复方中草药“猪康散”对仔猪红细胞免疫功能的影响

陈张华，邓俊良，陈仓良

(1.四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康重点实验室/环境公害与动物疾病重点实验室，四川雅安 625014；2.内江职业技术学院，四川内江 641100)

近年来，由于各大养殖场的不合理的饲养管理，使得猪病越来越严重，尤其是免疫抑制性疾病更为突出，给养殖业造成了严重的损失。现在人们开始采用具有毒性低、无抗药性、经济实用等优点的中草药，并且逐渐将它广泛应用于养猪生产。本实验所用的“猪康散”是按“扶正祛邪”、“正气存内，邪不可干”的中医理论科学组方而成的纯中药制剂。它主要是由金银花、连翘、板兰根、大青叶、黄连、黄芪、黄柏、忍冬藤、栀子、石膏、知母等多位中药组成，方中单味中药如金银花、板兰根、大青叶、黄连、黄芪等均具有直接或间接的免疫增强作用，连翘、黄芪等均具有很强的清除自由基、中断脂质过氧化使抗氧化酶免受攻击的作用。本实验通过结合临床生产，测定相关指标以研究其对仔猪红细胞免疫的作用机理。

1 材料和方法

1.1 主要实验材料、实验动物及仪器 猪康散由金银花、连翘、板兰根、大青叶、黄连、黄芪、黄柏、忍冬藤、栀子、石膏、知母等多位中药组成，按比例配方粉碎过60 目筛，塑料袋500 g/袋分装备用；转移因子(500 mg×1 支，批号：20100322)购自河南辉腾动物药业有限公司；糖酵母多糖(100 mg×1袋)购自上海长江医院免疫实验室；实验仔猪由四川通威集团邛崃春源养殖公司提供。Abacus Junior VET 动物血液分析仪购自北京中西远大科技有限公司。

1.2 实验动物及分组 选取平均体质量约5 kg 的20 日龄健康杜长大三元杂交仔猪50 头，根据抗体水平、体质量相近，公母各半的原则随机分成5 个组(Ⅰ-基础日粮、Ⅱ-转移因子组、Ⅲ-0.5 %中药、Ⅳ-1.0 %中药、Ⅴ-2.0 %中药)，每组10 头。所有仔猪在21 d 以2 头份/头剂量免疫猪瘟兔化弱毒苗，Ⅱ组在注射疫苗的同时将稀释的转移因子按0.02 mL/kg 与疫苗混合后一同肌内注射，饲喂基础日粮，常规饲养；3 个中药组27 日龄时开始在基础日粮中添加中药“猪康散”，连喂5 d，实验观察期45 d。日粮配方参照NRC(1998)配制，常规饲养管理。

1.3 免疫指标检测方法 将肝素钠抗凝血2 mL 离心分离红细胞，红细胞经生理盐水洗涤离心3 次(2 000 r/min，5 min)，将红细胞配成1.25×107个/mL，制得红细胞悬液。冻干补体未致敏酵母多糖，取2 mL 酵母多糖悬液于EP 管中，离心2 000 r/min，5 min，弃一半上清液，加入分离所得血清1 mL 混匀，37 ℃水浴20 min，即可制得致敏酵母多糖。取致敏酵母多糖及红细胞悬液各50 μL，混匀，37 ℃水浴30 min；再加入0.25%的戊二醛25 μL，混匀，固定5 min；滴加25 μL 混合液于玻片上推片，立即烤干，滴加瑞氏染液30 s～1 min，滴加缓冲液5 min，清水清洗，用滤纸吸干水，烤干，滴加香柏油后显微镜计数。一个红细胞结合2 个或者2 个以上酵母菌为一朵C3b 受体花环(E-C3bRR)，计数200 个红细胞，求出花环率，计算公式为：C3b受体花环百分率(%)=(红细胞花环数/200)×100 %。使用未致敏酵母多糖进行红细胞免疫复合花环率(E-ICRR)试验。

