刺五加中两种主要活性成分的含量比较

曹淑娟 李保军 高翠雪 王鸿昌

刺五加中两种主要活性成分的含量比较

曹淑娟 李保军 高翠雪 王鸿昌

目的 观察刺五加中紫丁香苷和刺五加苷E的含量。方法 采用HPLC法，Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(5∶10∶85)为流动相，流速 1.0 ml/min，检测波长为210 nm，进样量为10 μl，测定刺五加苷E的含量;《中国药典》2010年版一部方法测定紫丁香苷的含量。结果 刺五加苷E质量浓度在0.02032～0.2032 mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999)，加样回收率97.7%，RSD=0.56%(n=9)。结论 测定刺五加中刺五加苷E的含量非常必要。

刺五加;HPLC;含量测定

刺五加是五加科植物刺五加的干燥根和根茎或茎，其功能主治为益气健脾，补肾安神。用于脾肺气虚，体虚乏力，食欲不振，肺肾两虚，久咳虚喘，肾虚腰膝酸痛，心脾不足，失眠多梦。其是《中国药典》2010年版一部收载的中药饮片品种，其检验标准规定了其活性成分紫丁香苷的含量限度［1］，并没有对其他活性成分进行控制。明朝李时珍《本草纲目》称刺五加，以五叶交加者良，故名五加。五加治风湿，壮筋骨，其功良深，宁得一把五加，不用金玉满车，对五加做了很高的赞誉。《名医别录》认为五加有补中，益精，坚筋骨，强意志等功效。紫丁香苷、刺五加苷E和异嗪皮啶是刺五加发挥药效作用的主要成分，药理实验结果显示，刺五加苷E能明显改善类风湿关节炎关节肿胀情况、降低关节炎指数、逆转关节炎病理性改变，且无临床常用药的严重缺点［2，3］。因为刺五加苷E具有强效低毒抗类风湿性关节炎的作用，为更好的发挥刺五加的其他药理作用，所以测定刺五加苷E的含量具有重要意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器 戴安U3000型高效液相色谱仪;METTLER AG150电子天平;Sartorius CP225D电子天平;KQ3200E超声波清洗器。

1.2 试药 刺五加苷E对照品(批号111713-200502中国食品药品检定研究院);刺五加样品16批(经本中心中药鉴别师张继强确认均为正品);乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸为优级纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);柱温为30℃;流动相:甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(5∶10∶85);流速:1.0 ml/min;检测波长:210 nm;进样量 10 μl。在上述色谱条件下，理论板数按刺五加苷E峰计不低于2 500。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取五氧化二磷减压干燥的刺五加苷E对照品适量，加甲醇制成每1毫升含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备:取本品粗粉约2 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液的制备:以溶剂即甲醇为阴性样品溶液。

2.3 专属性考察 精密量取2.2项下的对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，按2.1项下的色谱条件进样，记录色谱图。刺五加苷 E峰保留时间为30.968，且杂质峰与刺五加苷E峰分离完全(分离度大于1.5)，不干扰刺五加苷E的测定。见图1～3。

图1 对照品溶液

图2 供试品溶液

图3 阴性样品溶液

2.4 线性关系考察 取五氧化二磷减压干燥的刺五加苷E对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为2.032 mg/ml的对照品储备液，精密吸取上述储备液1.0、2.0、4.0、6.0 及 10.0 ml，分别置 100 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，按色谱条件进行分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归方程，得回归方程Y=278.47X-0.01326，r=0.9999(n=5)。结果表明刺五加苷 E浓度在0.02032～0.2032 mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密量取对照品溶液10 μl，连续进样6次，记录峰面积。结果RSD=0.55%(n=6)，表明本方法精密度较好。

2.6 稳定性试验 取供试品(批号:G12120102)适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、12和24 h进样分析，记录峰面积。结果RSD=0.60%，表明刺五加苷E在甲醇溶液中24 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验 取供试品(批号:G12120102)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，测定其含量。结果RSD=0.85%，表明本法重复性良好。

2.8 加样回收率试验 精密称取9份已知含量的供试品粗粉(批号:G12120102水分为7.4%，以干燥品计算刺五加苷E含量为0.188%)各约1.0 g，分别加入浓度为0.3856 mg/ml的对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，并依法测定并计算回收率。见表1。

表1 刺五加苷E加样回收率试验结果

2.9 样品含量测定 取刺五加样品(紫丁香苷含量8批合格与8批不合格)16批，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，进样，测定，用外标法计算样品中刺五加苷E的含量。同时我们按《中国药典》2010年版一部收载的方法进行了117批刺五加中紫丁香苷的含量测定。见表2。

3 讨论

3.1 检测波长的选择 用二极管阵列检测器，以甲醇为溶剂，在180～240 nm(狭缝2 mm)波长范围内扫描，发现刺五加苷E在210 nm波长处有最大吸收峰，故采用210 nm波长进行含量测定。

表2 刺五加中紫丁香苷与刺五加苷E含量测定结果

3.2 流动性的选择 笔者曾采用乙腈-水、甲醇-乙腈-水、乙腈-磷酸溶液、甲醇-乙腈-磷酸溶液不同比例检验，结果发现采用甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(5∶10∶85)，刺五加苷 E 能得到很好的分离，峰形较好［4，5］，故选此为流动相。

3.3 提取溶剂及提取方法的选择 笔者分别考察了超声提取法和加热回流提取法，并考察了不同的提取溶剂(水、甲醇、50%甲醇、80%甲醇)对含量测定的影响。结果通过优选，确定用甲醇提取超声30 min，结果很好。

由查阅的资料可知紫丁香苷和刺五加苷E均是刺五加的有效活性成分，但紫丁香苷不是刺五加的专有成分，专属性不强，许多药材中均含有紫丁香苷，如药材五加皮等。笔者检验了117批五加皮中紫丁香苷的含量，发现随着样品贮存时间的延长，紫丁香苷的含量合格率呈下降的趋势，同时与制药企业技术人员积极沟通了解情况，企业普遍反映紫丁香苷稳定性不高，用于刺五加质量评价时难以准确反映药品质量，但仍需进一步验证。通过本次试验测定，我们可以看出，刺五加中紫丁香苷含量较低时，刺五加苷E的含量并不一定低，有的甚至含量较高，说明刺五加苷E比紫丁香苷性质稳定，因此检验标准中增加刺五加苷E的含量测定非常必要，将能够更加有效地全面反映和控制刺五加的质量。本方法操作简便、重现性好，适用于刺五加苷E的含量测定，为控制刺五加的质量提供了科学依据。

1 国家药典委员会主编.中国人民共和国药典(一部).2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010.192-193.

2 南京中医药大学主编.中药大辞典(上册).第2版.上海:上海科学技术出版社，2006.2718-2719.

3 李同华，魏为民，陈淑范.刺五加的经济价值及其生物技术研究.农业与技术，2008，25:57.

4 劳凤云，李小娜，邢朝斌，等.HPLC法测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E的含量.现代预防医学，2008，35:2280-2281.

5 张晶，刘芳芳，薛起，等.HPLC法测定刺五加不同部位刺五加苷B、E含量.药物分析杂志，2008，28:2018-2019.

R 917

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1002-7386(2015)18-2847-03

10．3969/j．issn．1002-7386．2015．18．045

063000 河北唐山市食品药品检验中心

2015-03-26)