高效液相色谱-质谱联用法检测抗鼻炎喷剂中非法添加盐酸萘甲唑林

陈日檬，柯春文，万晓明，李德良，李 蔚，谢立宇

（广东省湛江市药品检验所，广东 湛江 524000）

高效液相色谱-质谱联用法检测抗鼻炎喷剂中非法添加盐酸萘甲唑林

陈日檬，柯春文，万晓明，李德良，李 蔚，谢立宇

（广东省湛江市药品检验所，广东 湛江 524000）

目的 建立检测抗鼻炎喷剂中非法添加盐酸萘甲唑林的高效液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）法。方法 色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 m），流动相为乙腈-3%醋酸-三乙胺（15∶85∶0.08，用醋酸或三乙胺调节pH=3.0），流速0.2 mL/min，柱温35℃；电喷雾电离，正离子模式，多重反应监测扫描(MRM)方式对盐酸萘甲唑林的母离子(m/z 210)及其子离子(m/z 140，115)进行检测。结果 盐酸萘甲唑林检测限低于0.05 ng。24批次市售抗鼻炎喷剂中，17批次检出盐酸萘甲唑林。结论 该法专属性强、灵敏度高，可用于抗鼻炎喷剂非法添加盐酸萘甲唑林的筛选与确证工作。

高效液相色谱-质谱；抗鼻炎喷剂；非法添加；盐酸萘甲唑林

盐酸萘甲唑林别名有盐酸萘唑啉、鼻眼净、滴鼻净、盐酸纳发唑啉，为拟肾上腺素药，能直接兴奋皮肤、黏膜、内脏的血管平滑肌，对黏膜、血管有强烈的收缩作用，可以迅速解除鼻塞[1]。但同时其也可引起全身小动脉和小静脉收缩，使外周阻力明显增加，导致血压升高，微循环障碍，并能透过血脑屏障影响呼吸中枢和体温调节中枢，引起烦躁不安、呼吸困难，严重者可致呼吸衰竭而危及生命[2]。由于盐酸萘甲唑啉价格低廉，且短时间能迅速解除鼻塞，一些不法商家为牟取暴利，将其非法添加到抗鼻炎喷剂中，对消费者造成危害。本研究中采用高效液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）、多重反应监测（MRM）扫描方式，建立了盐酸萘甲唑林的鉴定方法，为更好地打击不法行为提供可靠的技术支撑。

1 仪器与试药

TQ Detector型三重串联四级杆质谱仪，配有电喷雾离子源(ESI)、Masslynx 4.1工作站、Waters ACQUITY UPLC色谱系统（美国 Waters公司）；Agilent 1100型高效液相色谱仪，包括 G1314B型DAD检测器，G1329A型全自动进样器，G1311A型四元系统，Agilent ChemStation色谱工作站（安捷伦公司）；BT125D型电子天平（十万分之一）。盐酸萘甲唑林对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100031-200304）；样品均购自市场；乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 检测条件

色谱条件：色谱柱为 Zorbax Eclipse XDB-C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-3%醋酸-三乙胺（15∶85∶0.08，用醋酸或三乙胺调节 pH=3.0）；流速0.2 mL/min；柱温35℃；进样量10 μL。

质谱条件：毛细管电压1.6 kV；锥孔电压42 V；二级锥孔电压3 V；脱溶剂气温度300℃，脱溶剂气流速900 L/h，锥孔气流速 50 L/h；正离子扫描检测，扫描方式采用全扫描一级质谱，MRM监测扫描，质量范围50～1 000。

2.2 溶液配制

精密称取盐酸萘甲唑林对照品约25 mg，置25 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液(0.184 g/L)。精密量取样品5 mL，置25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.3 方法专属性试验

图1 高效液相色谱图

取对照品与供试品溶液，经0.22 μm微孔滤膜滤过后，分别取10 μL，注入 HPLC色谱仪进行初筛和初步定量，结果见图1。根据初筛结果，稀释对照溶液和供试品溶液至50 ng/mL，分别取10 μL，注入LC-MS/MS仪，按拟订条件进行测定。结果见图2。

