<0.05)；其余组间无显著性差异。用药后2周:B组与A、C、D组差异均有显著性(P<0.05)；D组与A、B、C组差异均有显著性(P<0.05)；而A、C组间无显著差异(P>0.05)

3.5 皮肤对药物干预的不良反应 主要表现为红斑、脱屑及表皮剥蚀，其中B组发生率最高，其次是A组、C组，且组间差异均有显著性(P<0.05)。未观察到涂药区域出现肿胀、丘疹、水疱、糜烂、渗出等其它与痤疮无关的皮损。

表3 粉刺区出现不良反应情况 (n,%)

4 讨 论 痤疮为好发于青少年的常见皮肤病，可影响世界94%的人口,已成为全球第8大最常见的疾病[5]。由于该病好发于面部，易遗留色素沉着、囊肿或瘢痕，具有一定的损容性。故可导致焦虑、抑郁等而影响心理健康及自信心。

该病发病机制尚未完全明确，主要认为与毛囊皮脂腺角化异常、细菌感染、激素水平紊乱有关。治疗上以抗生素以及改善角化的药物为主，但抗生素耐药问题已被广泛关注，而韩国学者Moon[6]及香港Luk[7]报道分离于临床痤疮患者的痤疮丙酸杆菌的耐药率分别为36.7%和54.8%，且Luk还发现其耐药性与年龄及治疗持续的时间相关。随着抗生素耐药性的急剧增加，同时抗角化药维A酸类衍生物因其致畸等诸多不良反应又在一定程度上限制了临床应用范围，因此，我国学者一直致力于寻求、挖掘一种祖国医学中安全有效的痤疮用药。

颠倒散出自于《医宗金鉴·外科心法要诀》，由大黄粉及硫磺粉组成，组方比例为大黄∶硫磺=1∶1；验之临床，疗效确切，但笔者经过多年观察发现使用该药后易出现接触性皮炎，常表现为如面部灼热、刺痒、红斑水疱、渗出，干燥、紧绷、脱屑以及一过性色素沉着等不良反应，考虑与药物某成分或比例有关：由于硫磺有毒，对皮肤具有一定的刺激性；而通过适当缩小硫磺的比例后，经临床初步观察，不良反应有减少趋势。因此初步推测，改变颠倒散的组方比例可能影响其临床疗效(包括不良反应)。这使颠倒散的拆方研究：探索一个疗效最佳、同时不良反应最小的组方比例显得尤为必要。但鉴于临床安全性和医学伦理的考虑，我们利用兔痤疮模型进行了在体实验。

实验结果显示：颠倒散原方以及改变颠倒散中大黄与硫磺的比例(大黄∶硫磺分别调整为1∶2；2∶1)干预兔耳粉刺模型后，粉刺数量均较模型对照组明显减少。但提高硫磺、降低大黄在方中的比例后(大黄∶硫磺=1∶2)，兔耳粉刺模型皮脂腺分泌量显著减少，并低于颠倒原方组。然而，该比例在兔耳模型上更容易出现红斑及表皮剥蚀。相反，降低硫磺、提高大黄比例(大黄∶硫磺=2∶1)组方的红斑及表皮剥蚀发生率显著低于高比例组(大黄∶硫磺=1∶2)，其对皮肤的刺激反应明显减少，甚至缺如，并低于颠倒散原方组。

结论：从该实验可以看出，在抗兔耳粉刺作用方面，改变颠倒散中大黄与硫磺的比例(大黄：硫磺分别调整为1∶2；2∶1)其疗效与原方相当；在抑制皮脂腺分泌方面，原方与各改良比例组方均有抑制作用，因此推导，颠倒散治疗痤疮的其中机理之一可能是通过抑制皮脂腺的分泌而达到治疗作用。同时这可能是临床应用颠倒散后，面部常出现干燥、紧绷及脱屑的原因之一。而提高硫磺、降低大黄的比例后(大黄∶硫磺=1∶2)，较原方抑制皮脂腺的分泌作用更强，但同时皮肤不良反应增加；相反，降低硫磺、提高大黄比例后不良反应相应降低。综上所述，降低硫磺在颠倒散中的比例可减少对皮肤的不良反应，但不影响抗粉刺的作用。相反，增加硫磺的比例后可能增强皮抑制脂腺分泌的作用，但不良反应增加。这一发现可能为颠倒散治疗不同类型痤疮时，采用不同比例组方提供一定的实验依据。但对该方中大黄与硫磺更多组方比例的作用、安全性以及作用机理的探索尚待进一步研究。

