高效液相色谱法测定止痒消炎水中苦参碱含量

谭安军

（重庆市永川区中医院，重庆 402160）

高效液相色谱法测定止痒消炎水中苦参碱含量

谭安军

（重庆市永川区中医院，重庆 402160）

目的 建立测定止痒消炎水中苦参碱的含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为Waters Symmetry C18柱（150 mm×4.6 mm，5 m），流动相为甲醇-乙腈-pH为 6.8磷酸盐缓冲液（8∶8∶84），检测波长为210 nm。结果 苦参碱进样量在0.25～2.50 g(r= 0.999 9)范围内与峰面积线性关系良好，平均回收率为99.79%，RSD为1.65%(n=6)。结论 该法简便、准确，可用于该制剂的质量控制。关键词:苦参碱；止痒消炎水；高效液相色谱法

止痒消炎水是《卫生部药品标准·中药成方制剂（第九册）》 收载品种，由苦参、白鲜皮、蛇床子、薄荷脑、冰片等组方，具有消炎、止痒功效，用于夏季皮炎、痱子、皮肤瘙痒等症。其质量标准中收载麝香草酚、水杨酸薄层鉴别研究，未见含量测定控制指标。文献报道，可采用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中蛇床子素的含量[1-2]，气相色谱法检测薄荷脑、冰片、麝香草酚[3-4]。苦参作为本制剂的君药，具有清热燥湿、杀虫的作用，其主要成分为苦参碱和氧化苦参碱。本研究中采用HPLC法测定产品中苦参碱的含量[5-7]，该方法简便易行，重复性好，为完善本品的质量控制体系提供了理论依据。

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱仪（2996PDA检测器，empower系统软件）；SartoriusBP211D型电子天平。苦参碱对照品（批号为110805-200508，含量测定用，中国药品生物制品检定所）；止痒消炎水（市售，批号为140301，140302，140303）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Waters Symmetry C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-乙腈-pH 6.8磷酸盐缓冲液（8∶8∶84）；检测波长：210 nm；柱温：30℃。在此条件下，理论板数按苦参碱峰计应不低于3 000，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

称取苦参碱对照品6.25 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇适量使溶解，并用甲醇定容至刻度，摇匀，即得每1 mL含0.125 mg苦参碱对照品溶液。精密量取样品3.0 mL，蒸干，残渣加水25 mL使溶解，加入浓氨2.5 mL，摇匀，用三氯甲烷提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例，取除苦参外的其他各味药，按制剂工艺制成阴性样品，再按供试品溶液方法制备，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：取2.2项下3种溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，依法测定。结果阴性对照品溶液色谱在苦参碱相对保留时间处未见色谱峰，表明阴性样品对检测无干扰。

线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10，20 μL，注入液相色谱仪。按拟订色谱条件测定峰面积，以峰面积对进样量进行线性回归，得回归方程 A=1 359 293 C-70 686.16，r=0.999 9(n=6)。结果表明，苦参碱进样量在 0.25～2.50 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一苦参碱对照品溶液，连续进样5次，每次10 μL，按拟订条件测定峰面积值。结果的 RSD为0.84% (n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品（批号140301）溶液，分别于 0，1，2，4，6，8，12 h时测定苦参碱的峰面积，结果的 RSD为0.95%（n=7），表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

重复性试验：取同一批号（批号140301）样品6份，分别依法制备供试品溶液，进样测定。结果苦参碱平均含量为0.38 g/L，RSD为1.08%（n=6），表明方法重现性好。

加样回收试验：精密称取已知苦参碱含量的同一批样品 (批号140301)6份，分别精密加入一定量的苦参碱对照品溶液，依法进行含量测定，计算回收率。结果见表1。

表1 苦参碱加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取3批样品，分别制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，按外标法计算样品含量。结果批号为140301，140302，140303的样品中苦参碱含量分别为0.38，0.37，0.38 g/L。

3 讨论

采用HPLC法测定苦参药材及其制剂中苦参碱的含量，已有相当数量的文献报道，色谱柱的选择不尽相同。2010年版《中国药典(一部)》苦参药材含量测定项下选用氨基柱。考虑适用性和成本因素，本试验中选用 Waters Symmetry C18柱。经反复试验筛选，以甲醇-乙腈 -pH为6.8磷酸盐缓冲液（8∶8∶84）为流动相测定苦参碱指标成分，苦参碱目标峰峰形较好，且方法可靠，理论板数较高。

由于供试品组成复杂，溶液颜色较深，直接采用甲醇稀释供试品溶液可能影响色谱柱的分离，降低色谱柱的使用效能。参考文献[5-9]，采用三氯甲烷超声提取、大孔树脂纯化、三氯甲烷液液萃取等方法，结果液液萃取制备的供试品中苦参碱的含量较其他方法高。并对萃取次数进行了研究，试验表明，用三氯甲烷提取4次可将碱化的水溶液中苦参碱提取完全。

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Determination of M atrine Contents in Relieving Itching Anti-Inflammation Fluid by HPLC

Tan Anjun (Yongchuan District Hospital of Traditional Chinese Medicine,Chongqing,China 402160)

Objective To determine the matrine content in relieving itching anti-inflammation fluid.M ethods The HPLC method was adopted with the Waters Symmetry C18column(150 mm×4.6 mm,5 μm)and the mobile phase of methanol-acetonitrile-pH 6.8 phosphate buffered solution(8∶8∶84).The detection wavelength was at 210 nm.Results The linear range of matrine was 0.25-2.50 μg (r=0.999 9),the average recovery rate was 99.79%,RSD=1.65%(n=6).Conclusion This HPLC methods is simple and accurate, and can be used for the quality control of relieving itching anti-inflammation fluid.

matrine;relieving itching anti-inflammation Fluid;HPLC

2014-06-14；

2014-11-20)

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)13-0026-03