1.4 数据处理与分析 采用Excel 进行数据前处理，用SPSS19.0 统计软件进行统计分析和LDS 多重比较。

2 结果与讨论

2.1 对仔猪外周血E-C3bRR的影响 对实验仔猪进行前腔静脉采血，进行E-C3bRR 试验，结果表明，在整个试验期间，转移因子组红细胞补体受体花环率均高于对照组，但只在35 d 时有最高的花环率(p<0.05)；可能是转移因子转移免疫致敏信息的小分子可透析物质，在体内起着被动转移免疫信息的作用。1.0 %中药组各日龄段均差异显著或极显著高于对照组(p<0.05，p<0.01)，在45 d 时极显著高于转移因子组和2.0 %中药组，这与杨宏斌等[1]在蛋鸡饮水中添加1 %和0.5 %浓度“大沙净”，红细胞C3b 受体花环率(E-C3bRR)和红细胞C3b 受体花环促进率(RFER)都极显著高于对照组的结论相一致；在整个试验期间，1.0 %中药组红细胞花环率最高，2.0 %中药组最低。其原因可能是“猪康散”能够提高红细胞膜上呈集簇状分布的CR1 和增加C3bR 的数量；同时随着仔猪日龄的增长，其新陈代谢功能增强，机体免疫功能也在不断增强，而后略有下降趋势，表明“猪康散”在增强红细胞免疫功能时效果显著但持续时间较短(表1)。

2.2 对仔猪E-ICRR的影响 对实验仔猪进行E-ICR 试验，结果表明，除0.5 %、2.0 %中药组在35日龄时红细胞免疫复合花环率略高于对照组(p>0.05)外，转移因子组和各中药组E-ICRR 均低于对照组。1.0 %中药组在整个试验期间均低于其他各组，但只在55 d 和65 d 时与对照组间差异显著(p<0.05)。其余组间差异均不显著(p>0.05)。其机理可能是“猪康散”能够提高红细胞黏附免疫复合物的能力，及时有效的清除免疫复合物，也可能是服药后期随着自身抗体增多，免疫复合物蓄积增加，导致红细胞运输免疫复合物的负担过重，使红细胞膜上的C3b受体消耗过多和血液中红细胞免疫黏附抑制因子的活性增强而导致E-ICRR 的降低(表2)。

表1 红细胞补体受体花环(E-C3bRR)率(%)Table 1 The percentage of the E-C3bRR(%)

表2 红细胞免疫复合花环率(E-ICRR)(%)Table 2 The percentage of the E-ICRR(%)

近年来研究表明，红细胞具有参与免疫反应和免疫调控的功能，如调控NK 细胞、LAK 细胞和吞噬细胞的免疫活性[2]，通过CR1 的识别、黏附和杀伤抗原[3]，也可通过I 型补体受体(CR1)、CD59、DAF、HRF 参与补体系统的调控[4-5]，红细胞免疫是机体免疫系统中的重要组成部分。其具有的多种免疫功能均是通过表面C3bR 与IC 中的补体成分结合而粘附IC[6]。因此，常常将RBC-C3bR 花环率和RBC-IC 花环率用来衡量红细胞免疫功能的高低。本次实验中，1.0 %“猪康散”能够显著提高RBCC3bR 花环率，降低RBC-IC 花环率，具有提高仔猪的红细胞免疫的功能。该方剂作为纯中药，具有价格低廉且处理方法简单的特点，有望在规模化的养猪生产中广泛应用。

[1]杨宏斌，温洁，温伟业.新复方中药制剂“沙大净”对鸡红细胞免疫功能的影响[J].山西农业大学学报，2006，26(1)：70-72.

[2]Cohen J H,Atkinson J P,Klickstein L B,et al.The C3b/C4b receptor(CR1,CD35)on erythrocytes:methods for study of the polymorphisms[J].Mol Immunol,1999,36(13):819-825.

[3]Kuttner-Kondo L,Subramanian V B,Atkinson J P,et al.Conservation in decay accelerating factor(DAF)structure among primates[J].Dev Comp Immunol,2000,24(8):815-827.

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[5]周惠萍.硒中毒对猪红细胞免疫功能影响的研究[D].武汉：华中农业大学，2005.

[6]陈龙，殷定忠，庞训胜.雏鸡在感染IBDV 后红细胞免疫功能变化的研究[J].畜牧兽医学报，1998，30(3)：280-284.