参芎葡萄糖注射液中总酚酸含量测定方法研究

朱 迪，谭 丹，侯靖宇，王爱民，3，兰燕宇，3，郑 林，3

（1.贵阳医学院民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵州 贵阳 550004； 2.贵阳医学院药学院贵州省药物制剂重点实验室，贵州 贵阳 550004； 3.贵阳医学院药学院，贵州 贵阳 550004）

参芎葡萄糖注射液中总酚酸含量测定方法研究

朱 迪1，谭 丹2，侯靖宇1，王爱民1，3，兰燕宇1，3，郑 林2，3

（1.贵阳医学院民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵州 贵阳 550004； 2.贵阳医学院药学院贵州省药物制剂重点实验室，贵州 贵阳 550004； 3.贵阳医学院药学院，贵州 贵阳 550004）

目的 建立测定参芎葡萄糖注射液中总酚酸含量的紫外分光光度（UV）法。方法 以原儿茶醛为对照品，对参芎葡萄糖注射液中总酚酸进行测定。结果 原儿茶醛质量浓度在0.008～0.030 g/L范围内与吸光度呈良好线性关系，A=31.541 04 C-0.103 97(r=0.999 6，n=5），平均回收率为103.61%，RSD为4.85%(n=9)。结论 该方法操作简便、准确可靠，可作为参芎葡萄糖注射液的质量控制方法。

参芎葡萄糖；总酚酸；含量测定；紫外分光光度法

参芎葡萄糖注射液为上市的中药注射剂品种，由丹参和盐酸川芎嗪配伍组方，具有抗血小板聚集、扩张冠状动脉作用，临床用于闭塞性脑血管病及其他缺血性血管疾病的治疗[1-3]。但其现行质量标准仅对丹参素和盐酸川芎嗪进行定量控制，难以全面控制产品内在质量。结合国家食品药品监督管理总局《关于开展中药注射剂安全性再评价工作的通知》（国食药监办〔2009〕28号）文件精神，本课题组研究建立了参芎葡萄糖注射液中6种主要成分的含量测定方法以及指纹图谱测定方法[4-5]，尤其是建立了参芎葡萄糖注射液总酚酸的含量测定方法，为产品的质量控制与综合评价提供了科学依据。

1 仪器与试药

UV 2401型紫外分光光度计（日本岛津公司）；超声波清洗器（250 W，频率27～34 kHz，北京医疗设备二厂）；AE240型十万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器＜上海＞有限公司）；超纯水机（四川沃特尔科技发展有限公司）；80-2B型台式离心机（湖南星科科学仪器有限公司）；TAISITE水浴锅。原儿茶醛对照品（批号为110810，中国食品药品检定研究院）；亚硝酸钠对照品（重庆江川化工有限公司，批号为201012117）；硝酸铝（批号为20090905，科密欧化学试剂有限公司）；氢氧化钠（批号为10019718），铁氰化钾（批号为 10016718），三氯化铁（批号为 10011918），十二烷基硫酸钠（批号为30166428)，均为国药集团化学试剂有限公司产品；参芎葡萄糖注射液（批号为 20131125-1，20131125-2，20130979-1，20130979-2，20131104-1，20131104-2，20131211-1，20131211-2）均由贵州景峰注射剂有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

称取原儿茶醛对照品5.30 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，得对照品溶液。取样品1 mL，加水定容至10 mL，摇匀后，取3 mL，置10 mL离心管中，加水补足5 mL，摇匀后，再加入10%亚硝酸钠溶液0.5 mL，10%硝酸铝溶液1.0 mL，摇匀后，暗处放置5 min，加入2 mol/L氢氧化钠溶液定容至10 mL，摇匀后，暗处放置20 min，即得供试品溶液。

2.2 检测波长

以2 mol/L氢氧化钠溶液为参比溶液，分别于紫外分光光度计上对系列对照品溶液和供试品溶液进行全扫描，结果对照品溶液最大吸收波长为514 nm，供试品溶液最大吸收波长为508 nm，二者紫外光谱和最大吸收波长基本一致，见图1。故确定参芎葡萄糖注射液中总酚酸含量的测定波长为508 nm。

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取对照品溶液 1.5，2.0，2.5，3.0，5.0 mL，置10 mL离心管中，加水补足5 mL，摇匀后，再加入0.5 mL 10%亚硝酸钠溶液，1.0 mL 10%硝酸铝溶液，摇匀后，暗处放置5 min，加入2 mol/L氢氧化钠溶液定容至10 mL，摇匀后，暗处放置20 min，即得对照品工作液。分别取对照品工作液，以2 mol/L氢氧化钠溶液为参比溶液，在508 nm波长处测定吸光度，以质量浓度 C为横坐标、吸光度 A为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为A=31.541 04 C-0.103 97，r=0.999 6（n=5）。结果表明，原儿茶醛质量浓度在0.008～0.030 g/L范围内与吸光度呈良好的线性关系。

图1 紫外分光光谱图

精密度试验：取同一对照品工作液（质量浓度0.013 g/L），依法测定6次吸光度值。结果的 RSD为0.44%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品（批号为20131125-1）6份，依法制备供试品溶液，分别测定吸光度值并计算含量。结果的 RSD为0.49%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：精密称取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，8，24 h时依法测定。结果的 RSD为3.4%（n=7），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

加样回收试验：精密称取同一批样品（批号为20131125-1）9份，每份0.5 mL，分别精密加入原儿茶醛对照品溶液适量，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定并计算回收率。结果见表1。

