2004年～2012年上海地区猪繁殖与呼吸综合征流行情况调查

王 建，张维谊，鞠厚斌，杨德全，刘 健，周锦萍，袁世山，刘佩红*

(1.上海市动物疫病预防控制中心，上海 201103；2.中国农业科学院 上海兽医研究所，上海 200232)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，俗称“蓝耳病”，是由PRRS 病毒(PRRSV)引起的一种高度接触性传染病，主要临床表现为妊娠母猪流产、早产、死胎以及仔猪和育肥猪的呼吸道症状[1]。我国1995 年底暴发该病，目前PRRSV 在中国猪群中感染率高，已造成严重的经济损失[2]。2006 年始于南方各省进而蔓延全国的以高热为特征的高致病性PRRS(HP-PRRS)的暴发流行，给养猪业带来了沉重的打击[3-6]。为了解PRRS 的疫情动态和趋势，本研究于2004 年～2012年在上海及周边地区采集健康猪内脏、血清以及发病猪内脏样品进行检测，并对发病猪病例进行回顾调查，进而研究上海地区PRRS 的临床特征、剖解变化、时间分布以及混合感染等情况，为PRRS 的防控提供科学依据。

1 材料和方法

1.1 病例回顾、调查、剖检 通过对2004～2012年上海及江苏、浙江等周边地区发病猪病例回顾调查，了解PRRS 的临床特征、剖解病变特征及继发疾病等情况，开展纵向跨年度的PRRS 的流行病学调查。

1.2 样品采集 无菌采集来自上海及周边地区散养户或规模养猪场病猪内脏病料样品(肺脏、脾脏、颌下淋巴结)1 499 份，发病猪主要为保育和育肥猪，部分为母猪和流产胎儿。屠宰场健康猪内脏样品(肺脏、脾脏、颌下淋巴结)130 份、健康猪血清126 份及疑似PRRS 猪血清54 份。详见表1。

表1 样品背景情况Table 1 The samples background from 2004-2012

1.3 主要试剂 TRIzol 试剂购自Sigma 公司；Columbia 血琼脂购自Oxoid 公司；GNI、GPI VITEK细菌鉴定卡购自Bio Merieuxsa 公司；PRRSV 通用型、HP-PRRSV、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)荧光PCR 检测试剂盒均购自北京生科尚仪科技有限公司；PRRS 美洲型和欧洲型核酸检测分型试剂购自美国ABI 公司；猪肺炎支原体荧光PCR 试剂盒购自北京海森通生物科技有限责任公司；猪链球菌荧光PCR 检测试剂盒购自法国LSI 公司。

1.4 样品处理及核酸提取 将1 g 内脏组织样品加入1 mL PBS 缓冲液充分研磨，离心后取上清液，按照试剂盒说明书采用TRIzol 试剂提取总RNA。

1.5 细菌分离与鉴定 将无菌采集的猪内脏(肺脏、脾脏、颌下淋巴结)划线接种于Columbia 血琼脂及巧克力平板，5 % CO236 ℃培养24 h，挑取可疑菌落涂片镜检并纯培养。对分离的细菌纯培养物按照细菌鉴定卡操作规程进行操作，并在VITEK 2 Compact 全自动细菌鉴定及药敏分析系统上读取细菌鉴定结果。疑似副猪嗜血杆菌及胸膜肺炎放线杆菌的菌落参照文献[7-8]的方法进行PCR 检测。

1.6 PCR 检测 采用商品化试剂盒对通用型PRRSV、HP-PRRSV、CSFV、PRV、PCV、猪肺炎支原体、猪链球菌等进行PCR 检测及结果判定。其中PRRSV 通用型检测试剂盒针对ORF5 基因设计特异性引物和探针，而HP-PRRSV 检测试剂盒针对NSP2 基因设计特异性引物和探针。

2 结果

2.1 样品检测结果 对采集样品进行PCR 检测，结果显示，发病猪的PRRSV 阳性率为34.56 %(518/1 499)，其中2009 年阳性率明显高于其他年份，为53.69 %，2008 年检测数量最多，阳性数为182 份。2006 年首次检测到HP-PRRSV，以后每年均检测到HP-PRRSV，在PRRS 病例中HP-PRRSV共226 株，占阳性PRRSV 的43.63 %(175 株来自江浙地区，51 株来自上海6 个区县)，HP-PRRSV 阳性率呈逐年上升的趋势，2012 年HP-PRRSV 阳性率升至64 %(表2)。对PRRS 阳性样品的月份分布进行分析，结果显示：每个月均检测到阳性PRRS 病例，阳性率较高的月份相对集中在5 月份～9 月份，占全年56.59 %(图1)。对所有的PRRSV 阳性样品进行美洲型和欧洲型分型检测，结果显示均为美洲型，未检测到欧洲型PRRSV。

130 份健康猪内脏样品中PRRS 阳性率为4.62 %(6/130)，健康猪血清126 份均为阴性，疑似PRRS猪血清样品中PRRSV 抗体阳性率为7.41 %(4/54)。

