丹参注射液对高脂血症合并重症急性胰腺炎大鼠胰腺血流量和组织病理改变的影响

冯　力　王卫星

丹参注射液对高脂血症合并重症急性胰腺炎大鼠胰腺血流量和组织病理改变的影响

冯力王卫星*

【摘要】目的：观察丹参注射液对高脂血症合并重症急性胰腺炎大鼠(SAP)胰腺局部血流量和组织病理改变的影响。方法：32只雄性SPF级大鼠随机分为普通饮食空白组(SO组，普通饲料喂养)、高脂血症组(HL组，高脂饮食喂饲建立高脂血症模型)、高脂+SAP组(HAP组，高脂血症模型建模成功后再建SAP模型)、高脂+SAP+丹参治疗组(SM组，在HAP组基础上加用丹参注射液干预)，每组各8只大鼠。应用多普勒超声检测系统测定各组胰腺局部血流量，下腔静脉取血测定各组血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及淀粉酶(AMY)水平，取各组大鼠胰腺行HE染色，观察组织病理学改变，并行病理评分。结果：HL组大鼠胰腺局部血流量明显低于SO组，HAP组更低(P<0.01)，而SM组明显高于HAP组(P<0.01)。HL组和/或HAP组大鼠AMY、TC、TG水平明显高于SO组，SM组则显著降低(P<0.01)。HL组和HAP组胰腺组织分别出现脂肪组织增生、腺泡坏死、出血及炎性细胞浸润、胰腺病理评分显著升高(P<0.01)，而SM组的上述病理组织学变化缓解，胰腺病理评分也明显下降(P<0.01)。结论：丹参注射液能够改善高脂血症合并SAP大鼠的胰腺血流状况和组织病理学变化。

【关键词】高脂血症；重症急性胰腺炎；丹参；胰腺血流

Effect of Salvia Miltiorrhiza on Pancreatic Blood Flow in Hyperlipidemic Rats with Severe Acute Pancreatitis

FENG Li, Wang Wei-xing*

Department of Hepatobiliary Surgery，Renmin Hospital of Wuhan University，Wuhan 430060,China;*Corresponding author

【Abstract】Objective: To observe the effect of salvia miltiorrhiza on pancreatic blood flow in hyperlipidaemia rats with severe acute pancreatitis.Method: 32 SPF S-D rats were randomly divide into four groups: normal diet control group(SO group), fat diet group(HL group), fat diet and SAP group(HAP group), fat diet and SAP and salvia miltiorrhiza group(SM group).Each group was 8 rats. The rats who received fat diet two weeks can induced the experimental hyperlipidaemia and then the hyperlipemia rats were divided into the sham-operation group, the severe acute pancreatitis group, the salvia miltiorrhiza group.The normal group was divided into sham-operation group and severe acute group. At the 12 hour time point after the each model were made we examined the pancreatic blood flow and the serum levels of amylase(AMY), triglyceride (TG),total cholesterol(TC) and HE staining technique was used to measure the pancreas injury.Results: Compared with the pancreatic blood flow in SO group, the level of HL group conspicuously decreased (P<0.01) and that of HAP group was more lower than HL group (P<0.01) ,and the level of SM group was higher than HAP group (P<0.01).The level of AMY, TC and TG in HL and HAP group were higher than SO group (P<0.01), and these levels in SM group were lower than in HL and HAP group (P<0.01). The adipose tissue hyperplasia, acini necrosis, hemorrhage, inflammatory cell infiltration were found in HL and HAP group, and the grading of pancreas pathology was significantly increased. But the above histopatho-

[作者单位]武汉大学人民医院肝胆腔镜外科，武汉 430060;*通讯作者，E-mail:sate.llite@163.com

本文2015-06-24收到，2015-09-28修回

logical changes in SM group was of alleviation and the the grading of pancreas pathology significantly decreased than HL and HAP group (P<0.01).Conclusion: The salvia miltiorrhiza can improve the pancreatic blood flow and alleviate the damage of pancreas in the hyperlipidaemia rats with severe acute pancreatitis.

【Key words】Hyperlipidaemia; Severe acute pancreatitis; Salvia miltiorrhiza; Pancreatic blood flow

高脂血症是除胆道疾病、酒精性因素外诱发急性胰腺炎(AP)的第三大病因，可以加速胰腺疾病的进展。研究[1]表明，12%-38%的AP患者伴有血脂水平不同程度升高，严重影响AP预后。重症急性胰腺炎(SAP)是AP的严重表现，早期可出现血流动力学改变及全身炎症反应，高脂血症合并SAP的机制尚不清楚，其病理过程可能与机体整体和局部缺血、微循环障碍相关。针对高脂血症合并SAP的治疗方法较多，但尚无突破性进展。中医中药对其治疗已有相关报道，但尚未见到丹参注射液的有关报道。本实验制备大鼠高脂血症合并SAP模型后，采用丹参注射液进行干预，观察其胰腺局部血流量及组织病理变化，为临床应用提供实验依据。