表1 原儿茶醛加样回收试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

取8批样品，制备供试品溶液，依法测定吸光度值，计算总酚酸含量。结果见表2。

3 讨论

目前测定总酚酸的方法有三氯化铁法和亚硝酸钠法[6-11]，但三氯化铁显色法稳定性差。经试验，结果表明，三氯化铁显色法测定总酚酸，室温放置30 min后吸光度就开始增加，室温放置2 h后便无法测定。参芎葡萄糖注射液是由盐酸川芎嗪与丹参总酚酸提取物组成的复方制剂，而盐酸川芎嗪与丹参总酚酸的最大吸收波长相近，故采用分光光度法直接测定其中丹参总酚酸的含量时，盐酸川芎嗪将对其含量测定产生显著的影响；丹参总酚酸可与硝酸铝形成络合物而使其最大吸收波长红移，从而亦可以消除盐酸川芎嗪的影响[7]。因此，选择亚硝酸钠显色法对总酚酸进行测定，试验结果表明，亚硝酸钠显色法在24 h内稳定性良好。本试验所用测定方法方便、快速、专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制。

表2 样品总酚酸含量测定结果(g/L)

为更好控制参芎葡萄糖注射液的内在质量，本研究中以《中药、天然药物注射剂基本技术要求》为依据对该制剂进行了上市安全性再评价，该要求提出了中药注射剂“689”质控标准。而本研究正是基于此，在前期多成分含量测定和指纹图谱研究的基础上，进一步采用紫外分光光度法建立了参芎葡萄糖注射液中总酚酸的定量测定方法，进一步完善了其质量控制方法，更好地保障了临床用药的安全可靠。

[1]金 明，周忠光.参芎葡萄糖注射液治疗不稳定型心绞痛38例[J].中医药学报，2008，36(5)：54-55.

[2]陈兴坚，刘健红.参芎葡萄糖注射液的临床应用进展[J].中国实用医药，2010，13(5)：247-249.

[3]李达文，龚 惠，叶 勇，等.参芎葡萄糖注射液对缺血再灌注损伤心肌的保护作用[J].中国分子心脏病学杂志，2012，12(1)：51-56.

[4]郑 林，庞秀清，兰燕宇，等.UFLC法同时测定参芎葡萄糖注射液中6种主要成分[J].中成药，2012，34(7)：1 276-1 279.

[5]郑 林，庞秀清，黄 勇，等.参芎葡萄糖注射液的UFLC指纹图谱研究[J].中国医药工业杂志，2013，44(6)：611-614.

[6]魏惠珍，张 洁，饶 毅，等.丹参中总酚酸测定的前处理方法研究[J].中草药，2008，39(8)：1 182-1 183.

[7]郑胜国，郭 俊.分光光度法测定注射用丹参川芎嗪中丹参总酚酸的含量[J].中药研究与信息，2005，7(11)：16-17.

[8]叶 勇.比色法与高效液相色谱法对丹参酚酸含量测定比较研究[J].浙江中医药大学学报，2006，30(4)：350-351.

[9]李广胜，王光新，赵牛和.丹参口服液中总酚酸性成分的含量测定[J].时珍国医国药，2001，12(8)：683-684.

[10]陈焕娜，刘 洋，赵晓霞，等.分光光度法测定丹参总酚含量方法的研究[J].亚太传统医药，2010，6(8)：19-22.

[11]阮 鸣.冠心宁注射液中大类成分的含量测定[J].南京晓庄学院学报，2013(3)：71-75.

Study on M easurement M ethod of Total Phenolic Acid Content in Shenxiong Glucose Injection

Zhu Di1,Tan Dan2,Hou Jingyu1,Wang Aimin1，3,Lan Yanyu1，3,Zheng Lin2，3(1.Engineering Research Center for Development and Application of Ethnic Medicine and Traditional Chinese Medicine of Ministry of Education,Guiyang Medical College,Guiyang,Guizhou,China 550004; 2.Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics,School of Pharmacy,Guiyang Medical
College,Guiyang,Guizhou,China 550004; 3.School of Pharmacy,Guiyang Medical College,Guiyang,Guizhou,China 550004)

Objective To establish a method for the determination of total phenolic acid in Shenxiong Glucose Injection.M ethods The UV spectrophotometry was adopted with protocatechuic aldehyde as the reference substance,the total phenolic content in Shenxiong Glucose Injection was measured.Results The mass concentration of total phenolic acids in the range of 0.008-0.030 g/L demonstrated the good linearrelation with the absorbance,A=31.541 04 C-0.103 97,r=0.999 6(n=5),the average recovery rate was 103.61%,RSD=4.85%(n=9).Conclusion The method is simple,accurate and reliable,and can be used as the quality control method of Shenxiong Glucose Injection.

Shenxiong Glucose Injection;total phenolic acid;content determination;ultraviolet spectrophotometry

朱迪(1991-)，女，在读硕士研究生，研究方向为药物新剂型、新技术、新工艺研究与新药研究开发，（电子信箱）412928703＠qq.com；郑林，女，副教授，研究方向为中药药效物质基础及质量控制，本文通讯作者，（电话）0851-6908468（电子信箱）mailofzl＠126.com。

2014-11-13)

国家科技支撑计划课题，项目编号:2013BAI11B01；贵州省科技重大专项，项目编号:黔科合重大专项字[2011]6019号；贵州省中药现代化专项，项目编号:黔科合中药字[2013]5062号。

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)13-0028-02