表2 2004～2012 年PRRSV 检测结果Table 2 PRRSV test results from 2004-2012

图1 PRRS 阳性病例月份分布情况Fig.1 PRRS-positive cases monthly distribution

2.2 混合感染情况 对518 例PRRS 阳性病例进行PCR 检测与细菌分离鉴定，结果显示：PRRS 病征复杂，88.8%为混合感染，多与PCV、PRV、CSFV、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌等形成多重感染，其中与PCV 混合感染率最高，占临床发病数的40.15%，其次为猪链球菌(31.66%)、副猪嗜血杆菌(20.66 %)等，在混合感染中以二重混合为主，占54.44 %，其次是三重感染，为24.9%，多重感染可达四重，占5.41 %。详见表3。

表3 518 例PRRS 阳性病例中的疾病感染情况Table 3 518 positive PRRS-positive cases

2.3 临床症状及病理剖检 对518 例PRRS 临床病例进行分析，发病猪以哺乳仔猪和保育猪高热、呼吸障碍最常见，分别占34.17 %和26.06 %，其次为育肥猪高热、呼吸障碍(19.31 %)，母猪繁殖障碍(11.58 %)，神经症状(6.37 %)和肠炎(2.51 %)病例比较少见。其中2012 年母猪繁殖障碍病例数所占比例明显上升，占到全年PRRS 病例的24 %(图2)。

图2 2004 年～2012 年对PRRS 阳性病例回顾调查Fig.2 Retrospective survey of PRRS-positive cases from 2004 to 2012

对PRRS 阳性病例回顾调查显示：PRRS 可以通过多种途径传播，但呼吸道仍是该病的主要感染途径，也可通过精液传播而感染。各年龄段的猪均可发病，发病大都在每年的夏秋季节，发病率高，死亡率随病程和继发感染的严重程度不同而异。主要表现为高热、食欲下降、呼吸困难、部分妊娠母猪流产、死胎和木乃伊胎，此外，还存在神经症状、腹泻等消化道症状。因年龄不同，临床表现也具有较大的差异。

PRRS 的病理变化不太明显，外观偶尔可见个别母猪被毛粗，耳、外阴和腹部发绀，真皮内形成色斑、水肿和坏死。主要病变见肺弥漫性间质性肺炎，并伴有细胞浸润和卡他性肺炎区。流产的胎儿及弱仔剖检，可见胸腔内积有大量清亮液体，偶见肺实变。

3 讨论

本研究通过对2004～2012 年发病猪病例回顾调查和临床检测，分析了上海地区PRRS 的流行情况。上海地区自2006 年5 月开始检测到HP-PRRSV，2009 年以后HP-PRRSV 成为优势病毒株。所有检测到的阳性PRRSV 均为美洲型，未检测到欧洲型。据田克恭报道，在中国大陆的7 个省8 个种猪场检测到欧洲型PRRSV[9]，而在商品猪中目前尚未检出欧洲型PRRSV 的报道，因此欧洲型PRRSV 可能来源于引种。带毒的母猪是猪场的主要传染源，HP-PRRSV 在猪场的循环感染和传播是造成哺乳仔猪、保育猪和生长育肥猪发病的主要原因，带毒的后备种猪因流通和种猪交易而造成HP-PRRSV 的扩散。临床上，HP-PRRSV 感染仍然以发热、呼吸道症状、母猪流产为主。此外，还可见到神经症状、腹泻等消化道症状。中、小型猪场和散养户因缺乏必要的生物安全措施，不能够阻断HP-PRRSV 的传播，疫情发生较为频繁，加之猪群发病后处置不当，大量使用抗生素和不科学地免疫接种，时常造成发病猪群的高死亡率。

本研究调查结果显示，PRRS 阳性病例中，有88.8 %为混合感染，并且病征复杂。PRRSV 在体内的感染和大量复制导致机体免疫调节发生紊乱，导致继发感染，并加速PRRS 或其他疾病的进程[10-12]；另一方面，PRRSV 也能够刺激机体产生保护性免疫，使动物免受再次感染，尤其免受同源病毒的攻击，所以PRRSV 感染易造成持续性感染，机体可长期带毒[10-12]。临床上，疫苗免疫仍是有效防控PRRS 的措施之一，根据农业部要求，2007 年上海开始推行HP-PRRS 疫苗强制免疫政策，并积极开展疫苗效果评估和流行病学调查等相关科研的研究。2009 年上海地区开始普遍使用HP-PRRS 弱毒疫苗，PRRSV临床检出率由2009 年的53.69 %逐年下降，2012 年已下将至22.3 %，控制效果较好，但由于我国PRRS 疫苗复杂，种类繁多，目前已有多种商品化的PRRS 活疫苗投放应用到养猪生产，所有的疫苗在上海地区猪场均有流通，这给猪场在疫苗的选择和使用上带来了极大的困惑，并且可能会增加疫情的复杂性，还可能会影响到其他重要疫病(如猪瘟)的疫苗免疫防控效果。因此，需要国家相关部门引起重视，加强对疫苗质量和使用层面的监管和技术指导。

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