2.4 质谱条件优化

取对照品溶液，选用电喷雾离子源正离子化模式，直接进样，进行质谱条件的优化。首先，运行一级全扫描方式在质量范围50～1 000进行扫描，可得到准分子离子峰[M+H+]210；然后再运行选择性离子监测优化碰撞诱导解离电压，得到最佳值；最后进行子离子扫描，选择子离子及其最佳碰撞能量，选择丰度最大的子离子为检测离子，使MRM具有较高的灵敏度。在样品测定中适当增加离子对进行筛选，使其具有更高的专属性，可以有效防止出现假阳性。结果见表1。

2.5 检测限试验

取对照品溶液适量，加水稀释，按拟订条件进行测定。以S/N=3，计算检测限为0.05 ng。该法灵敏度较高，可以快速作出定性鉴别。

2.6 样品检测

图2 高效液相色谱-质谱图

表1 盐酸萘甲唑林质谱条件优化结果

进行样品检测时，如果样品在HPLC中检出与盐酸萘甲唑林对照品保留时间一致的成分，且通过二极管阵列检测器（DAD）进行峰纯度检查，比阈值970大，应进行质谱MRM确证。如果样品保留时间和特征离子及其产生的子离子均与对照品相同，则判断该样品中含有盐酸萘甲唑林。在抽取的24批次市售抗鼻炎喷剂中，17批次检出了盐酸萘甲唑林，检出率为70.83%。HPLC检出结果与MS确证结果一致。

3 讨论

本试验中比较了甲醇-水-三乙胺-磷酸（50∶50∶0.25∶0.075）[3]、乙腈-3%醋酸 -三乙胺（15∶85∶0.08，用醋酸或三乙胺调节pH=3.0）两种流动相对样品的分离情况，发现前者有部分阳性样品不能完全分离出盐酸萘甲唑林，但后者则较好地分离出所有阳性样品中的盐酸萘甲唑林。故选择后者。

应注意的是，对照品与供试品的质量浓度不要太高，否则残留严重，需要较长时间对质谱系统进行冲冼。所用样品、玻璃仪器与试剂等要防止交叉污染，避免出现不必要的假阳性。

[1]许拔荣.盐酸萘甲唑啉在鼻炎中的应用[J].实用医学杂志，1996，12（10）:711-712.

[2]邓东波，邹雪莲.过量应用盐酸萘甲唑林滴鼻液致窦性心动过缓及交界性逸搏心律1例[J].实用医学杂志，2010，26（1）:110.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:774-775.

Determination of Naphazoline Hydrochloride Illegally Added in Anti-Rhinitis Spray by LC-MS/MS

Chen Rimeng,Ke Chunwen,Wan Xiaoming,Li Deliang,Li Wei,Xie Liyu
(Zhanjiang Municipal Institute for Drug Control,Zhanjiang,Guangdong,China 524000)

Objective To develop a LC-MS/MS method for the determination of illegally added chemical substance naphazoline hydrochloride in anti-rhinitis spray.M ethods LC-MS/MS method was adopted.The separation was achieved by using the Zorbax Eclipse XDB-C18column(150 mm×4.6 mm,5 μm)and the mobile phase of acetonitrile-3% acetic acid-triethylamine(15∶85∶0.08,adjusting pH=3.0 with acetic acid or triethylamine).The flow rate was 0.2 mL/min and the column temperature was set at 35℃.The electrospray ionization was adopted.The parent ion(m/z 210)and daughter ion(m/z 140,115)of naphazoline hydrochloride were detected by the multiple-reaction monitoring scanning mode via positive ion mode.Results The limit of detection(LOD)for illegally added naphazoline hydrochloride in anti-rhinitis spray was below 0.05 ng.Among the 24 batches of commercially available anti-rhinitis spray,naphazoline hydrochloride was detected out in 17 batches.Conclusion This established method is strongly specific and highly sensitive,and can be used for the screening and confirmation work of illegally added naphazoline hydrochloride in antirhinitis spray.

LC-MS/MS;anti-rhinitis spray;illegal addition;naphazoline hydrochloride

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)13-0033-02

陈日檬（1979-），男，大学本科，主管药师，研究方向为药物分析，（电话）0759-2836859。

2014-09-03)

广东省药检系统非法添加系统技术策略专项资助课题，项目编号:YJ201074。