[1] 刘汉顺.枇杷清肺饮加减联合加味颠倒散治疗痤疮的临床观察[J].安徽医药,2012,16(1):108-109 .

[2] 赖梅生.清肺愈痤方合复方颠倒散治疗痤疮150例疗效观察[J].新中医,2012,44(10):47-49.

[3] 张怀亮.赵炳南颠倒散古方痤疮、酒渣鼻和面部脂溢性皮炎传承治疗经验介绍[J].时珍国医国药,2012,23(8):2106-2108.

[4] 刘文彬,梁 庆,王 辉,等.一种痤疮复合动物模型的建立[J].广东药学院学报,2014,30(2):199.

[5] Tan JK,Bhate K.A global perspective on the epidemiology of acne.[J].Br J Dermatol，2015,Jul;172 Suppl 1:3-12.

[6] Moon SH,Roh HS,Kim YH,et al.Antibiotic resistance of microbial strains isolated from Korean acne patients[J].J Dermatol,2012,39(10):833-837.

[7] Luk NM,Hui M,Lee HC,et al.Antibiotic-resistant Propioni bacterium acnes among acne patients in a regional skin centre in Hong Kong[J].Eur Acad Dermatol Venereol,2013,27(1):31-36.

(收稿2015-06-11；修回2015-07-19)

Effectiveness of different constituent ratios of Diandao powder for comedos and seborrhea of rabbit ear acne model

Tang Ting Jia Min Wen Changhui et al

Dermatology Department,First Affiliated Hospital to Guiyang College of Traditional Chinese Medicine(Guiyang 550002)

Objective:To explore an appropriate constituent ratios of Diandao powder for acne,which has lower adverse side effects and preferable effectiveness simultaneously.Methods:After acne model of rabbit ear was been made,32 rabbits were divided into four groups,each of them included 8 ones respectively.Group A was treated by the external application of original Diandao powder,of which the constituent ratio of Dahuang and sulfur was 1:1.While group B was administrated by the modified constituent ratio which was 1:2 of Da-huang versus sulfur,And group C by 2:1.Once a day,two successive weeks.As a controlled model one,group D accepted nothing interfering.The sum of comedos and seborrhea ,as well as side adverse effects were observed during and after practiced the procedure.Results:After experiment，a prominent decline of sum of comedos was seen concurrently among group A,B and C,and a significant difference was found between the three groups and group D.The amount of sebum excretion in 24 hours has decreased in group A,B and C,after treated begin 1week and 2 weeks ,compared with group D.Meanwhile,group B had the lowest excretion and the most amount of erythema and exfoliation of epidermis synchronously than other groups statistically.Conclusion:Increasing the constituent ratio of sulfur in Diandao powder(or decreasing the constituent ratio of Dahuang meantime)could decline the sebum excretion,but contribute to the side effects of cutaneo.On the contrary,decreasing the ratio of sulfur(or increasing the ratio of Dahuang meanwhile),can refrain side effects of skin,but not counteract the anti-acne effectiveness.

Acne vulgaris/ traditional Chinese medicine therapy Animal experimentation Rabbits @Diandao powder

*贵州省科技厅项目(20132062)

寻常痤疮/中医药疗法 动物实验 兔 @颠倒散

R275

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.11.046

贵阳市科技局项目(2012103)

∆天津中医药大学研究生院2014级博士研究生(天津300193)