1材料与方法

1.1　实验动物与分组

SPF级雄性SD大鼠32只(购于武汉大学动物中心，合格证编号4200050002679)，体重180-200g。根据数字表法随机分为普通饮食空白组(SO组，n=8)、高脂血症组(HL组，n=8)、高脂+SAP组(HAP组，n=8)、高脂+SAP+丹参治疗组(SM组，n=8)。

1.2　主要试剂、药品及仪器

丹参注射液购自成都天台山制药有限公司(生产批号：Z51020205)； 5%牛黄胆酸钠溶液(STC)购自美国Sigma公司；高脂饲料由北京华阜康公司加工，其配比为普通饲料77%、胆固醇3%、猪油20%。Imcxlab 9100多普勒超声诊断仪购自美国Imex公司。

1.3　建模及给药

SO组以普通饲料喂养2周，余3组先行制备高脂血症模型：参照文献[2]给予高脂饲料喂养2周后24只大鼠全部成模。其中8只作HL组，余16只再行制备SPA模型：实验大鼠禁食12h,自由饮水，采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.3ml/kg),腹部消毒，剑突下正中切口进入腹腔，于胆胰管在十二指肠的开口处逆行插管，将5%的STC以1ml/min匀速注入胆胰管，观察大鼠胰腺大体改变，待胰腺出现水肿、出血、坏死即为SPA模型成功[3]。本次16只大鼠全部成模，留取8只作为HAP组，余8只成模后30min股静脉注入丹参注射液(1ml/100g)[4]，6h后再次给予相同剂量一次，作为SM组。其它各组在相同时间以相同方法注入等量生理盐水。

1.4　观测指标和方法

1.4.1胰腺血流量测定：以上处理完成后12h，各组大鼠再腹腔注射10%水合氯醛麻醉，开腹，在胰头、胰体交界处找到与胰管平行的胰腺血管，采用文献方法[5]将多普勒超声探头与血管成45°夹角，测定胰腺血流量，以频率(kHz)表示。

1.4.2血清淀粉酶(AMY)及血脂水平测定：各组大鼠胰腺血流量测定后，下腔静脉抽血，分离血清，由本院检验科按常规方法检测AMY、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平。

1.4.3组织病理学观察：断头处死各组大鼠后，随即取胰头组织按常规方法进行固定、包埋、切片(3μm)和HE染色，显微镜观察胰腺形态、炎性改变和出血坏死，并进行胰腺病理学评分。评分标准根据Schmidt等[6]的方法，水肿：无水肿0分，轻度组织间隙扩张1分，重度扩张2分；腺泡坏死：无坏死0分，轻度坏死1分，中度坏死2分，中-重度坏死3分，重度坏死4分；出血：无出血0分，有出血1分；炎性细胞侵润：每高倍镜视野内有5个炎性细胞记0.5分，>30个记4分。

1.5　统计学处理

2结果

2.1　各组胰腺局部血流量

单因素方差分析显示，4组大鼠胰腺血流量差异有统计学意义(F=176.30，P<0.01)。与SO组比较，HL组和HAP组胰腺血流量降低(t=5.85，P<0.01)，HAP组降低更明显(t=16.89,P<0.01)，SM组胰腺血流量明显高于HAP组(t=10.48,P<0.01)，但仍低于SO组(t=8.10,P<0.01)。见表1。

表1　各组胰腺局部血流量及病理评分±s，n均=8)

注：与SO组比较，1)P<0.01；与HL组比较，2)P<0.01；与HAP组比较，3)P<0.01

2.2　各组血清学指标

各组AMY、TC、TG差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。HAP组AMY明显高于SO组和HL组(P<0.01)，SM组则显著低于HAP组(P<0.01)。HL组和HAP组TC及TG较SO组明显升高(P<0.01)，SM组较HL和HAP组显著下降(P<0.01)。见表2。

表2　各组血清学指标水平均=8)

注：与SO组比较，1)P<0.01；与HL组比较，2)P<0.01；与HAP组比较，3)P<0.01

2.3　各组胰腺病理改变和评分

SO组胰腺无异常改变；HL组胰腺结构清楚，但胰周脂肪组织增生；HAP组胰腺结构不清、腺泡坏死、有出血及坏死，并伴有炎性细胞浸润；SM组仍见胰腺组织出血、腺泡组织坏死及炎症细胞，但较HAP组轻。见图1。

各组胰腺病理评分显示其差异有统计学意义(F=253.86，P<0.05)。HAP组明显高于SO组及HL组(t值分别为27.85、26.69，P均<0.01)，SM组较HAP明显下降(t=7.60，P<0.01)。见表1。

[本文图1见封3]

3讨论

高脂血症合并急性胰腺炎的发病率正日益增加，仅次于胆源性胰腺炎和酒精性胰腺炎[7]。其发病机制复杂，胰腺局部血流变化是导致胰腺病理改变的重要原因之一，高脂血症严重影响胰腺微血流，脂质聚集，导致胰腺血流动力学改变，使胰腺血液高凝乃至血栓形成，进一步阻塞胰腺微小血管，引起胰腺微循环状态改变[8]，也成为可能机制之一。高脂血症时机体血小板被激活，可释放血管活性物质如血栓素A2(TXA2)等，不仅具有强的缩血管作用，而且能够损伤血管内皮细胞，使其减少扩血管物质前列腺素(PGI2)的分泌，进而加重胰腺的微循环障碍。同时，胰腺和胰周高浓度的TG被胰脂肪酶分解、释放大量游离脂肪酸，进而激活胰蛋白酶原，加重AP。此外，游离脂肪酸还可以直接对细胞产生毒性作用，加重胰腺缺血坏死[9]。上述微循环障碍存在于AP的整个病程中，持续微循环障碍可致水肿型AP进展为出血坏死型AP[10]。高脂血症合并SAP患者的微循环障碍较普通水肿型胰腺炎更严重。因此，早期改善机体的微循环障碍对疾病转归具有重要意义。

丹参已广泛应用于临床，其具有祛瘀止痛、活血通络、清心去烦等多重功效。丹参的主要化学成分为水溶性酚酸和脂溶性丹参酮类，具有抑制氧自由基[11]、解除血小板聚集[12]、调节脂质炎性介质代谢[13]、减少TXA2产生、扩张血管[14]等作用。近年来被应用于AP的实验研究中，其结果表明对AP过程中存在的严重微循环障碍具有重要调节作用。本研究应用丹参注射液治疗HAP大鼠，观察其胰腺局部血流和组织病理学变化，结果显示，HAP大鼠胰腺局部血流较HL组明显下降，应用丹参注射液治疗后，血流量显著增加，胰腺的病理损害也明显减轻。因而认为丹参注射液对高脂血症合并SPA大鼠具有明确的治疗作用，其机制可能与丹参增加胰腺局部的血流量有关。

◀

冯力(1980-)，男，土家族，硕士研究生，研究方向为胰腺疾病的临床诊疗

参考文献

1Toskes PP. Hyperlipidemic pancreatitis[J]. Gastroenterol Clin North Am,1990,19(4):783-791.

2张伟，王兴鹏，俞卓伟，等. 高脂血症相关性急性胰腺炎大鼠蛋

白质组学分析[J]. 中华医学杂志,2008,88(16):1 132-1 136.

3徐健雄，刘黎明，邓文宏，等. 花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用[J]. 微循环学杂志,2014，24(2):9-13.

4张建新，程国祚，李龙，等. 丹参对急性胰腺炎大鼠肠微循环的影响及其保护作用[J]. 中华肝胆外科杂志,2002，8(12):50-51.

5陶坤，张义胜，张晓峰，等. 血栓素前列环素在大鼠轻症急性胰腺炎向重症急性胰腺炎转变中的变化和意义[J]. 肝胆外科杂志,2007,15(3):226-228.

6Schmidt J, Rattner DW, Lewandrowski K, et al. A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy[J]. Ann Surg,1992,215(1):44-56.

7巴图尔·尼牙子，赵凯亮，邓文宏，等. 罗格列酮对高脂血症大鼠合并重症急性胰腺炎肺损伤的作用机制[J]. 微循环学杂志,2012，22(4):80-84.

8Hackert T, Pfeil D, Hartwig W, et al. Platelet function in acute experimental pancreatitis induced by ischaemia-reperfusion[J]. Br J Surg,2005,92(6):724-728.

9王刚，孙备，姜洪池. 高脂血症急性胰腺炎的研究进展[J]. 中国普通外科杂志,2005，14(11):63-65.

10Banerjee AK, Steele RJ. Current views on the pathophysiology of acute biliary pancreatitis[J]. Gut,1995,36(6):803-805.

11张铁，陈铁良. 丹参对急性胰腺炎大鼠氧自由基水平的影响[J]. 中国中西医结合外科杂志,2004，10(01):38-40.

12李鲁杨，唐占府，孔令钧. 复方丹参注射液对冠心病患者血小板活化率的影响[J]. 山东中医杂志,2001，20(04):204-205.

13Li M, Zhao C, Wong R N, et al. Inhibition of shear-induced platelet aggregation in rat by tetramethylpyrazine and salvianolic acid B[J]. Clin Hemorheol Microcirc,2004,31(2):97-103.

14余晓兵，陈玉石. 丹参治疗急性坏死性胰腺炎的实验研究[J]. 中华医院感染学杂志,2004，14(02):58-60.

作者简介：本文第一

[中图分类号]R576

[文献标识码]A

[文章编号]1005-1740(2015)04-0025-04

doi：10．3969／j．issn．1005－1740．2015．04．006

微循环学杂志，2015，25（4）：25－27，31

© 2015 CHINESE JOURNAL OF MICROCIRCULATION